Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期糖尿病肾病患者血清糖基化终末产物水平影响因素分析

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1、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期糖尿病肾病患者血清糖基化终末产物水平影响因素分析作者：张国欣,徐金升,阮琳,薛兰芬单位：河北省石家庄市第一医院肾内科【摘要】目的探讨糖化血红蛋白(HbA1c)、血肌酐水平及糖尿病肾病分期对血清糖基化终末产物(AGEs)水平的影响。方法随机选取自2007年1至9月在石家庄市第一医院肾脏内科住院明确诊断糖尿病肾病患者27例，包括Ⅲ期8例，Ⅳ期11例，Ⅴ期未进行血液透析患者8例。采用竞争性ELISA法检测血清AGEs水平。结果Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期2型糖尿病肾病患者血清AGEs水平随着分期的进展而增高，三期间差异有统计学意义(P<0.05)

2、，糖尿病肾病患者血肌酐水平增高(P<0.01)。2组血清AGEs水平差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期糖尿病肾病患者中血清AGEs水平与分期及HbA1c有关(标准回归系数为0.548、0.327，P<0.05)。结论2型糖尿病肾病患者HbA1c和分期均是影响血清AGEs水平的因素，分期的影响可能更为重要。【关键词】糖尿病肾病;糖基化终末产物;糖化血红蛋白;糖尿病肾病分期;血肌酐　糖基化终末产物(AGEs)是还原糖(如葡萄糖、果糖及葡萄糖6磷酸等酮糖)与蛋白质、氨基酸等的游离氨基酸通过一系列复杂的非酶促反应形成

3、的结构多样的不可逆聚合物[1]。在不同组织中AGEs的聚集可以通过诱发氧化应激等机制导致糖尿病的各种慢性并发症[2]。肾脏是氧化应激反应比较敏感的组织，所以AGEs在糖尿病肾病的发生发展中起着重要作用。本试验探讨了糖化血红蛋白(HbA1c)、血肌酐水平及糖尿病肾病分期对血清AGEs水平的影响，以期为进一步研究AGEs在糖尿病肾病中的作用提供依据。　　1资料与方法　　1.1一般资料2007年1至9月在我科住院明确诊断糖尿病肾病患者27例，男15例,女12例;平均年龄(64±7)岁;所有患者糖尿病病史>5年,查眼底均合并视网膜

4、病变,既往无高血压及肾脏病史。按Mogensen的DN分期:Ⅲ期DN患者(尿微量白蛋白30～300mg/24h)8例,Ⅳ期DN患者(尿蛋白定量>0.5g/24h)11例,Ⅴ期未进行血液透析DN患者血肌酐(Scr)>133μmol/L[(239±98)μmol/L]8例。　　1.2方法血清AGEs的检测采用竞争性ELISA法，由于AGEs存在共同的抗原决定簇，因此，可以用单一AGEs修饰蛋白的抗体检测总AGEs。在多种AGEs修饰蛋白中抗AGERNase抗体能够非选择性地识别所有AGEs复合物，但与非AGE

5、s修饰的蛋白及Amadori物质不起反应。　　1.2.1标准曲线及标准方程的建立[3]：3mg/LAGEAg100μl包被96孔板(pH9.6碳酸氢盐缓冲液)，37℃2h，4℃过夜，封闭1h(封闭液0.01mmol/L,PBS1%BSA,150μl)，洗3次;加入不同浓度标准AGEAg(分别为100、10、8、4、2、1、0.1mg/L)和AGEAb各50μl(1∶1000)，同时设总对照(不加标准AGEAg)和空白对照(不加AGEAb)，室温孵育2h，振荡，洗3次;加AKP羊抗兔IgG(1∶4000,Sigm

6、a)100μl,37℃孵育1h，洗6次，稀释液均为0.01mmol/LPBS和0.5%Tween20和2%山羊血清混合液，清洗液均为0.01mmol/LPBS和0.5%Tween20的混合液，均设复孔。最后pNPP底物(Sigma)显色，在405nm波长下读取A值，至总对照A值在1.2～1.5，计算标准AGEAgA比值=(标准A405空白A405)/(总A405空白A405)。各标准浓度AGEAgA比值与其浓度之间关系模拟方程y=1/(1+a×b),拟合得方程y=1/(1+0.1170×0.7081)。经

7、统计学检验R=0.9915,R2=0.9830，P<0.01。表明通过此方程，标准A405值能反映其AGEs水平。　　1.2.2血清AGEs检测：-80℃冰箱保存的DN患者血清标本经1∶5稀释后进行AGEs检测，均设复孔，取其平均A值代入上述方程计算出各标本AGEs水平。　　1.3统计学分析应用SPSS10.0统计软件，糖尿病肾病患者AGEs水平采用方差分析，糖尿病肾病患者血清AGEs水平与年龄、性别、HbA1c水平及糖尿病肾病分期之间关系采用多元逐步回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期组血

8、清AGEs水平两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。　　2.22型糖尿病肾病患者中血肌酐水平正常组与升高组血清AGEs水平分别为(32&plusm