S100A14在食管鳞癌中的遗传变异及其功能研究

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1、北京协和医学院博。l：学位论文摘要S100蛋白在肿瘤的发生和转移中起到重要的作用，我们前期通过半定量RT-PCR的方法研究发现Sl∞家族的16个成员在食管癌中存在明显的表达差异，其中包括S100A14。为了进一步明确S100A14在食管癌中的表达差异，研究其表达与临床病理参数之问的关系，本文通过免疫组织化学、WesternBlot分析在蛋白水平确证了其在食管癌中的表达变化，并发现S100A14的表达与分化程度明显相关。功能实验研究表明，过表达S100A14可促进细胞与Fibronectin的粘附、侵袭，但可抑制细胞的运动；敲减S100A14可促进细胞的运动。分子机制研究表明S

2、100A14可影响E-cadherin、N—cadherin的表达，关于其发挥功能的确切机制还有待进一步阐明。在本文的第二部分，我们探寻SIOOAl4基因中具有生物学作用的遗传变异、阐明其作用机制、并研究其与食管癌易感性的关系。对30例DNA样品测序以筛查SIOOAl4的SNP位点并通过一系列生物学实验来确定功能性的SNP。测序结果发现SIOOAl4基因存在4个单核苷酸多态，分别位于启动子区(-43A>G)、5’非翻译区(461G>A)、3’非翻译区(1493A>G、1545A>T)。生物化学实验表明461G>A变异可影响其所处DNA序列与转录因子p53的结合从而影响了S10

3、0A14对p53的负反馈调节。以病例一对照研究方法分析1021个食管癌患者和1253个正常对照中461G>A遗传变异分布频率的差异，以多变量logistic回归计算的比值比(OR)及其95％可信区限(CI)表示基因型与食管癌易感性的相关程度。结果表明461A等位基因与食管癌发病风险增高相关(OR=I．23，95％CI=1．04-1．46)。461A等位基因与吸烟交互作用可增加食管癌发病风险。以上结果表明S100A14在食管癌细胞的粘附、侵袭和运动等过程中起到重要的作用。SIOOAl4的功能性遗传变异可影响p53的结合与食管癌易感性相关。关键词：S100A14；食管癌；分化；粘

4、附；侵袭；迁移；基因多态；p53北京协和医学院博：}=学位论文AbstractSl00proteinsplayimportantrolesintumorigenesisandmetastasis．OurpreviousstudybysemiquantitativeRT-PCRshowedthattheexpressionlevelofsixteenmembersofS100familyincludingS100A14wassignificantlyalteredinEsophagealSquamousCellcarcinoma(ESCC)．Inordertofurtherch

5、aracterizeexpressionpatternofS100A14andtherelationshipwithclinicopathologicalfeatures，Westernblotandimmunohistochemicalanalysiswereperformedinprimarytumorsandmatchednormaltissuesandtissuemicroarrayrespectively．TheresultsindicatedthattheexpressionofS100A14wasdownregulatedinESCCsamplescompare

6、dwithmatchednormalcounterparts．StatisticalanalysisrevealedthattherewassignificantcorrelationbetweenS100A14expressionanddifferentiationgradeinESCC．FunctionalstudiesindicatedthatS100A14overexpressionpromotedcelladhesiontoFibronectin-coatedwellsandinvasivecapabilities，butinhibitedcellmotilityc

7、apability．Inaccordancewithaboveresults，S100AI4RNAipromotedKYSE150cellmotilitycapability．MolecularmechanismstudiesshowedthatE-cadherinwasup—regulatedwhereasN-cadherinwasdown-regulatedinS100A14RNAicells．However,theprecisemechanismstillneedsfurtherinvestiga