胰腺星状细胞在胰腺癌新生血管中的作用

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1、上海交通大学博士学位论文胰腺星状细胞在胰腺癌新生血管中的作用姓名：胥明申请学位级别：博士专业：内科学（消化）指导教师：王兴鹏20070523上海交通大学博士学位论文胰腺星状细胞在胰腺癌新生血管中的作用上海交通大学学位论文原创-l生声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。／}学位论文作者签名：纠分一日期：200

2、7年3月25日附件五上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于，不保密回。(请在以上方框内打“4”)指导教师签名日期：口7年f月y蛔日期：哆砰l，月髟口上海交通大学博士学位论文胰腺星状细胞在胰腺癌新生血管中的作用摘要胰腺星状细胞(Pancre

3、aticstellatecells，PSCs)是参与慢性胰腺炎发生、发展的效应细胞，晚近研究证实PSCs在胰腺癌的的生长、浸润和转移过程中亦起重要作用，我们前期研究发现人胰腺癌石蜡标本中肿瘤细胞周围有大量活化的PSCs，且该区域新生血管密度较高，因此PSCs可能参与胰腺癌早期血运转移事件。我们推测PSCs与胰腺癌细胞之间存在互动关系，肿瘤细胞分泌诸多生长因子刺激PSCs活化，而PSCs活化后分泌基质金属蛋白酶(Matrixmetalloprteinases。MMPs)促进细胞外基质(Extracellularmatrix，ECM)降解并诱导新生

4、血管生成，从而促使胰腺癌早期血运转移，本研究从新生血管生成角度，探讨PSCs在胰腺癌早期血运转移中的作用。本研究分以下四个部分：第一部分，体外检测人PSCs合成、分泌VEGF，IL-8及bFGF促血管生成因子的表达及其意义。旨在检测体外原代培养的人PSCs中有无VEGF，IL-8及bFGF基因及蛋白的表达及其活性。通过原代分离培养、鉴定人PSCs株，运用ELISA，RT-PCR和Western印迹等方法检测PSCs上清液及其细胞株中VEGF，IL-8及bFGF含量。研究表明VEGF、IL-8及bFGF基因及其蛋白在人PSCs中有表达，PSCs上

5、清液中有高活性的VEGF、IL一8及bFGF。提示PSCs能独立合成并分泌促血管生成因子。第二部分，PDGF及其单克隆抗体对PSCs分泌VEGF，1I_,-8及bFGF的调节作用。上海交通大学博士学位论文胰腺星状细胞在胰腺癌新生血管中的作用在人PSCs株中加入不同浓度梯度的PDGF及其单克隆抗体，观察其对VEGF、IL-8及bFGF基因和蛋白表达的影响。选择3～6代PSCs株中，分别加入10，25，50ng／ml的PDGF-B及5，10ng／ml的PDGF-Ab，孵育36小时，运用PT-PCR，Western印迹等方法检测VEGF、IL-8及b

6、FGF基因及蛋白的表达，半定量分析PDGF及其单克隆抗体对上述细胞因子的影响作用。PDGF．BB能够上调PSCs合成VEGF，IL-8，其中50ng／ml的PDGF-BB对上述细胞因子的作用最明显。bFGF基因及蛋白的表达不受PDGF-BB的影响，PDGF．AB在一定程度上抑制VEGEIL-8的表达。提示PDGF—BB可能参与并且上调PSCs表达VEGF,IL．8。第三部分，PSOs在体外对新生血管形成的影响。观察PSCs体外条件下对人脐静脉内皮细胞的促增殖作用及其小管成形现象。运用MTT，FCM观察人PSCs上清液对HUVEC细胞周期的促增殖

7、、分裂作用；体外小管成形试剂盒研究PSCs上清液对HUVEC内皮连接呈环形管状结构的作用。M1q"结果提示不同浓度的PSCs上清液对人脐静脉内皮细胞有明显的促增殖作用(P<0．05)，但不同浓度组间无统计学差异；FCM研究提示PSCs上清液能提高人脐静脉内皮细胞周期中S期+G2／M期的比例；在体外小管形成实验中PSCs上清液与对照组相比，内皮细胞有环形中空的管状结构形成，细胞之间连接紧密。在体外条件下PSCs上清液对人脐静脉内皮细胞有明显的促增殖作用。第四部分，PSOs在体内对胰腺癌SWl990细胞新生血管形成的影响。研究PSCs对裸鼠胰腺癌移

8、植瘤模型中微血管密度和鸡胚尿囊膜模型中血管生长的影响及其临床意义。体外培养PSCs和人SWl990细胞株，按一定比例混合后注射到裸鼠皮下，同时设对照S