fapα在胰腺癌细胞中的表达与其对胰腺癌生物学行为的影响

《fapα在胰腺癌细胞中的表达与其对胰腺癌生物学行为的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、FAP-α在胰腺癌细胞中的表达及其对胰腺癌生物学行为的影响摘要FAP-α在胰腺癌细胞中的表达及其对胰腺癌生物学行为的影响背景与目的人胰腺癌是一种预后极差的高度恶性肿瘤。其发病率和死亡率之比为1：0.99。五年生存率<5％，两年生存率仅为20％。往往在初次就诊时，80％的患者只能接受姑息性治疗，而剩余20％的患者即便能够接受手术治疗，术后仍出现较高复发率。在胰腺癌中，源于导管上皮细胞胰腺导管腺癌（PDAC）最多见，占胰腺肿瘤的85%-90%。促纤维结缔组织增生是PDAC的一个显著的病理学特征。在所有上皮细胞恶性肿瘤中，PDAC促纤维结缔

2、组织增生的改变远比其它肿瘤更为明显。研究表明，促结缔组织增生在肿瘤发生、发展、转归及耐药等方面都起到至关重要的作用。有学者报道大量肿瘤相关成纤维细胞（Tumor-associatedfibroblasts,TAFs）的存在和促结缔组织增生关系密切，TAFs可以通过表达各种细胞因子和蛋白等方式来影响肿瘤间质的形成和变化，而成纤维细胞激活蛋白（fibroblastactivationprotein-α,FAP-α）就是TAFs所表达的一种标志性的蛋白。近年来，随着肿瘤学和分子生物学的发展，分子靶向治疗已经成为了肿瘤治疗的热点和主要发展方向

3、，而这种治疗主要就是以肿瘤的分子靶位作为基础，因此寻找理想的分子靶标是靶向治疗的关键因素。TAFs被认为是肿瘤间质中最具潜力的靶标之一。FAP-α是一种膜结合糖蛋白，属于丝氨酸蛋白酶类，由两个亚单位组成分子量为170kDa的二聚体，具有分解明胶和I型胶原的活性以及类似二肽肽酶的活性，能够降解许多二肽和I型胶原。这种蛋白分解活性可见于原发性人上皮性肿瘤中，因此FAP-α在肿瘤间质的形成、再塑和维持上可能起重要作用。研究表明，伴少量FAP-α表达的间质反应使乳腺癌侵袭性更强。基质降解是癌细胞侵袭和转移的主要机制之一。FAP-α作为丝氨酸蛋

4、白酶，在肿瘤组织中很有可能直接溶解与其相邻的细胞外基质或者激活另外一种蛋白酶原而间接溶解细胞外基质，促进癌细胞的侵袭。FAP-α能够选择性的高表达于多种上皮组织来源恶性肿瘤间质中的的肿瘤相关成纤维细胞（TAFs），却几乎不表达于正常组织及良性上皮肿瘤间质中静息成纤维细胞，且罕见于肿瘤细胞中。90%以上的上皮性肿瘤(肺、大肠、乳腺癌的原发和转移瘤)中间质FAP-α呈阳性。FAP-α阳性间质成分通常占肿瘤组织的50%～90%，是丰富的靶目标结构。FAP-α主要表达于间质TAFs中，而TAFs是结缔组织增生的最重要因素之一。这些都提示FAP

5、-α是一种理想的肿瘤间质靶标。-1-第二军医大学博士学位论文由于一些正常的胰岛A细胞被发现偶尔也可以表达FAP-α，那么胰腺癌细胞会不会也表达FAP-α；如果表达，那么它会对肿瘤细胞在体内和体外产生什么样的作用，其作用会不会和TAFs中的FAP-α产生叠加效应，对未来针对FAP-α的靶向治疗有什么意义，这些都非常值得研究。同时，有证据提示PAP可通过促进胰腺癌纤维结缔组织增生来促进肿瘤的生长和转移的。所以本文通过研究胰腺癌组织中FAP-α对胰腺癌包括促纤维结缔组织增生在内的生物行为学的影响。方法（1）PDAC标本；选取PDAC存档石蜡

6、包埋标本共198例（组织芯片105例，常规切片93例），所有病例均经病理证实，且术前无放、化疗史。患者的基本信息包括就诊原因、既往史、术前有无接受治疗、手术时间、肿瘤部位、术中判断血管浸润情况、病理巨检以及镜检结果等临床病理资料；对其中139例病例进行随访，时限为33个月，99例接受随访，40例失访。所有病例均经长海医院伦理道德委员会批准。对93例PDAC常规HE染色切片，观察肿瘤组织内纤维化灶（fibroticfocus，FF）。显微镜下观察在细胞内出现棕黄色颗粒为FAP-α阳性。结合文献对PDAC中癌细胞FAP-α的表达采用二级计

7、分法,分别对染色强度及阳性细胞数量计分。同时采用Westernblotting检测FAP-α蛋白在6株PDAC细胞株（Miapaca-2、AsPC-1、SW1990、BxPC-3、Panc-1及Capan-1）中的表达。选择FAP-α低表达的细胞株用于后续试验。（2）FAP-α过表达慢病毒载体构建和感染：成功构建了FAP-α过表达的慢病毒载体FAP-GFP-LV，并用其感染AsPC-1细胞株，并设立阴性对照（PGC-FU）、处理组（感染慢病毒pGC-FU-FAP-α）和空白对照组，对三组细胞进行细胞功能实验，包括克隆形成，流式细胞仪测

8、定细胞周期，MTT法研究细胞生长情况。（3）裸鼠成瘤实验：18只4-6周龄雄性裸鼠均分为3组：空白对照组、阴性对照组和处理组。每只小鼠皮6下注射0.2ml的浓度为5×10/ml的各组AsPC-1细胞。观察肿瘤生长速度，3