应用sirna敲低tpm3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞生物学行为的影响

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1、硕士学位论文应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺论文题目：癌细胞生物学行为的影响InfluenceofsmallinterferingRNAtargetingTPM3geneonbiologicaleffectsofratpancreaticcancercells研究生姓名:马翔指导教师:鲁正学科专业:外科学研究方向:胰腺外科论文工作时间:2011年11月至2012年8月学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行实验研究工作所取得的成果，本论文中不包含其他人已经发表或已经获

2、取得的研究成果。在本论文撰写中所引用其他研究者的研究内容和成果时已在论文中给予特别标注和明确说明。对本论文的实验研究以及论文撰写过程中给予帮助和建议等贡献的其他人士，也已作了致谢说明。本人完全理解本声明的法律责任，以及所涉及的结果将由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日关于学位论文著作权的共享声明根据《中华人民共和国著作权法》和《高等院校知识产权管理条例》，本学位论文，题目：应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞生物学行为的影响，是研究生在导师指导下完成的职务作品，得到蚌埠医学院相关部门科室的物质技术

3、和经费支持，因此，本学位论文的著作权由研究生，导师和蚌埠医学院三方共同享有，均享有署名权和使用权等权益；本学位论文成果归属蚌埠医学院。根据国家学位授予条例，学校对本学位论文有使用权，包括保存本学位论文；因教学和科研的目的，保留在图书馆被查阅或借阅；学校可根据国家规定将本学位论文送交国家有部门保留和使用。学校在公布本学位论文的全部或部分内容时，应保障研究生和导师的署名权等权益。研究生和导师在公开发表本学位论文的全部或部分内容时必须保障学校的署名权等权益，即在发表论文时蚌埠医学院及相关部门科室应署名为作者单位。声明人完全理

4、解本声明的法律责任。研究生签名：导师签名：日期：年月日目录中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„21前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„52.1实验动物„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„52.2主要试剂和耗材„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„52.3主要实验仪器„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„

5、62.4实验方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„63结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„153.1大鼠胰腺癌模型的建立„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„153.2免疫组化染色结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„153.3胰腺癌细胞的原代及传代培养„„„„„„„„„„„„„„„„„153.4转染效率的测定„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„163.5RNA干扰后TPM3mRNA的表达„„„„„„„„„„„„„„„„„163.6细胞侵袭能力及迁移能力

6、的测定„„„„„„„„„„„„„„„„163.7平板克隆形成能力的观测„„„„„„„„„„„„„„„„„„„164讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„185结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„216附图„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„227参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„288致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„319附录„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„

7、„„32附录A中英文术语缩略语对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32附录B个人简历及发表论文„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„33附录C综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„34应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞生物学行为的影响中文摘要目的：探究TPM3在大鼠胰腺癌细胞中对其生物学行为的影响并初步阐述其可能的分子机制。方法：1.通过在大鼠胰腺中包埋DMBA的方法建立大鼠胰腺癌模型。2.对差异蛋白TPM3进行免疫组化验证3.通过机械分离和酶阶段消化分离胰腺癌组织的

8、方法获取大鼠胰腺癌细胞，体外传代培养获得纯度较高的细胞后，应用siRNA敲低大鼠胰腺癌细胞中TPM3基因的表达；通过RT-PCR技术检测其沉默效果。4.通过Transwell实验和平板克隆实验分别对细胞的侵袭、迁移能力及生长增殖能力进行观察。结果：1.经病理验证模型组有37.83%（14/37）形成胰腺癌，证明大鼠胰腺癌模型建立成