mir-1285对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制

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1、《诚如皆聲化．临床医学专业学生毕业论文．／％（八年制）’＇呼！巧学校代码：１００２３！２００７０学号１０６６Ｍ－ｌＭＳｉＲ对膜腺癌细胞恶性生物学巧为的泰响及作用机制专业年级：北京协和医学院临床医学专业２００７级姓名；黄华导师；张太平教授北京协和医学院临床学院完成日期：２０１５年６月目录摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３刖目５一－第部分ＭｉＲ１２貼生物学功能探索８—＞实验材料８二、实验方法．１１：Ｅ、实验结果１９四、讨论３６五综论３８－第二

2、部分ＭｉＲ１２８５的靴基因预测３９一、预测方法．３９二预测结果３９Ｓ、讨论．４０－第；部分Ｍ瓜１２８５的祀基因初步验证及下游通路探索４２—＞实验材料４２二、实验方法．４６兰、实验结果５１四、讨论５５五综讼５８总结与展望５９参考文献６０缩略词表６５６６参考文献．７１Ｒｅｖｉｅｗ２７４Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ８４ＷＭ８９独创性声明、学位论文版权使用授权书９１摘要背景一膀腺癌早期诊断困难、恶性程度高，是预后最差的恶性肿瘤

3、之，５年生存率低于７％。ＭｉＲＮＡｓ因可同时参与肿瘤的増殖、调亡、耐药及侵袭等多个功能通路一－－。ｍ－ｍ／的调控而受到广泛关注ｉＲ１２８５属于ｉＲ６１２／１２８５３１８７５ｐ簇中的员，目前只，有在肝癌和肾细胞肾癌中有所报道，但其在膀腺癌中的调控机制仍不明确因此我－入研巧其对膜腺癌増殖们将ｍｉＲ１２８５作为本研究的研巧对象，深、周期、化疗敏感性、侵袭、迁移、调亡等恶性生物学行为的影响，并寻找其鞭基因，探索其调控机制。一ＹＡＰ１蛋白是Ｈｉｐｐｏ信号通路的主要效应因子之，近两年来大量研究证实其在多种恶性肿瘤中均发挥促癌作用。

4、目的－１．明确ｍ１２８５对膜腺癌细胞、周期、化疗敏感性、侵袭、迁移、调亡等ｉＲ株增殖表型的调控作用；２－．明确ｍｉＲ１２８５的祀基因；－２８５３．初步探索ｍｉＲ１及範基因的下游信号通路。方法ＰＣＲ－２８５在各细本研究首先通过实时定量（探针法）检测检测ｍｉＲ１施系中的表达量，并选取细胞株作为研巧对象。随后，通过脂质体瞬时转染法改变细胞内源－－性ｍ－ＣＣＫｍｉＲ１２８ｉＲ１２８５的表达后，采用８细胞増殖实验检测５对膜腺癌细胞增殖能力和化疗敏感性的影响，采用ＰＩ单标记流式细胞术检测细胞周期，采用ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法

5、检测细胞迁移和侵袭能力，采用ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双标记流式细胞术检测细－胞潤亡，验证ｍｉＲ１２８５对膜腺癌细胞系恶性生物学行为的影响。随后，通过生物ｍＲ－８５信息学数据库预测ｉ１２的班基因，将多个数据库预测到的结果进行比对，并实时定量ＰＣＲ（染料法）和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法分别检测祀基因ｍＲＮＡ和蛋白的表达，一ｍ－－同时进步验证ｉＲ１２８５ＹＡＰｌ的下游效应蛋白的表这水平。结果－１．ＭｉＲ１２８５在族腺癌耐药株中较亲本株低表达；－一．体外试验中１２８Ｇ１Ｓ期２，ｍｉＲ５可显著抑制膜腺癌细胞增殖，抑制族腺癌细胞

6、转化，增加吉西他滨化疗敏感性，抑制细胞迁移和侵袭能力，促进膀腺癌细胞调亡；３－ｍＲＮＡ翻译的途．ＭｉＲ１２８５的範基因为ＹＡＰ１，可能通过抑制ＹＡＰ１径抑制ＹＡＰ１蛋白表达；１－－４－．ＭｉＲ１２８５ＹＡＰｌ游通路蛋白包括下，ＥＧＦＲ、ｃａｔｅｎｉｎ、Ｂｉｍ、ＰＴＥＮ等。ｐ结论－口８１．ＭｉＲ５通过下调ＹＡＰｌ蛋白表运，在膜腺癌细胞株中发挥抑癌作用；－２、－ｔ－．ＥＧＦＲｐｃａｅｎｉｎ、Ｂｉｍ、ＰＴＥＮ等蛋白参与ｍｉＲ口８５ＹＡＰ１对族腺癌细胞恶性表型的调控。ｍ－关键词：族腺癌；ｉｃｒｏＲＮＡ；ｍｉＲ

7、口８５ＹＡＰ１疗耐药；；化２－１２８５ＭｉｃｒｏＲＮＡＴａｒｅｔｓＹＡＰｌａｎｄＩｎＷｂｉｔｓＣｅｌｌＧｒｏｗ化ｇ，Ｇｌ／ＳＴｒａｎｓｉ村ｏｎＣｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＭｉｒａ村ｏｎａｎｄＩｎｖａｓｉｏｎａｓ，，ｇ，ｗｅｌｌａｓＰｒｏｍｏｔｅｓ乂ｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎＨｕｍａｎＰａｎｃｒｅａｔｉｃＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓＡｂｓｔｒａｃｔＢａｃｋｇｒｏｕｎｄＰａｎｃｒｅａｔｉｃｄｕｃｔａｌａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａＰＤＡＣｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｌｅａｄｉｎｃａｕｓｅｓｏ

8、ｆｃａｎｃｅｒ（）ｇ〇ｗ－ｄｅａｔｈｓｉｎｔｈｅｗｏｒｌｄｉｔｈａ５ｅａｒ