树突状细胞疫苗在胰腺癌免疫治疗中的作用

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1、华中科技大学博士学位论文树突状细胞疫苗在胰腺癌免疫治疗中的作用姓名：唐朝晖申请学位级别：博士专业：普通外科指导教师：邹声泉2003.4.1华审辅唾旌v走拳固遗愿擘踺德士学位镶文树突状细胞疫苗在胰腺癌免疫治疗孛的作用中文摘要洒荔旋／、罗／一7f前裔尸／＼7《近年来胰腺癌的发癞率逐渐升高，2001年其新发病僦，在欧洲为50，＼000饿，在美蚕为29，000骥。在我阑虽秃具薄酶统计数据，懂夯是逐年升黼，观已占到消化道肿瘤的第四位殿肿瘤相关死亡率的辅十一位。胰腺癌是目前最难治疗的恶性肿瘤之一，常规治疗方法(手术、放、化疗)作耀

2、有隧，5年生存率仍然较低，盈这些治疗措藏常俘鸯骝鼹翡损鹰及毒谶律愆，并难汉鳃决转移积复发豹离题，故瞧床对耨疗法酌研究寄予了厚望。肿瘤的免疫治疗主要魁通过纠正肿瘤病人的免疫缺陷，崩幼患者自身的特冥性抗瓣瘴反应，摆对燮安全、裹效，故以胖瘤疫苗梵基稿酶主动免疫治疗成淹来寒磅发瓣重点。因为肿瘤细胞具有兔疫原性低、MHC分子表达异常、缺乏共刺激分子表达，。熊分泌一些免疫抑制因子等特点干扰了T细胞蒯’其识别，故尽管髂浅存在着多静兔疫簸视瓿壤，毽黪癌爨麓蘩避免疫髓褫在薅蠢发生，发液，撼至远处转移。襁机体的抗肿瘤免疫中，细胞免疫媳主要

3、形式，如何激发机体产生有效的揽肿瘤细胞免疫，成为提高免疫治疗疗效的关键。随着对枫薅撬翳瘤免疫应答、T缨魏滔谯槐簇诀识褥逐渐深入，撬蒙提璺缁臆(APC)在T细魏奔导的抗瓣瘤细胞免疫中的锌露得到广泛的重视。树突状细胞(DC)是体内功能最强的专职抗原提呈细胞，其能掇取和加工抗华母秘裱_走孝簿遘鑫孝拣原，表达高水平MHC，I、MHC．II类分予、共刺激分子和粘附分子，并分泌多种细胞因子，其能有效刺激产生大最效应T细胞，能诱导其迁移到肿瘸部位，并保持长期存在，在枧体抗肿瘤反应中发摆赣重要作用。DC不仅熊最有效土篷诱学泛MHC类分

4、子限制的外源蛋自挠鞭的免疫应答，蕊且具有对非蛋白类抗原的加工、呈递功能。DC又可作为免疫佐剂，诱导未致敏T细胞的免疫应答或免疫耐受。人们通过改构DC，以其为基础制成魏瘤疫整，哥多途径诱导穗体产生特舅憔抗辨瘗免疫，溅已有DC疫蓖在肾癌、黑色素瘤、小儿纤维肉瘤等中应用的报告，从这必实验结果可看出接种DC疫苗后机体对肿瘤的免疫监视作用的缺陷得以修复，能主动诱导寝主产生蠢效、特异性懿抗瓣瘤免疫癍签，吾

5、导CTL对辨瘸细照熬缨魏毒彳乍阕，抑制了荷瘤的生长，甚至诱发了肿瘤的消退，鼹示了其作为一种临床肿瘤辅助治疗手段的良好前景。有鉴

6、于此，本研究通过从胰腺癌患畿外周血快速的分离与缝化DC，研究了其生物学特性，以期揭示胰腺癌患者的免疫抑制状态与DC功熊缺陷间的关系，并使用胰癌细胞裂解物修饰DC后制成DC疫苗，在体外与体内检测其诱导的特异性抗胰癌免疫成镣。还通过转染对T细胞有多种调节功麓酶毅型缨黪戮子玩-

7、8磅究了冀对癌纲赡裂解物修搴露的DC疫萤的增强作用，为随后可熊的临床的应用打下基础。华中甜艇走擘簿逮匿擘瞎第一部分胰腺癌患者外周血中树突状细胞的生物学特征嚣的飘察骧豫癌您者外周盔中树突专跫缀簏(DC)基JN态及功麓特征，尝试快速从胰腺癌患者外周觑中纯

8、化与扩增DC的有效方法，以及探讨胰腺癌的免疫抑制状态与DC功能缺陷间的关系。方浚鑫整康人翥获豫瘀意者癸满盘中簌搂分离塞IX；或先放努蘧盘中分离出雄核细胞(VBMC)；再将PBMC与GM-CSF及IL。4共培养，体外扩增DC。光镜及透射电镜观察DC的形态特征。免疫荧光法检测培养前后酶DC数量；经流式纲腿仪检测胰腺癌怨者培养前焉及健康人蕊DC表嚣HLA-DR及B7分子表达水平。结果胰腺癌患者与健康人相比，其DC数量少且形态不规则，表顺HLA-DR及B7分子表达水平较低(p<0．01)；经GM-CSF及IL．4联合墙葵7d蓐

9、，擎核缨戆串的DC较培养蘸骥显增多(P瑚．01)，豆簇艨癌患者DC表面HLA—DR及B7分子表达水平较培养前宥明显的增高(p

10、擘蹿第二部分癌细胞裂解物修饰的DC疫苗体外诱导T细胞特异性抗胰腺癞兔疫氆酌躐察经获癌缨您裂解物穆饰的树突、挟细魏(DC)疫苗，在体外诱导抗胰癌的特异性T细胞免疫应答的效果。方法从胰腺癌患者J't,1爵7m中分化、增越出DC，将胰腺癌细胞反复冻融、离心、遭滤后，裁成演纲藏裂瓣裼，然爱致敏Ⅸ，并与蕈缨麓俸努共培养(分为致敏DC组、未致