树突状细胞疫苗对大鼠walker

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1、树突状细胞疫苗对大鼠Walker【摘要】目的建立-CSF）和白细胞介素4（IL-4）在体外定向诱导分化出DC，液氮冻融法提取edicalCollege，Xuzhou，Jiangsu221006,China；2.Grade2004ofPostgraduateinGeneralSurgery,XuzhouMedicalCollege,Xuzhou，Jiangsu221002；3.CentralClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege)Abstract：ObjectiveToinvestigat

2、ethemechanismfordendriticcell(DC)vaccinetoinhibitthegroorinrats.MethodsSolubletumorantigenorcellline-CSF)andinterleukin-4(IL-4).ThelevelofIL-12inculturemediumeasredbyELISA.FemaleSDratsorcellssubcutaneouslytoformtumormodels,lydividedintoatreatmentgroupandatumorcontrolgroup(n=10each).Another10nor

3、malfemaleSDratsthenormalcontrolgroup.DCvaccine（cellsuspensionoforcontrolandnormalcontrolgroups.ThebloodlevelofIL-12andthesize(largestdiameter)oftumororsizeallerintreatmentgroupthanintumorcontrolgroup(P＜0.01).ThelevelofIL-12orcontrolgroupthaninnormalcontrolgroup(P＜0.05),butarkedlyhigherintreatme

4、ntgroupthanintumorcontrolgroup(P＜0.01).Anegativecorrelationeteroftumorinthetreatmentgroup(r=-0.826,P<0.01).ConclusionEnhancingtheanti-tumorouscellularimmunitymediatedbyTh1cellscouldbeoneofthemechanismsfortheDCvaccinetosuppresstumorgroorvaccine；IL-12大量研究表明，肿瘤患者体内存在Th1细胞受抑制而Th2细胞占优势的现象，称为“Th1／

5、Th2漂移”，且Th1／Th2的偏移与肿瘤的恶性程度呈正相关；与此同时，白细胞介素12（IL-12）的产生则逐渐减少，在患者出现远处转移或恶病质时,IL-12呈最低水平［1］。机体的抗肿瘤作用以Th1介导的细胞免疫为主，如果能够增强Th1型细胞免疫，将可能有效抑制肿瘤的发展。树突状细胞（DC）是惟一能激活未致敏T细胞并诱导其极化的抗原提呈细胞（APC）［2］，其激活后产生的IL-12则是Th1极化的启动因子［3］。据此，我们用SD大鼠和Walker-256肿瘤细胞株建立动物模型，探讨DC疫苗抑制肿瘤生长的机制。1材料和方法1.1实验动物和细胞株成年雄性SD大鼠，体重200250g；6

6、8周龄雌性SD大鼠，体重150180g，由徐州医学院实验动物中心提供。大鼠-CSF）、重组大鼠肿瘤坏死因子（rrTNF-α），美国Peprotech公司产品；胎牛血清，美国MDgenics公司产品；大鼠淋巴细胞分离液，中科院生物工程医学研究所；Histostain-DC试剂盒，美国Zymed公司产品；大鼠IL-12p70ELISA试剂盒，上海西唐生物科技有限公司进口分装。1.3DC体外实验1.3.1定向诱导大鼠DC取健康雄性成年SD大鼠，断颈处死，浸入75％的乙醇中消毒10min。无菌手术取出双侧股骨和胫骨，剥净肌肉组织，用无菌注射器抽取5mlPBS，将针头分别从两端插入骨髓腔，反复

7、冲洗出骨髓直至骨变白。密度梯度离心法获取髓单核细胞，细胞计数，每只大鼠可提取髓单核细胞（2.03.0）×107个。用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液重悬细胞，将细胞悬液接种于2只50ml培养瓶中，每瓶10ml，加入rrGM-CSF10μg／L、rrIL-410μg／L，置于37.0℃、5%CO2培养箱中培养。每2天半量换液，并按照rrGM-CSF10μg／L、rrIL-410μg／L补加细胞因子。1.3.2DC抗原的负载定向诱导大鼠DC至第6天