柑橘脉突病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用

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1、园艺学报，2016，43(8)：1613–1620.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0150；http：//www.ahs.ac.cn1613柑橘脉突病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用1121111,*王艳娇，崔甜甜，黄爱军，陈洪明，李中安，周常勇，宋震12（西南大学/中国农业科学院柑桔研究所，重庆400712；赣南师范大学国家脐橙工程研究中心，江西赣州341000）摘要：为了快速、灵敏地检测柑橘脉突病毒（Citrusveinenationvirus，CVEV），通过设计特异性引

2、物（EVqF4/EVqR4），优化反应条件，建立了CVEV的实时荧光定量RT-PCR检测体系。该方法特异性良好；检测灵敏度比常规RT-PCR高100倍；标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.992，扩增效率101.8%；检测组内和组间变异系数均小于2.85%，重复性较好。利用所建立的实时荧光定量方法对柑橘植株进行检测发现，‘代代酸橙’和‘象山红’植株中CVEV分布不均匀，其中根部-1病毒滴度最高，分别为162.52和45.32拷贝·ngRNA，皮及叶部病毒滴度相对较低。关键词：柑橘脉突病毒；实时荧光定量RT-PCR中图分类号：S666文献标志码：A文章编号

3、：0513-353X（2016）08-1613-08DevelopmentandApplicationofaQuantitativeRT-PCRApproachforQuantificationofCitrusveinenationvirus11211WANGYan-jiao，CUITian-tian，HUANGAi-jun，CHENHong-ming，LIZhong-an，ZHOU11,*Chang-yong，andSONGZhen1（CitrusResearchInstituteofSouthwestUniversity，CitrusResearchInstituteof

4、ChineseAcademyofAgricultural2Sciences，Chongqing400712，China；NationalNavelOrangeEngineeringResearchCenterofGannanNormalUniversity，Ganzhou，Jiangxi341000，China）Abstract：InordertofastbydetectCitrusveinenationvirus（CVEV）withsensitivityandspecificity，aReverseTranscriptionQuantitativePolymeraseCha

5、inReaction（RT-qPCR）assaywasdevelopedwithselectiveprimerpairs（EVqF4/EVqR4）andoptimizedconditions.Usingthemethod，onlysampleinfectedwithCVEVshowedpositive，whilethosewithotherfivecitruspathogenswerenegative.Thesensitivityof2themethodwas100timeshigherthantheconventionalRT-PCR.Therewasagoodlinear

6、（R=0.992）relationshipbetweenthethresholdcycleandCVEVtemplateconcentration，whiletheamplificationefficiencyoftheRT-qPCRwas101.8%.Thecoefficientsofvariationoftheintra-andinter-assaywerebothwithin2.85%，indicatingagoodreproducibilityofthemethod.TheresultsalsoshowedthatCVEVwasunevendistributedins

7、ourorangeplantsandhybridcitrusplants，andtheamountofthevirusinroots-1wasthehighest（162.52and45.32copies·ngRNA，respectively），followedbythatinbarksandleaves.收稿日期：2016–06–06；修回日期：2016–08–17基金项目：农业部公益性行业（农业）科研专项经费项目（201203076）；重庆市基础及前沿研究项目（CSTC2014jcyjA80033）