shRNA沉默多药耐药胃癌细胞7901VCR+MDR1基因表达的实验研究

《shRNA沉默多药耐药胃癌细胞7901VCR+MDR1基因表达的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士研究生学位论文shRNA沉默多药耐药胃癌细胞7901／VCRMDRl基因表达的实验研究摘要目的：RNA干扰(RNAinterference，RNAi)多药耐药胃癌细胞7901／VCR多药耐药基因(Multidrugresistancegene，MDRl)转录和蛋白表达，并探讨pshRNA．MDRl对胃癌7901／VCR细胞裸鼠皮下移植瘤内MDRl表达的抑制作用，同时进一步探讨pshRNA．MDRl联合TRAIL基因对胃癌7901～CR细胞生长的抑制作用，为肿瘤的基因治疗奠定基础。方法：(1)根据MDRl的碱

2、基序列设计并合成两对短发夹RNA，构建重组载体，用阳离子脂质体法体外转染7901／VCR；采用MTT法检测转染胃癌细胞药物敏感性的变化；流式细胞仪检测细胞周期变化；RT-PCR和Westernblot检测转染前后细胞MDRlmRNA转录和蛋白表达的变化。(2)将多药耐药胃癌细胞7901／VCR注射入裸鼠皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型。将pshRNA．MDRl导入移植瘤中，观察肿瘤体积和重量的变化；同时采用免疫组织化学检测肿瘤MDRl表达的变化。(3)将pshRNA．MDRl和凋亡诱导因子TRAIL的质粒共转染入多药耐药胃癌细

3、胞7901／VCR，观察其对肿瘤细胞的抑制作用。结果：(1)成功构建pshRNA．MDRl质粒载体，转染后细胞IC50及耐药指数明显降低，G1期细胞增加，凋亡细胞增加，MDRlmRNA’重庆医科大学硕士研究生学位论文转录水平下降，P一糖蛋白(P．gp)的表达水平降低。(2)pshRNA—MDRl导入裸鼠皮下移植瘤后，与对照组相比，肿瘤体积明显缩小，MDRl表达明显下降。(3)pshRNA．MDRl联合TRAIL基因可明显促进肿瘤细胞的凋亡。结论：在体外实验中，pshRNA．MDRl能有效抑制多药耐药胃癌细胞7901／VCR

4、MDRl基因表达，为进一步开展胃癌的基因治疗奠定了基础；在动物实验中，pshRNA．MDRl明显抑制了裸鼠皮下移植瘤的生长，对移植瘤中MDRl表达有明显抑制作用；pshRNA．MDRl联合TRAIL可增强TRAIL促进肿瘤细胞凋亡的作用，两者具有协同作用。关键词：多药耐药基因；RNA干扰；P．糖蛋白；胃癌多药耐药细胞株7901／VCR重庆医科大学硕士研究生学位论文EXPERIMENTSTUDYONSILENCINGTHEEXPRESSl0N0FMDRlGENEINMUIjrIDRUGRESISTENTGASTRICCANC

5、ERCELL7901ⅣCRBYSHRNAABSTRACTObjective：ToInhibittranscriptionandexpressionofMDRlgeneinmultidrugresistentgastriccancercell7901／VCRbyRNAinterference．Exploringtheefficiencyofinhibitingtheexpressionofgastriccancercell7901／VCRinnudemicebypshRNA—MDR1．Investigatingtheinhi

6、bitoryeffectofmultidrugresistentgastriccancercell7901／VCRwithpshRNA—MDRlcombinedwithTRAIL．Settingupfoundationforthetumorgenetherapy．Methods：(1)RecombinantvectorsofshRNAaimingattwoMDRlgenesequenceswereconstructedandusedtotransfectthecellline7901／VCRbyLipofectamineT

7、M2000．ThechangeofthedrugresistentindexWasexaminedbyMTTmethod．Thechangeofthecellcyclewasdetectedbyflowcytometry．ThemRNAconcentrationofMDR1geneWasdeterminedbyRT-PCRandtheproteinexpressionofMDR1genewasdetectedbyWesternblot．(2)Multidrugresistentgastriccancercell790lⅣC

8、Rwasinoculatedintosubcutaneoustissueofnudemiceand7901／VCRtransplantedtumormodelwasconstructed．pshRNA—MDR1Was4重庆医科大学硕士研究生学位论文injectedintothetumor,andthev