shrna干扰vegf表达对白血病细胞多药耐药的影响

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1、shRNA干扰VEGF表达对白血病细胞多药耐药的影响作者：方莉莉，许文林，陈琛，房新建，陈巧云，李娟【摘要】目的：探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的关系及其机制。方法：针对VEGF基因设计合成3条干扰片段shRNA1，2，3，采用脂质体2000分别将其转染入K562/A02细胞，RTPCR法检测VEGF和多药耐药相关基因MDR1，MRP1，topoⅡ，GST的mRNA水平；蛋白质印迹法检测VEGF蛋白水平；MTT法检测各组细胞对多柔比星的半数抑制浓度（IC50值）。结

2、果：K562/A02细胞VEGFmRNA表达水平显著高于敏感株K562细胞，差异有统计学意义（P<0.01），且VEGF蛋白水平也显著高于K562细胞；转染shRNA后，K562/A02细胞中VEGFmRNA水平出现不同程度下调，其中shRNA2组和shRNA3组与转染随机片段组比较差异有统计学意义（P<0.05），以shRNA3组下调最显著，并且VEGF蛋白水平也出现相应的下调；转染48h后K562/A02细胞中MDR1，MRP1及topoⅡ的mRNA水平均出现不同程度下调，以shRNA3组下调最显著，分别

3、下调（39.7±1.21）％，（29.1±0.97）％，（28.2±1.04）％，GST基因表达则无明显变化；阳性转染组细胞对多柔比星的敏感性明显增加，其中以shRNA3组最显著。结论：VEGFshRNA可以抑制K562/A02细胞VEGF基因与蛋白的表达，不同干扰片段的沉默效果不同，并增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性，其机制可能与MDR1，MRP1及topo14Ⅱ的表达下调有一定的关系。【关键词】血管内皮生长因子；RNA干扰；K562/A02细胞；多药耐药［Abstract］Objective:Tostudy

4、therelationshipbetweenvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)andmultidrugresistanceofhumanleukemiacelllineK562/A02byRNAinterference,andthenthemechanismwasexplored.Methods：TheVEGFshRNAchain1,2and3weredesigned,synthesized,thentransfectedintoK562/A02cellslinebylipofec

5、tamine2000reagent.RTPCRwasusedtodetecttheexpressionofVEGFandMDRrelatinggenesMDR1,MRP1,topoⅡ,GSTinmRNAlevel;WesternblottingwasusedtoanalyzedtheexpressionofVEGFinproteinlevel;MTTwasusedtodeterminetheIC50oftransfectionalcellstodoxorubicin.Results：ComparedtoK562cel

6、l,theexpressionofVEGFinK562/A02cellwasevenmore(P<0.01),andafterVEGFshRNAsweretransfectedintoK562/A02cells,theexpressionofVEGFatthemRNAlevelweredecreased,andtherewerestatisticaldifferencebetweenVEGFshRNA2grouporVEGFshRNA3groupandHKgroup(P<0.05),thegreatestde

7、creasewasseenincellstransfectedwithVEGFshRNA3;andtheproteinlevelofVEGFwere14alsodownregulated.TheMDR1,MRP1,topoⅡmRNAofK562/A02cellweresignificantlydecreased;thegreatestdecreasewasseeninVEGFshRNA3group.TheIC50valueofpositivelytransfectedgroupwerelowerthanthatofco

8、ntrolgroups.Conclusion：AftersilenceofVEGFbyshRNA,themRNAexpressionofMDRassociatedgenessuchasMDR1,MRP1andtopoⅡinK562/A02cellsweredownregulated,andthesensitivi