肺炎链球菌转化对细菌毒力和耐药性影响的研究

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1、重庆医科大学博士学位论文肺炎链球菌转化对细菌毒力和耐药性影响的研究姓名：张雪梅申请学位级别：博士专业：临床检验诊断学指导教师：康格非;尹一兵2003.5.1重庆医科大学博士论文英文缩写bpcDNACFUComCPICSPCTMddH20DNAdNTPEBECV304EDTAEGFP英文缩写及中英文对照英文全称中文译名basepair碱基对complementdeoxyribonucleicacid互补脱氧核糖核酸clonyformingunit集落形成单位competencegene感受态基因chl

2、orformphenolisopropanol氯仿／酚／异丙醇competenc—stimulatingpeptide感受态刺激因子compeletetransformationmedia完全转化培养基doubledistilIationwater双蒸水deribonucleicacid脱氧核糖核酸deoxynucleosidestriphosphate脱氧核糖核苷三磷酸盐ethidiumbromide溴化乙锭humanumbilicalvein人脐静脉内皮细胞株endothelialcelleth

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4、icaldensJty光密度penicillinbindingproteins青霉素结合蛋白l【薹眦。¨眦№

5、薹∞帆重庆医科大学博士论文PBSPCRPsaARNArDmRT—PCRSS．pnTBETriSTSATSBB—MEphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PolymeraseChainReaction聚合酶链反应pneumococcalsurface肺炎链球菌表面adhesinA粘附素Aribonucleicacid核糖核酸voltionperminute转／分revers

6、etranscriptionand逆转录聚合酶链反应polymerasechainreactionsencond(S)秒Streptococcuspneumoniae肺炎链球菌Tris—Boricacid—EDTA三羟甲基氨基甲烷一硼、酸一7,--胺四乙酸trishydroxymethylaminomethane三羟甲基氨基甲烷trypticsoybloodagar大豆胰酶浸液血平板trypticsoybroth大豆胰酶浸液培养基B—mercaptoethanolB一巯基乙醇重盎堕型盔堂堕主堡壅——

7、————————————————————————————————————————————————————————————————————一肺炎链球菌转化对细菌毒力及耐药性影响研究摘要肺炎链球菌是常见的革兰氏阳性致病菌，主要的感染群体为儿童和老年人，可引起大叶性肺炎、心内膜炎、脑膜炎、败血症等疾病，每年导致上百万的人死亡。肺炎链球菌是条件致病菌，40％的健康人鼻咽部有寄生，当环境发生变化时才感染致病。肺炎链球菌是怎样从寄生转变为致病的机制目前尚不清楚。自然转化是细菌之间基因转移的一种方式，肺炎链球菌是

8、目前发现转化效率最高的一种细菌。有现象提示肺炎链球菌的转化可能与细菌的毒力、耐药相关。本研究首次探索了肺炎链球菌的转化对细菌毒＼，力和耐药性的影响，为深入了解其致病机制提供理论和实验依据一研t究包括以下四部分内容：1、为后继的研究提供方法学支持和所需菌株，本研究利用CSP诱导细菌转化发生，建立了肺炎链球菌的实验室转化模型；并构建了肺炎链球菌转化缺陷菌株，通过抗生素培养基培养和PCR鉴定菌株构建成功。结果表明不同肺炎链球菌株的转化最适菌密度不同，1、2和22号菌株的最适转化密度分别为0．1、0．08和

9、0．07；用于转化的CTM培养基最适为pH8．0的C+Y培养基；在自然转化下不能诱导转化发生的pH6．8的C+Y培养基中，使用CSP诱导，也能促使细菌发生转化，只是转化效率较低；结论：实验室条件下，不同细菌在一定菌密度时可重庆医科大学博士论文利用CSP诱导肺炎链球菌成为感受态发生转化。2、为探讨肺炎链球菌转化对毒力表达的影响，本研究分别通过体外粘附人脐静脉血管内皮细胞ECV一304和体内小鼠毒力实验观察1、2和22号肺炎链球菌和其转化缺陷菌株lt、2t和22t毒力的差