大鼠肝癌发生过程中Caspase3的表达及意义

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1、大鼠肝癌发生过程中Caspase3的表达及意义作者：宁巍巍刘同慎李笑岩王东白咸勇【摘要】目的探讨Caspase3在肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用免疫组织化学SP法，对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌发生过程中Caspase3的表达进行了系统观察。结果①DEN诱发大鼠肝癌发生率为100%;②在正常大鼠肝脏、诱癌早期(1～8周)及诱癌中期(9～16周)可见少量肝细胞及枯否细胞呈Caspase3阳性表达,随着肝癌发生进程,Caspase3阳性枯否细胞数量增多，在癌结节中可见Caspase3阳性肝细胞，并且结节周边部比中央部阳性细胞多。结论本研究

2、表明肝细胞Caspase3的低表达和枯否细胞Caspase3的高表达可能与肝癌的发生和发展有关。【关键词】Caspase3;肝癌发生;免疫组织化学;大鼠　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofCaspase3duringhepatocarcinogenesisinducedbydiethylnitrosamine(DEN)inratssystematically.MethodsTheexpressionofCaspase3wasmeasuredbyimmunohistochemicalSP

3、method.Results①TheincidenceofhepatocarcinomainducedbyDENwas100%.②TheexpressionofCaspase73wasdetectedoccasionallyinhepatocytesandKupffercellsofnormalratsandhepatomaratswithDENtreatmentfor116weeks.Withtheprogressofhepatocarcinogenesis,thenumberofkupffercellsexpressingCaspase3incr

4、easedprogressively，andthenumberofhepatocyesexpressingCaspase3inperipheryofhyperplasticnodulewasmorethanthatinthecentre.ConclusionTheresultssuggestthatthelowexpressionofCaspase3inhepatocytesandthehighexpressionofCaspase3arerelatedcloselytothedevelopmentandprogressionofhepatoma.　

5、　【Keywords】Caspase3，hepatocarcinogenesis，immunohistochemistry,rat　　Caspases即富含半胱氨酸的天冬氨酸特异性蛋白酶，是一与细胞凋亡相关的蛋白酶家族，它可激活细胞内的DNA酶，切割染色体DNA，直接导致细胞凋亡。Caspase3是Caspase家族中最重要的凋亡执行者，作为细胞凋亡效应分子，参与细胞的生理及病理性死亡过程，是细胞凋亡研究的中心分子，肿瘤发生、发展的重要原因是细胞增殖与凋亡的动态平衡失调所致[1]。有研究报道Caspase3在许多正常人体组织和肿瘤组织中表达，但在肝癌

6、发生过程中导致细胞凋亡功能低下的机制尚不明确[2]。本研究采用免疫组织化学方法检测了大鼠肝癌发生过程中Caspase3的表达，旨在探讨Caspase3在肝癌发生、发展中的作用和意义。　　1材料与方法7　　1.1肝癌动物模型的建立和病理学检查将150只雄性Wistar大鼠随机分为模型组(135只)和对照组(15只)。模型组饲以含二乙基亚硝胺(DEN，0.08‰)饮水，连续12周后改为自由饮水;对照组常规自由饮水。于实验第4、8、12、16、18、20、22、24、25周，随机选择模型组动物10～15只断头处死，大体观察和记录肝脏的形态、颜色、质地变化后，

7、取肝组织，4%多聚甲醛缓冲液固定，常规石蜡包埋，进行3μm连续切片，HE染色，光镜观察。　　1.2Caspase3免疫组织化学染色兔抗大鼠Caspase3多克隆抗体购自北京博奥森公司，正常羊血清、兔二步法检测试剂盒购自北京中杉金桥公司，DAB显色试剂盒购自武汉博士德公司。采用SP法，主要步骤：3μm组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢甲醇处理30min灭活内源性过氧化物酶，柠檬酸缓冲液微波修复10min，正常羊血清封闭30min减少非特异性染色，滴加一抗4℃过夜，滴加二抗孵育30min，DAB显色，冲洗，脱水，透明，封片。　　2结果　　2.1诱癌过程中大

8、鼠肝脏的病理学变化诱癌早期(1～8周)肉眼观未见明显异常。镜下肝细