支原体巨噬细胞活化脂肽-2经mapks途径诱导thp-1细胞表达mmp-9

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2、南华大学医学院委员１：李忠玉，教授，硕导，南华大学医学院委员２：曾铁兵，教授，硕导，南华大学医学院委员３：卿义衡，主任檢驗师，衡阳市中也睽院委员４；刘彦，副教授，硕导，南华大学睽学院答辩日期：２０１５年１２月１２日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，论文中不包，除了论文中特别加标注和致谢的地方外含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中

3、作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：若年Ｉ文月，文日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得１＾＾＜其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即；学校有权保留可学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可公布学位论文的全部或部分内容，Ｗ采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位论

4、文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。＾￡作者签名Ｔ＾＾２＾ｊ５年１左月／文日＾导繼知心＂曰令＾可支原体巨噬细胞活化脂肽-2经MAPKs途径诱导THP-1细胞表达MMP-9摘要：支原体感染机体后主要通过单核、巨噬细胞清除病原体。其中单核细胞以阿米巴样运动穿过血管内皮细胞，随后突破血管基底层和结缔组织到达感染部位是发挥免疫应答的重要步骤。在此过程中

5、，基质金属蛋白酶（MMPs）能通过降解细胞外基质，从而参与炎症反应以及血管生成等多种生物学效应，因而发挥着关键作用。临床研究和动物实验表明，支原体感染后，患者血清或大鼠羊水中MMP-9含量显著增高，这表明MMP-9也参与了支原体感染后的炎症反应。为了进一步了解支原体感染对MMP-9分泌的影响，本研究从以下几方面进行体外研究：（1）培养人单核细胞系THP-1细胞，分别用0.1、1.0和5.0μg/mL的支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）刺激不同时间，用ELISA和Westernblot分别检测细胞培养上清中MMP-9的含量以及金属蛋白酶组织抑制因子-1

6、（TIMP-1）的表达；实时定量PCR观察MMP-9以及TIMP-1mRNA的表达水平；比色法分析MMP-9活性的变化。（2）THP-1细胞预先与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制剂孵育30min，随后用5μg/mLMALP-2刺激18h，ELISA观察其对MMP-9分泌的影响。结果显示：THP-1细胞基础状态下MMP-9和TIMP-1表达水平较低。当分别给予0.1、1.0和5.0μg/mLMALP-2作用18h后，可诱导THP-1细胞分泌MMP-9和表达TIMP-1，且随着MALP-2浓度的增加，MMP-9的产生以及TIMP-1表达水平I相应增加，但TIM

7、P-1的增幅低于MMP-9；实时定量PCR的结果表明：不同浓度的MALP-2处理THP-1细胞16h后，也可上调细胞内MMP-9和TIMP-1mRNA的表达水平，但MMP-9mRNA增高更显著。同时MALP-2处理也可增加细胞培养上清中MMP-9的酶活性。此外，MALP-2作用THP-1细胞6h后即可上调MMP-9mRNA表达，随着时间的延长，mRNA表达水平逐渐增高，16h后达到峰值，并持续高表达至36h。THP-1细胞分别与30μmol/LSB203580（p38抑制剂）、SP600125（JNK抑制剂）和PD98059（ERK抑制剂）预处理后，可显著抑

8、制MALP-2对MMP-9的诱生作用。以上结果表明支