睾酮经FasFasL信号传导途径诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡

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1、上海交通大学硕士学位论文睾酮经Fas/FasL信号传导途径诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡姓名：金凌艳申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：艾晓杰;乔中东20060101睾酮经Fas/FasL信号传导途径诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡摘要凋亡又称为程序性细胞死亡通过这一先天机制机体可以清除一些不需要的细胞与坏死不同凋亡是一种最普遍的生理性细胞死亡通常发生于胚胎发育组织重塑免疫调控以及肿瘤衰退过程中巨噬细胞作为一种重要的免疫效应细胞其在机体免疫中的作用不可忽视巨噬细胞的正常凋亡对其正常行使功能有着重要的意义很多因素可以

2、影响巨噬细胞的凋亡其中性激素是一个不可忽视的因素我们过去的研究表明睾酮Te能直接引起小鼠骨髓巨噬细胞BMM凋亡并伴有Fas和FasL表达的升高那么在睾酮诱导的小鼠骨髓巨噬细胞凋亡中Fas下游的一些关键的酶是否也参与了此过程实验目的1探究睾酮诱导小鼠骨髓巨噬细胞发生凋亡时Fas/FasL途径上caspase-8caspase-3和PARP的表达情况2阻断Fas/FasL途径中接头蛋白FADD的表达后下游因子caspase-8表达的变化实验方法无菌条件下分离3周龄雌性小鼠骨髓细胞用含有生长因子M-CSF1的L92

3、9条件培养基LCM诱导5天使之向巨噬细胞定向分化用流式细胞仪测定巨噬细胞纯度并分选出F4/80阳性细胞并将细胞分为两大组第一组分别是空白对照组睾酮100nM下同处理组去除M-CSF组去除M-CSF同时用雄激素处理组第二组用FADD反义寡核苷酸ASODN转染BMMs后重复第一组的四个处理组并以FADD错义寡核苷酸MSODN转染后的睾酮处理组作为对照处理12小时后分别通过凋亡梯形和流式细胞仪检测第一第二组中BMMs的凋亡情况最后通过RT-PCRReal-timeRT-PCR和WesternBlot方法检测各组中c

4、aspase-8caspase-3和PARP基因及蛋白的表达情况实验结果经流式细胞仪检测67.2%的贴壁细胞是F4/80阳性细胞最大百分率可达69.7%这些F4/80阳性细胞即BMMs在第一组中除对照组外其他三组均出现了明显的凋亡梯形第二组中经FADD-ASODN处理的细胞其凋亡率明显低于FADD-MSODN组Real-timeRT-PCR和WesternBlot结果也显示在睾酮诱导下BMMs中caspase-8caspase-3和PARP的表达增高并激活蛋白酶原生成小片段而FADD的反义寡核苷酸能够部分阻断

5、由睾酮诱导的BMMs的凋亡使得caspase-8的表达也相应减少实验结论1睾酮在体外直接作用于小鼠骨髓巨噬细胞后可诱导其凋亡22在睾酮诱导的小鼠骨髓巨噬细胞凋亡中伴有caspase-8caspase-3和PARP的活化3FADD反义寡核苷酸能抑制睾酮诱导的小鼠骨髓巨噬细胞的凋亡4在由睾酮诱导的巨噬细胞凋亡中当Fas/FasL途径上FADD的表达被抑制后其下游的caspase-8表达也被抑制关键词睾酮凋亡小鼠骨髓巨噬细胞Fas/FasL信号传导途径反义寡核苷酸3TESTOSTERONEINDUCESAPOPTO

6、SISVIAFAS/FASLPATHWAYINBONEMARROW-DERIVEDMACROPHAGESABSTRACTApoptosisorprogrammedcelldeathistheinnatemechanismbywhichtheorganismeliminatesunwantedcells.Incontrasttonecrosis,apoptosisisthemostcommonphysiologicalformofcelldeathandoccursduringembryonicdevelopm

7、ent,tissueremodeling,immuneregulationandtumorregression.Asakindofimportantimmuneeffectivecells,macrophagesplaysomerolesinimmunity,andthenormalapoptosisofmacrophagesifsignificantfortheirfunctions.Manyfactorscanaffecttheapoptosisofmacrophages,andsexhormoneisa

8、non-negligiblefactor.OurpastresearchhadprovedthattestosteronecouldinduceapoptosisofbonemarrowderivedmacrophagesofmiceindirectlywithenhancedexpressionofFasandFasL,thenwhethersomedownstreamkeyenzymesinFa