低血糖对缺氧心肌细胞内质网应激介导细胞凋亡的作用和机制研究

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1、中图分类号：R363.2+1论文编号：HBLG2015-096UDC：密级：公开硕士学位论文低血糖对缺氧心肌细胞内质网应激介导细胞凋亡的作用和机制研究作者姓名：谢静学科名称：基础医学研究方向：心血管病理生理学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期：2015年5月13日申请学位类别：医学硕士导师姓名：段国贤教授单位：华北理工大学基础医学院潘国忠教授单位：北京中医药大学附属东直门医院东区论文评阅人：匿名单位：匿名单位：论文答辩日期：2015年6月7日答辩委员会主席：崔慧先教授关键词：缺氧；低血糖；内质网应激；H9C2细胞；细胞凋亡唐山华北理工大学2015年6月TheMech

2、anismofCardiomyocyteApoptosisInducedbyEndoplasmicReticulumStressafterHypoxiainRatMyocardialCellswithHypoglycemiaDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyXieJing(BasicMedicine)Supervisor:ProfessorDuan

3、GuoxianJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：2015年6月10日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校

4、可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□√自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：2015年6月10日签字日期：2015年6月10日摘要摘要目的通过建立离体大鼠心肌细胞缺氧模型，观察低血糖水平对缺氧心肌细胞内质网应激标志蛋白（GRP78/BIP）、内质网应激感受蛋白（PERK、ATF-6、IRE-1）及凋亡信号分子（CHOP、Caspase-12）表达的影响，确定低血糖对缺氧心肌细胞内质网应激介导的细胞凋亡的可能机制、作用靶点和信号通路，为进一步探索缺氧状态下促进心肌细胞

5、凋亡的危险因素及降低心肌细胞凋亡率提供新论点、新方向。方法以大鼠H9C2心肌细胞系D26-D29（第26-29代）作为实验细胞，通过调节葡萄糖培养基浓度模拟人体血糖浓度，并于缺氧培养箱中培养以建立心肌细胞缺氧模型，依据随机原则将细胞分为4组，分别为：正常血糖不缺氧组（SN组）：18mmol/L糖浓度培养基、正常培养；正常血糖缺氧组（MN组）：18mmol/L糖浓度培养基、缺氧培养；低血糖不缺氧组（SL组）：3mmol/L糖浓度培养基、正常培养；低血糖缺氧组（ML组）：3mmol/L糖浓度培养基、缺氧培养。通过采用WesternBlot法和Real-timePCR法检测各组H9

6、C2大鼠心肌细胞中内质网应激标志蛋白（GRP78/BIP）、内质网应激感受蛋白（PERK、ATF-6、IRE-1）和凋亡信号分子（CHOP、Caspase-12）的表达情况，从而探讨心肌细胞在缺氧状态下内质网应激在细胞凋亡中所呈现的变化规律，以及低血糖对缺氧心肌细胞内质网应激介导的心肌细胞凋亡的作用机制和途径。结果1低血糖不缺氧组GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表达高于正常血糖不缺氧组，差别具有统计学意义(P<0.05)；2正常血糖缺氧组GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-1

7、2蛋白的表达高于正常血糖不缺氧组，差别具有统计学意义(P<0.05)；3低血糖缺氧组GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表达高于正常血糖缺氧组，差别具有统计学意义(P<0.05)；4在基因表达方面，低血糖缺氧组GRP78/BIPmRNA、PERKmRNA、ATF-6mRNA、IRE-1mRNA、CHOPmRNA及Caspase-12mRNA的表达均高于正常血糖缺氧组，差别具有统计学意义(P<0.05)，这与该组上述6种目的蛋白的表达趋势是一致的。结论