内质网应激介导棕榈酸诱导的成骨细胞凋亡

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1、学校代码10459学号或申请号201212443184密级公开硕士学位论文内质网应激介导棕榈酸诱导的成骨细胞凋亡作者姓名：辛莹导师姓名：郑丽丽教授学科门类：医学专业名称：内科学（内分泌）培养院系：第一附属医院完成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEndoplasmicreticulumstressmediatespalmitate-inducedapoptosisinosteoblastsByYingXinSupervi

2、sor:Prof.LiliZhengDepartmentofEndocrinologyandMetabolismTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay,2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立迸行研宄工作所取得的成果。除论文中已经加以注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明。本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：她年七：

3、月工？日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。作者签名:专营曰期：么年月2_8日摘要内质网应激介

4、导棕榈酸诱导的成骨细胞凋亡硕士研究生：辛莹导师：郑丽丽教授郑州大学第一附属医院内分泌科河南郑州450052摘要背景：骨质疏松（Osteoporosis，OP）及与其相关的骨折的发病率和死亡率在世界范围内不断上升，已经成为威胁公众健康的重大问题。越来越多的研究发现，肥胖与骨质疏松的发生发展密切相关，可能是导致骨质疏松的另一危险因素。肥胖患者血清游离脂肪酸水平普遍增高，并且可以对包括成骨细胞在内的多种细胞产生脂毒性作用。成骨细胞是骨代谢的基础，其工作状态和相对数量的改变都可能引起骨代谢异常并最终进展为骨质疏松。因此，体内高

5、脂环境引起的成骨细胞凋亡增多可能是肥胖患者发生骨质疏松的重要机制。棕榈酸为一种动植体内常见的高级饱和脂肪酸，已有研究发现，棕榈酸可以通过其脂毒性诱导成骨细胞凋亡，然而，其具体机制目前尚不明确。内质网应激（endoplasmicreticulumstress，ERS）可以通过CHOP途径、Caspase-12途径和JNK途径参与细胞凋亡进程，这些通路的激活可以通过下游一系列反应最终导致细胞凋亡的发生。因此，我们推测高脂环境，即棕榈酸的干预，可能通过内质网应激途径诱导成骨细胞凋亡从而导致骨质疏松的发生。为证实这一设想，我们

6、拟建立棕榈酸诱导成骨细胞凋亡的模型，同时应用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyricacid，4-PBA）预处理细胞，进而探讨内质网应激在此进程中的作用。目的：建立棕榈酸诱导成骨细胞凋亡的模型，探讨内质网应激在棕榈酸诱导成骨I摘要细胞凋亡中的作用，为骨质疏松的治疗提供新的思路。方法：用含不同浓度棕榈酸（0,100,250,500μmol/L）的完全培养基分别孵育成骨细胞24h；选择棕榈酸敏感浓度500μmol/L孵育成骨细胞不同时间（0,6,12,24h）；用含500μmol/L棕榈酸的完全培养基干

7、预成骨细胞24h并应用内质网应激抑制剂4-PBA进一步验证棕榈酸对成骨细胞增殖和凋亡的影响。CCK-8法检测细胞增殖活力；AnnexinV/PI双染色法流式细胞术检测细胞凋亡率；Real-timequantitativePCR检测各组细胞内质网应激相关基因GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA的表达。结果：1、与对照组相比，100μmol/L棕榈酸干预成骨细胞24h对其增殖率无明显影响(P＞0.05)，250μmol/L（P＜0.05）和500μmol/L（P＜0.01)浓度组成骨细胞增殖率均下降，且呈剂量

8、依赖性。用500μmol/L的棕榈酸干预6,12,24h后，细细胞增殖率明显降低且呈时间依赖性(P＜0.01)。与500μmol/L棕榈酸组相比，用4-PBA预处理细胞后再加入500μmol/L的棕榈酸干预细胞24h可在一定程度上提高细胞的增殖活性，差异有统计学意义(P＜0.05)。2、与对照组相比，100μmol/L棕榈酸干预组