内质网应激介导的crh诱导大鼠海马神经元凋亡

《内质网应激介导的crh诱导大鼠海马神经元凋亡》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学博士学位论文内质网应激介导的CRH诱导大鼠海马神经元凋亡姓名：张悦申请学位级别：博士专业：病理学与病理生理学指导教师：丛斌201204中文摘要内质网应激介导的CRH诱导大鼠海马神经元凋亡摘要下丘脑．垂体．肾上腺皮质轴(hypothalamicpituitaryadrenalaxis，HPA)是公认的应激反应标志轴。促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropinreleasinghormone，CRH)是下丘脑分泌的调节HPA轴功能的多肽类激素，也是机体应激反应时发挥神经内分泌调节的关键激素。近年来发现，CRH不仅在HPA轴调节中起着重要作用，其作为一种重要的神经递质，

2、在情绪反应、学习记忆和神经系统损伤与发育中也起着重要作用。海马是边缘系统的重要组成部分，是HPA轴应激反应的高位调节中枢，参与了情绪、学习和记忆、行为、免疫等的调节，对应激反应非常敏感且易损，它的损伤在各种应激所致疾患中起到关键作用。研究表明，慢性应激可能通过增加海马神经元细胞凋亡，导致海马损害，诱发抑郁症等神经精神疾病。因为位于海马CAl区的锥体细胞表达丰富的糖皮质激素受体，而在应激状态下，肾上腺分泌糖皮质激素增多，其可以顺利通过血脑脊液屏障作用于中枢。因此，长期以来，很多学者一直认为应激对海马功能发挥效应是通过糖皮质激素及其受体介导的。但近年来，很多实验结果并不支持这一观点。动物实

3、验发现，当切除肾上腺后，慢性应激同样可以对海马功能产生影响。越来越多的研究结果显示，作为HPA轴的关键调节因子，CRH及其受体参与介导应激对海马结构和功能产生影响，并且这一作用是独立于糖皮质激素的，但是关于CRH导致神经元损伤的机制至今尚不清楚。细胞凋亡(apoptosis)是细胞死亡的主要形式之一。目前，关于细胞凋亡的发生机制普遍认为有三条通路参与：即线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路。其中内质网通路是新近提出的，可独立诱导细胞凋亡的又一途径，该途径的核心内容是内质网应激(endoplasmicreticulumstress，ERS)。适度的内质网应激可提高内质网处理未折叠或错误折

4、叠蛋白的能力，维持细胞存活；但应激时间过长或程度过强，细胞内稳态不能恢复，内质网应激将最终诱导细胞凋亡。近年来，内质网应激在神经系统疾病发生、发展中的作用受到广泛关注。而关于内质网应激可以引中文摘要起神经元的凋亡，已在许多神经退行性疾病，如帕金森病，阿尔茨海默病等的发病机制研究中得到证实。基于上述研究现状，我们推测，应激状态下，HPA轴兴奋，CRH产生增多，可以作用于海马神经元导致神经元损伤，内质网应激在介导CRH诱导海马神经元损伤的过程中发挥了重要作用。本研究应用大鼠束缚应激模型和体外原代培养大鼠海马神经元，从整体、细胞水平，系统研究CRH在应激反应中对神经元的损伤作用，并对其内质网

5、应激机制加以深入探讨。第一部分内质网应激介导的束缚应激大鼠海马细胞凋亡目的：通过建立大鼠束缚应激模型，从整体水平研究CRH在应激反应中对海马细胞的损伤作用及CRH受体的参与度，并对其内质网应激机制进行研究。方法：1建立大鼠束缚应激模型，通过脑立体定位和微量注射技术，分别于束缚应激前30min侧脑室注射CRH受体l特异性拮抗剂CPl54526、内质网应激特异性抑制剂Salubrinal和等量的生理盐水，监测大鼠体重变化，并对下述指标进行检测。2ELISA法检测大鼠血浆CRH、CORT浓度。3免疫组化方法检测内质网应激标志分子GRP78、CHOP蛋白表达的变化。4Westernblot方法

6、检测GRP78、CHOP、Caspase12蛋白表达水平。5流式细胞术ArmexinV．PI双标染色法检测上述各组大鼠海马细胞凋亡率。结果：l大鼠体重的变化：与正常对照组相比，束缚应激7天后，各组大鼠体重均明显下降(正O．05)；其中，与单纯束缚应激组或束缚应激前注射生理盐水组相比，束缚应激前侧脑室注射CRH受体1拮抗剂CPl54526或内质网应激抑制剂Salubdnal，对大鼠体重没有明显影响(矿O．05)。2ELISA法检测大鼠血浆CRH、CORT浓度的变化：与正常对照组相比，束缚应激7天后，各组大鼠血浆CRH、CORT水平均明显升高(庐O．05)；其中，束缚应激前侧脑室注射CRH

7、受体l拮抗剂CPl54526，与单纯束缚中文摘要应激组或束缚应激前注射生理盐水组相比，血浆CRH、CORT水平均没有明显变化(庐O．05)。3免疫组化法检测内质网应激标志分子GI理78、CHOP蛋白在大鼠海马区的表达：GI心78、CHOP的阳性信号均定位于胞浆，与正常对照组相比，束缚应激组大鼠海马区GRP78、CHOP表达均明显增加；侧脑室注射内质网应激抑制剂Salubrinal后，与单纯束缚应激组或束缚应激前注射生理盐水组相比，GRP78、C