乌鸡白凤丸对aβ140诱导的大鼠海马神经元凋亡的

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1、乌鸡白凤丸对Aβ140诱导的大鼠海马神经元凋亡的【摘要】目的研究乌鸡白凤丸（BFP）对β淀粉样蛋白140（Aβ140）诱导体外培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用以及可能的作用机制。方法体外培养新生TT法检测不同浓度Aβ140的细胞毒作用，选择出现显著细胞毒性的剂量为使用剂量。同时给予BFP（100mg/L）干预。用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况，用半定量RTPCR技术检测凋亡相关基因bcl2、bax和caspase3基因mRNA的表达水平。结果10μmol/LAβ140与海马神经元共孵育24h有明显的细胞毒作用，并可诱导神经元凋亡，加入BFP

2、干预后凋亡指数降低。Aβ140可使bcl2基因表达下调，bax基因表达上调，caspase3基因的表达增强。加入BFP干预后，部分拮抗了Aβ140诱导的bcl2基因的表达变化，从而使caspase3基因的表达降低。结论BFP可通过调控bcl2/bax的比值、降低caspase3基因mRNA的表达来阻断Aβ140所诱导的海马神经元凋亡，具有神经保护作用。【关键词】乌鸡白凤丸淀粉样β蛋白细胞凋亡海马神经元基因bcl2基因bax基因caspase3［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheprotectiveeffectsofBakFoo

3、ngPills(BFP)onapoptosisofculturedhippocampusneuronsinducedbyAβ140,andtoexplorethepossiblemechanism.MethodsNeurotoxicityeasuredbyMTTmethodamongtheculturedhippocampusneuronstreatedol/L).CertainconcentrationofAβ140,ined.MeananifestedbyTUNELstraining,andtheexpressionlevelsofbcl2,baxandcas

4、pase3iquantitativelybyRTPCR.ResultsSignificantneurotoxicityol/LAβ140for24h，andthenthedoseinedinthestudy.Excessiveapoptosisongtheneuronsunderthesamecondition,suchasdoightberealizedbyblockingtheapoptosisofhippocampusneuronsinducebyAβ140,bymodulatingtheratioofbcl2/baxandreducingtheexp

5、ressionofcaspase3.［KEYEM/F12培养基、胎牛血清、马血清、胰酶均购自Gibco公司；MTT购自美国Sigma公司。AMVReverseTranscriptionSystemKit、PCR试剂购自美国Promega公司；Trizol试剂购自Invitrogen公司；insituCellDeathDetectionKit(TUNELPOD)购自ROCHE公司。1.2实验动物新生24h的Wistar大鼠购自青岛市药检所动物实验中心。1.3大鼠海马神经元的原代培养按已有的细胞培养方法，取新生不超过24h的Wistar大鼠，无菌操作分离出双侧海马，在解剖

6、显微镜下剔除脑膜和血管。用预致冷的解剖液冲洗干净，剪碎成大小1cm×1cm×1cm的组织块，加入1.25g/L胰酶2mL，放入37℃体积分数0.05的CO2培养箱中消化3～5min。用含有体积分数0.10的胎牛血清及体积分数0.10的马血清的种植培养液终止胰酶的作用。去掉上清液，加培养液轻轻吹打，制成1×108/L的细胞悬液，种到6孔培养板(每孔2mL)中预先用多聚赖氨酸包被的盖玻片上(用于TUNEL);以1×109/L细胞悬液种到96孔培养板(每孔0.5mL)中(用于MTT和RTPCR检测)。培养24h后换成维持培养液，以后每3d半量换液1次，第5天加入阿糖胞苷，终

7、浓度为5mg/L(每孔25μL)。对培养7d的海马神经元进行尼氏染色鉴定。1.4MTT比色法检测Aβ140对神经元的毒性作用培养的海马神经元中加入终浓度分别为0、0.1、1.0、10.0、20.0、30.0μmol/L的Aβ140，37℃体积分数0.05的CO2培养箱内孵育24h后，向96孔板中加入5g/L的MTT20μL,孵育4h后，吸弃上清液,每孔加入150μL二甲基亚砜(DMSO)室温振荡10min，使结晶物充分溶解,用全自动酶标仪读取490nm处吸光度（A）值，每组重复3孔。计算细胞存活率。细胞存活率=检测孔A值/对照孔A值×