参麦注射液对大鼠神经元内质网应激诱导凋亡的影响

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1、参麦注射液对大鼠神经元内质网应激诱导凋亡的影响作者：李晓峰张红董艳玲王铁建李燕华李吕力【摘要】目的探讨参麦注射液对大鼠皮层神经元内质网应激诱导凋亡的保护作用。方法体外培养SD乳鼠皮层神经元细胞，免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度，流式细胞术AnnexinＶ、PI双标检测凋亡率及活性caspase3、9表达，Western印迹免疫分析GRP78、细胞色素C蛋白、Bcl2蛋白表达，Fura2/AM法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度（〔Ca2+〕i）。结果SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养,2μmol/L毒胡萝卜素作用神经元24、48h细胞凋亡率分别是17.88%、21.38%，参

2、麦治疗组分别是7.42%、8.16%，两组差异显著(P<0.05)。胡萝卜素诱导神经元糖调节蛋白GRP78表达上调，活化caspase3、9，使细胞色素C蛋白表达增加，Bcl2表达减少。参麦注射液促进细胞Bcl2表达，抑制细胞色素C释放，减少活性caspase3、9含量，降低〔Ca2+〕i浓度。结论参麦注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致的凋亡可能与其降低〔Ca2+〕i浓度有关。【关键词】细胞凋亡；内质网应激；caspase；Bcl2；参麦注射液14【Abstract】ObjectiveToobservetheprotecteffectsofShenmai(SM

3、)injectiononendoplasmicreticulumstressinducingratcorticalneuronalapoptosis.MethodsPrimarycortialneuronswereculturedinvitroandNSEpositivecellsweredetectedbyimmunofluorescencestainingandimmunohistochemistry.Thepercentageofapoptoticcellsandproteinexpressionofcaspase3,9weredeterminedbyflowcytome

4、tricanalysis.ProteinlevelsofGRP78,cytochromeC,Bcl2wereassessedbyimmunoblotting.Intracellularfreecalciumconcertration〔Ca2+〕iwasmeasuredwithfluorophotometry.ResultsCorticalneuronsofneonateratscouldbeculturedinvitro,thepercentageofapoptosisinducedbythapsigarginafterintervenedfor24and48hwas17.88%an

5、d21.38%respectively.GRP78andcytochromeCproteinlevelswereelevatedincorticalneuronsinresponsetothapsigargin.Theexpressionofcaspase3and9wereactivatedandtheproteinlevelofBcl2wasdecreased.SMsignificantlydecreasedthepercentageofneuronalapoptosisandincreasedtheexpressionofBcl2,reducedneuronal〔Ca2+〕

6、iandtheexpressionofcaspase3and9,inhibitedtheleakageofcytochromeC.ConclusionsSMhaseffectofantineuronalapoptosisinducedbyendoplasmicreticulumstressinvitro,whichmightberelatedtodecreasing14intracellularfreecalciumconcentration.【Keywords】Apoptosis；Endoplasmicreticulumstress；Caspase；Bcl2；Shenmaii

7、njection　　凋亡是脑缺血后神经元死亡的一种重要形式。凋亡信号途径包括外源性、内源性/应激途径。缺血后神经元的凋亡发生是一个多环节调控过程，其中包括基因表达的改变、兴奋性氨基酸的释放、钙离子稳态失衡、热休克蛋白表达受阻、脂肪酸与自由基形成、蛋白酶激活等过程，但脑缺血后神经元凋亡发生的确切机制目前还不十分清楚。内质网可能是细胞内诱导凋亡的一个新场所，内质网在应激状态下，可迅速诱导凋亡。毒胡萝卜素(thapsigargin)为不可逆性内质网钙