mir-145在原发性膝关节骨性关节炎软骨中的表达及其意义

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1、分类号：R684.3学校代码：10062密级：学号：2012701035博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：MiR-145在原发性膝关节骨性关节炎软骨中的表达及其意义TITLE:ExpressionofMiR-145inCartilageofPrimaryKneeOAandItsBiologicalEffects一级学科：临床医学二级学科：外科学骨外科学论文作者：张元民指导教师：冯世庆教授天津医科大学研究生院二〇一五年二月分类号：R684.3学校代码：10062密级：学号：2012701035学位类别：科学学位☐专业学位学科门类：医学

2、博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：MiR-145在原发性膝关节骨性关节炎软骨中的表达及其意义TITLE:ExpressionofMiR-145incartilageofprimarykneeOAanditsbiologicaleffects一级学科：临床医学二级学科：外科学骨外科学论文作者：张元民指导教师：冯世庆教授导师组成员：姚雪副研究员天津医科大学研究生院二〇一五年二月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个

3、人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：张元民日期：2015年2月16日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：张元民日期：2015年2月16日导师签名：

4、冯世庆日期：2015年2月20日中文摘要研究目的探讨miR－145在原发性膝关节骨性关节炎软骨中的表达及其对正常软骨细胞的生物学作用，从而为探讨其在骨性关节炎中的作用机制奠定基础。研究方法收集原发性膝关节骨性关节炎20例和正常膝关节的关节软骨10例，对软骨进行细胞培养，并根据改良的Mankin评分标准对骨性关节炎关节软骨进行分组。应用免疫组化的方法检测miR－145在各组软骨组织中的表达；使用RT-PCR方法检测各组软骨组织中miR－145的表达，应用RT-PCR方法检测软骨细胞中MMP13、X型胶原、RNAK、碱性磷酸酶mRNA的表达，westernblot检

5、测软骨细胞中MMP13、X型胶原、RANK、碱性磷酸酶的蛋白表达；所有数据均应用SPSS19.0软件进行统计学分析。通过生物信息分析技术分析软骨细胞中miR-145的靶向调控基因表达差异，寻找软骨与miR－145共表达基因，并验证。通过Lipofectamine?2000试剂将其转染软骨细胞，通过RT-PCR检测软骨细胞中相关基因的表达量，westernblot检测软骨细胞中相关蛋白的表达量。通过干扰TNFRSF11B，探索其对miR－145抑制的软骨细胞胶原蛋白表达的影响。研究结果MiR－145在正常膝关节和原发性膝关节骨性关节炎的关节软骨中均有表达,其主要位

6、于软骨细胞的胞浆中，RT-PCR结果显示miR－145的表达在骨性关节炎软骨组织中明显低于正常膝关节的关节软骨(P<0.05)，westernblot的结果同样提示原发性骨性关节炎软骨细胞中miR－145蛋白含量均显著低于正常膝关节软骨(P<0.05)，而且随着骨性关节炎严重程度的提高，miR－145的表达、蛋白含量逐步降低，在重度骨性关节炎软骨中这些差异都具有统计学意义(P<0.05)。为了进一步探讨miR－145对正常软骨细胞生物学的影响，我们成功将其转染至培养的软骨细胞，RT-PCR和westernblot对软骨细胞进行检测分析，结果显示：MMP13、Co

7、llagenX胶原纤维蛋白受到抑制；大剂量时（100nM），RANK蛋白表达受到抑制，对ALP的作用不明显；但上述抑制并不依赖于miR－145的浓度。对GSE17785表达普芯片进行分析，骨关节炎相关基因为732个，miR－145I相关基因有192个，同时与软骨相关和miR－145相关的基因有13个；在miR－145过表达质粒转染软骨细胞后，对关键基因蛋白TNFRSF11B进行检测，结果表明，随着miR－145浓度增加，TNFRSF11B蛋白表达降低。正常关节软骨与不同退变程度的骨关节炎（轻度、中度及重度），其软骨组织中TNFRSF11B表达随着退变程度加重，表

8、达水平增高。方差分析显示