igf-1r抗体抑制herceptin耐药卵巢癌细胞的机制研究

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1、单位代码１０４Ｗ学号１０４＾３１２１０３２分Ｒ３９２类号＇ｔ－皆藻乂聲硕±学位论文ＩＧＦ－１Ｒｅｒｃｅｔｎ耐药卵巢癌细胞的抗体抑制Ｈｐｉ机制研究学科、专业：基础医学、医学免疫学研究方向：肿瘤免疫学申请学位类别：医学硕±申请人：王巍指导教师：马远方教授乔春霞副研究员二〇—五年五月关子学位论义独立完成和内容创新的声明本人向河南大学援出硕去学位申请。本人部重穿明：巧里《的学化论丈是本人在导卿巧指导下独立充成的，对巧研究的课题有新的见解。搪我巧知，除先中轉刹加切说明、标泣禾致礙的地分外，讼丈中不包括其化人已經发表

2、或換蜀过的巧究戍粟，也不包括其他人为获得任何教實、科研机相的学位或化书巧化巧过辦材料一。為我闻工作的到事对本部究所傲的任何贵献均芭在论文中俾了明确的说巧并東示了嫌悉。？名人（学位论克：学位申请作老）酱＿＿玄〇＾５年右月＞巧＾关子学位论文磬作权使顯提枚书人经河南大学■审掠批准據子硕击学化，本人完金本。作为学拉论丈的作者了解并罔意河南太学有关保留、谈巧学極论先的要求，即河南大学有权初围家图书馆、科巧借惠桃巧、歡据收藥机构和本校图书馆等捷供学化论皮（紙质史立、展览南大学虫于室扬本和屯子本）切供公众检索、查阔。本人搜权河学校、扭描和捧巧制目的，印学米发展和

3、进巧学术交戚等可供采取影印、繪等复手段化存、汇編）。学位论丈（銀巧文本和电子丈本（及保內容的位论克在解盾适用本辕权书）涉密学密论克许贪蚕違、学位获得（学化）：者．．巧２０月占净年ｔ主位论文指－鬼教师益：学导MECHANISMRESEARCHOFANANTI-IGF-1RMONOCLONALANTIBODYTOINHIBITTHETRASTUZUMAB-RESISTANTOVARIANCANCERCELLSADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentofthe

4、RequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByWangWeiSupervisor:MaYuanfangQiaoChunxiaMarch,2015摘要研究背景：卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，死亡率位列各类妇科肿瘤的首位。手术联合化疗能抑制肿瘤发展，但是复发率高。特异性抗体靶向治疗已经成为卵巢癌临床治疗的研究热点，先后有多种抗体进入临床研究，能够抑制疾病进展，具有良好的应用前景。但是，抗体耐药现象明显影响了疾病预后。因此，探讨卵巢癌抗体耐药的分子机制、寻找有效的干预策略具有重要意义。在前期工作中，我们利用抗HER2抗体曲妥珠长期处理敏感细胞

5、系SKOV3，筛选获得一株抗体耐药的细胞株SKOV3-T。基因芯片分析结果显示，SKOV3-T细胞中HER2表达水平降低，而IGF-1R表达显著上调，提示耐药细胞发生了HER2表位逃逸，而IGF-1R信号通路的激活可能与抗体耐药相关。在此基础上，本研究将进一步确定IGF-1R在抗体耐药细胞系中的生物学功能，并尝试利用抗IGF-1R特异性抗体逆转耐药，探索在诱导耐药的过程中细胞发生适应性改变的内在机制。方法：利用流式细胞术、免疫印迹、细胞增殖、克隆形成、体内成瘤等方法，比较SKOV3和SKOV3-T细胞的生物学活性差异。利用真核转染技术在SKOV3中转入IGF-1R全长质粒提高IGF-1R表达水

6、平，同时在SKOV3-T中转入IGF-1R-siRNA慢病毒下调IGF-1R的表达，借助克隆形成、细胞增殖、体内成瘤、细胞内信号等实验，验证IGF-1R在抗HER2抗体耐药中潜在作用。针对IGF-1R筛选获得了一种人源单克隆抗体LMAb1，借助细胞增殖、迁移、克隆形成、体内成瘤、信号转导等方法探讨抗IGF-1R抗体对HER2耐药的逆转效应；进一步，我们还通过流式细胞术鉴定并分选肿瘤干样细胞，利用细胞增殖、克隆形成、体内成瘤以及细胞内信号等指标，初步探索耐药发生过程中肿瘤干细胞适应性改变的分子机制。结果：HER2抗体耐药细胞SKOV3-T的增殖、迁移、克隆形成、体内成瘤能力均明显强于敏感细胞SK

7、OV3；在敏感细胞中过表达IGF-1R使得细胞增殖、克隆形成、体内成瘤能力明显增强，细胞周期S期延长，而在耐药细胞中转入IGF-1R-siRNA慢病毒，降低IGF-1R表达水平，可以引起细胞增殖延缓、克隆形成和体内成瘤能力减弱，表明IGF-1R在耐药细胞系中具有重要的生物学作用，与耐药细胞的增殖和成瘤能力密切相关；进一步，我们制备了IGF-1R抗体LMAb1，实验表明，LMAb1能够特异性的抑制S