albendazole抑制糖酵解对耐药卵巢癌细胞生存及耐药性的影响研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文Albendazole抑制糖酵解对耐药卵巢癌细胞生存及耐药性的影响研究姓名：何迎盈申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：罗治彬；李少林201205Aibendazole抑制糖酵懈对耐药卵巢癌细胞生存及耐药性的影响研究摘要目的：通过用ABZ抑制人耐DDP卵巢癌细胞SKOV3／DDP的糖酵解酶活性及下调糖酵解相关基因的表达，从而了解ABZ是否能够对SKOV3／DDP细胞的生存、细胞周期及耐药性产生影响。方法：在体外，使用MTTL匕色法检i贝I]ABZ对SKOV3／DDP细胞增殖的影响，求得当增殖抑制率分别为

2、O％、25％、50％、75％所对应的ABZ浓度，按此将实验分为对照组、IC25组、IC50组和IC75组，每组给予相应浓度的ABZ处理，并按ABZ作用时间再将每组分为12h、24h、36h亚组。按照分组和设定时间点，分别用比色法测定己糖激酶(hexokinase，HK)和丙酮酸激酶(pyruvatekinase，PK)活性，用酶标仪法测定乳酸脱氢酶(1actatedehydrogenase，LDH)的活性，用RT—PCR法测定AktmRNA矛IIMycmRNA的表达，用吖啶橙／溴化乙锭荧光双染色法及流式细胞仪观测细胞生存情况，细

3、胞周期仍由流式细胞仪检测。将不同浓度的DDP、EPI、5．Fu按照分组，与ABZ联合和序贯使用来处理细胞，用MTTkl',色法检测SKOV3／DDP细胞体外增殖情况。按照分组使用ABZ处理细胞，在处理后12h、24h、36h时用流式细胞仪分别检测各组细胞表面的P—gP表达。结果：经过不同浓度的ABZ处理SKOV3／DDP细胞发现，ABZ能抑制SKOV3／DDP细胞体外生长。相比对照组，使用ABZ后，细胞死亡明显且呈剂量依赖性，抑制率为O％(IC0)所对应的ABZ浓度为0．00+_0．ooUmol／L，抑制率25％的ABZ浓度(I

4、C25)为1．43±O．21阻-nol／L，抑制率50％的ABZ浓度(IC50)为8．64±0．749mol／L，抑制率75％的ABZ浓度(IC75)为52．48±3．99岬nol／L。ABZ处理SKOV．3／DDP细胞后，HK、PK、LDH活性明显降低，Akt基因和Myc基因的表达也下调，细胞周期停滞于G2及S期。联合和序贯ABZ，均能降低DDP、EPI和5一Fu对SKOV3／DDP细胞的作用浓度。并且，联合使用的效果优于序贯使用。另外，使用ABZ明显减少了细胞表面的P．gP表达。结论：ABZ在体外通过抑制SKOV3／DDP细

5、胞糖酵解酶活性，下调糖酵解相关基因的表达从而使细胞发生死亡、细胞周期停滞，并且还明显地改善了细胞对常用化疗药物的抵抗性，减少了细胞表面P．gp的表达。关键词：阿苯达唑，耐药卵巢癌，糖酵解，凋亡，耐药性4EFFECTOFALBENDAZOLEONSURVIVALANDCHEMORESISTANCEBYINHIBITIONGLYCOLYSISoFCISPLATIN．RESISTANTOVARIANCANCERCELLSABSTRACTObjective：Toinvestigatetheeffectofalbendazole(ABZ)

6、onthe～survivalandchemoresistanceofhumancisplatin—resistantovariancancerSKOV3／DDPcellsbyinhibitionglycolysis．Methods：TheproliferationofSKOV3／DDPcellswasdetectedbyme岫ltlliaz01yltetrazolium(MTT)colorimetryaftertreatmentwithABZinvitro，也enaccordingtotheinhibitionconcentra

7、tionsofO％，25％，50％，75％todevidecellsinto4groups：controlgroup，IC25group，IC50group，IC75汀oup，inaddition，devideeverygroupinto12h，24hand36hsub一印upsinaccordancewithABZ’sactiontime．AftertreatmentwithABZ，activinesofhexokinase(HK)andpyruvatekinase(PK)weredetectedbycolorimetry，a

8、Ctivityoflactatedehydrogenase(LDH)wasdetectedbyELIASA，theeXpressionsofAktmRNAandMycmRNAweredetectedbyRT-PCR，thesurvivalwasinvestiga