日粮精粗比对大足黑山羊生产性能及肉质的影响

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分-‘#单位代码10635学号画7选“土專樣J硕士学位论文曰粮精粗比对大足黑山羊生产性能及肉质的影响论文作者:王子苑指导教师:宋代军(副教授)学科专业:动物营养与飼料科学研究方向:反台动物营养提交论文日期:2015年4月10日论文答辩日期:2015年5月31日学位授予单位:西南大学中国?重庆2015年5月 ThesisforMasterDegreeSubmittedtoSouthwestUniversityEffectsofDietarForaetoConcentrateRatioonProductionygPerformanceandMeatualitofDazuBlackGoatQyCand-icate:WanZiuangySu-ervisor:SonDaiunpgjDisciline:AnimalNutritionandFeedSciencepDirection:RuminantAnimalNutritionAwardedb:SouthwestUniversityyChoninP.R.Chinagqg,Ma2015y, 独创性声明学位论文题目:日賴精粗比对大足黑山羊生产性能及肉质的影响本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果,文中已加了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友。、同仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢?^年:■学位论文作者:签字日期:ul6月?日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁。盘,允许论文被查阅和借阅本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以釆用影印。、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文(保密的学位论文在解密后适用本授权书,本论文:保密,□保密期限至年月止)。"一7‘^7:学位论文作者签名:wio导师签名:Z月日签字日期:女年月日签字日期年>01,, 本研究受到“”大足黑山羊肉质理化分析及其营养调控机理研究一(重庆市前沿与应用基础研究计划般项目,cstc2013cA80039)的资助jyj 目录?MIABSTRACTVI弓X丨S1第1章文献综述11111.日粮精粗比对反当动物生产性能的影响1.2日粮精粗比对反合动物消化生理的影响1212112..日粮精粗比对反当动物瘤胃发酵的影响12日14.2.粮精粗比对采食量的影响211..3日粮精粗比对养分消化利用的影响4115.3日粮精粗比对反会动物肉品质的影响151.1曰.3粮精粗比对肌内脂肪含量的影响116.3.2脂肪沉积的基因表达调控1.4大足黑山羊资源研究状况1814.118.大足黑山羊的起源进化14218..大足黑山羊的种质特性1518.本研究的目的与意义219第章材料与方法2.1试验材料19219.1.1试验设计2.119.2日粮配置21.320.词养管理2220.测定指标及方法220.2.1生产性能的测定221.2.2屠宰性能的测定2.2.3肉质指标的测定2122424..脂肪代谢指标的测定2.2.5肝脏中^;!?基因和基因转录表达水平的测定2472.3结果统计与分析2第3章实验结果293129.日粮精粗比对大足黑山羊生产性能的影响3.2日粮精粗比对大足黑山羊屠宰性能的影响293.3日粮精粗比对大足黑山羊肉质的影响30 303.3.1日粮精粗比对大足黑山羊常规肉质指标的影响03.3.2日粮精粗比对大足黑山羊肌肉营养成分的影响33.4日粮精粗比对大足黑山羊脂肪代谢的影响33313.4.日粮精粗比对大足黑山羊血液脂质代谢指标的影响33.4.2日粮精粗比对大足黑山羊血清挥发性脂肪酸浓度的影响333.5日粮精粗比对大足黑山羊脂肪沉积相关基因表达量的影响345第4章讨论34.1日粮精粗比对大足黑山羊生产性能的影响354.2日粮精粗比对大足黑山羊屠宰性能的影响364日粮精粗比对大足黑山羊肉质的影响36.34日粮精粗比对大足黑山羊常规肉质指标的影响36.3.14.3.2日粮精粗比对大足黑山羊羊肉营养成分的影响374.4日粮精粗比对大足黑山羊脂肪代谢的影响384540.日粮精粗比对大足黑山羊肌肉脂肪沉积影响的分子证据第5章结论435455iSt谢攻读学位期间发表的论文情况57 摘要日粮精粗比对大足黑山羊生产性能和肉质的影响摘要本试验采用随机单位组试验设计,旨在研究日粮精粗比对大足黑山羊生产性能。、屠宰性能、肉质和脂肪沉积相关基因表达的影响-试验选择32只35月龄健康的大足黑山羊,按体重、出生日期相近的原则分成8个单位组,将各单位组内的4只羊随机分到4个处理组,分别饲喂精粗比为4、(。:6(A)、3:7(A2)2:8(A)、1:9A)的,进行59天的饲测定i34日粮养实验了饲喂4种日粮的大足黑山羊的生产性能、屠宰性能、肉质和血液脂肪代谢等指ea--ltimeRHFABP基因标,同时运用RPC技术检测了和转录表达水平,得到的主要结果如下:1.随着日粮精料比例的提高,末重和日增重增加,料肉比下降。A组的末重i极显著高于A2、A3和A4组(p<0.01),其中A3和A4组之间差异不显著(尸>0.05);对于日增重,Ai到A4组分别是:126.27/d±10.73/d、112.29/d土11.98/d、81.14gggg/d±9/d、.30/d±9.14/dA(P<g.43g73gg,其中i和A2组极显著高于A3和A4组0.01),并且A3和A4组之间差异显著(0.01<P<0.05);料重比Ai到A4组分别是:7、±1>//、./±/.01g/g±0.85/g7.91g/g.13g/g9.64±1.14g1069gg1.13gg,各gggg处理组间差异极显著(PCO.Ol)。2.屠宰性能方面,Ai和A2组的宰前活重极显著高于A3和A4组(P<0.01),其中Ai和A2组之间差异不显著(P〉0.05);Ai组的胴体重极显著髙于A2、A3和A组(尸<0.<尸<0.A、、A34.01),其中A3和A4组之间差异显著(00105);!A2和A4组屠宰率分别是39.17%土0.50%、36.62%±0.78%、34.81%±0.25%和33.97%土0..56%,A的屠宰率极显著高于A2、A3和A4组(P<001),i组而A3和A4组之间差异不显著(P〉0.05);Ai、A2和A3组的眼肌面积均显著高于A4组(0.01<P<005)A、八、八差异不显著(P〉0.05)。.,其中3组之间i23.肉质方面,(1)日粮精粗比的改变对常规肉质指标中的pH24h值、滴水损失和肉色无显著影响CP〉0.05);与Ai组相比,A2、A3和A4组的蒸煮损失极显著升高(P<0.01),其中A3和A4组之间差异不显著CP>0.05);Ai和A2组的剪切^力极显著低于A3和A4组(iCO.Ol),其中AA之间差异不显著(P>0.05)i和2组;对于失水率,Ai组到A4组分别为13.04%土0.34%、13.50%土0.23%、13.94%土0.14%4,和1.44%±0.13%各组之间差异极显著(P<0.01);A组的系水力显著高于A2、iA3和A4组(0.01<P<0.05),其中A2和A3组之间、A3和A4组之间差异不显著(P>0.05)。(2)各试验组肌肉的水分含量相近,差异不显著(P〉0.05);与AiI 西南大学硕士学位论文组相比,,八2组的粗蛋白含量显著下降(0.01<P<0.05)A3和A4组极显著降低CP〈0.01),其中A2和A3组之间、A3和A4组之间差异不显著(P〉0.05);Ai、八2、A3和A4组粗脂肪含量分别是:1.57%士0.09%、1.30%±0.10%、1.12%±0.04%、1004%.08%土.,A组极显著高于A2、A和A4组(P<0.01),其中A和A4组之i33间差异不显著(尸〉0.05);氧基酸方面,A组17种游离氧基酸和总氨基酸含量均2髙于其佘三组,由大到小的顺序依次为,八2组>八3组>人1组〉八1组,其中5种鲜味氨基酸:天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸以及赖氣酸的含量在各处理组间差异显著(0.01<P<0.05),各处理组总鲜味氣基酸含量分别为Ai组7.25g/lOOg±0.39g/lOOg、A2组8.10/lOOg土0.71g/lOOg、A3组7.84/lOO土0.51/lOO、gggggA4组7.34g/100g±0.31g/lOOg;背最长肌脂肪酸含量,饱和脂肪酸含量随曰粮精料比例的降低先下降,而当精粗比为1:9时又略微升高;相反地,不饱和脂肪酸含量随精粗比的降低而升髙,最后在A4组出现下降,其中棕榈酸、油酸、亚麻酸、花生酸、二十稀酸和二十四烧酸含量的变化,在各处理组间差异显著(0.01〈P〈0.05),A、A、A3、A组不饱和脂肪酸含量分别是46.75%±0.88%、52.27%±1.33%、i24±一57.08%±2.20%、51.26%1.47%0说明定范围内增加日粮粗料比例可提高羊肉中不饱和脂肪酸含量,降低饱和脂肪酸和鲜味氨基酸含量,但过低的精粗比反而会降低羊肉中不饱和脂肪酸的含量。4.随着日粮精料比例的降低,血清中甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇在血液中的含量也表现出下降,A4组最低。甘油三酷方面,Ai、A2、A3、A4组分别是3.31mmol/L±0.27mmol/L、2.37mmol/L+0.37mmol/L、2.08mmol/L±0.44mmol/L、1.83mmol/L±0.33mmol/L,其中Ai组极显著高于A2、A3和A4组(PCO.Ol),而A2、A3、A4组之间差异不显著(P〉0.05);总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇在各处理组间差异均极显著(PCO.Ol);Ai和A2组的低密度脂蛋白胆固醇极显著高于A3和A4组(PiO.Ol),其中A3和A4组之间差异不显著(P>0.05)。对于VFA而言,乙酸/丙酸比值随着日粮精粗比的升髙而下降,从低到高分别为Ai组0.82±0.04、A2组0.92±0.05、A3组1.80±0.25、A4组2.07土0.48,Ai组极显著低于A3和A4组(P<0.01),A2组显著低于A3和A4<P<^〉血清乙酸组(0010.05)AA之间差异不显著(i0.05)、丙.,其中i和2组;酸和丁酸浓度随精料比例的升高先升高,在A2组达到最大值后极显著降低(P<0。.01)5.FAS(脂肪酸合成酶基因)和腿BP(心型脂肪酸结合蛋白基因)基因在肝脏组织中的转录表达水平随着日粮精粗比的降低而下降。Ai组基因的相对表达量最髙,A2组其次,A4和A3组的表达量最低;与Ai组相比,A2、A4和A3组的^/f-/^45i基因的表达水平分别下降17.45%、55.56%和60.32%;对于FAS基因的表II 摘要达水平,Ai组分别髙于A2、A4和A3组20.72%、44.09%和47.25%。综上,本实验条件下,增加日粮精粗比可以明显提髙大足黑山羊的生产性能和屠宰性能,促进羊肉肌内脂肪的沉积,改善肉质。关键词:精粗比;脂肪沉积基因表达;生产性能;肉品质;III AbstractEffectsofDietarForaetoConcentrateRatioonProductionygPerformanceandMeatualitofDazuBlackGoatQyAbstractArandomizedblockdesignwasemployedinthisstudy,inordertostudytheeffectofdietarforaetoconcentrateratioonroductionerformanceslauhterinygpp,ggperformancemeatualitandtranscritionalexressionofenesonfatdeositionof,qyppgpDazublackoat.gwere32----TherethreetofivemonthsoldDazublackoatsweredividedintoeihtgggroups.Eachrouhadfouroatswithsimilarinitialbodweihtanddateofbirth.gpgygThefouroatsineachrouwererandomlassinedtofeedinoneoffourdietar8ggpyggy(goats/dietary).Fourdietsoftheforagetoconcentrateratiowere4:6(Ai),3:7(A2),2:8(A3)and1:9(A4),respectively.Thefeedingtriallastedfor59days.Indicesincludingroductionerformanceslauhterinerformancebloodliidmetabolismandmeatpp,,ggppweremeasured-quality.AndthenthetranscriptionallevelofFASandHFABPgenesreanaeea-tmePCReesusareasswelzdbyRlirltfellow:y.Th1.Finalbodyweightandaveragedailygain(ADG)wereincreased,andthenfeedconversionratioFCRwasdecreasedwiththeincreaseofdietarforaetoconcentrate()ygratio.FinalbodyweightofgroupAiwerethegreatestamongfourgroups(尸<0.01),buttherewasnosinificancebetweenrouA3andA4P>0.05.ADGofrouAtoggp()gpiA4were126.27g/d土10.73g/d、112.29g/d±11.98g/d、81.14g/d土9.43g/d、73.30g/d±9.14g/d,respectively.ADGofrouAiandA2werereaterthanrouA3andA4(Pgpggp<0.01),andtherewassignificantdifferencebetweengroupA3andA4onADG(O.OKP<0.05).FCRofrouAitoA4were7.01/土0.85/、7.91/土1.13/、9.64/gpgggggggggg土1.14/、10.69/土1.13/resectivelandtherewassinificantdifferenceg,gggggpy,gamonfourrousP<0.01.ggp()2.Withregardtoslaughteringperformance,slaughterweightofrouAiandA2gpwerehigherthanthoseofgroupA3andA4(P<0.01),buttherewasnosignificancebetweenrouAandAP>0.05.CarcassweihtofrouAwasthereatestgp!2()ggp]gamonggroupA2,A3andA4(P<0.01),andtherewassignificantdifferencebetweengroupA3andA4(0.01<P<0.05).DressingpercentageofgroupAitoA4were39.17%0o。o±0.50/)、36.62/o±0.78/c)、34.81/o±0.25%、33.97%±0.56%resectivelandrou,pyg,pAiwasthegreatestamongfourgroups(P<0.01),buttherewasnosignificantdiferencebetweengroupA3andA4(P>0.05).LionmuscleareaofgrouAi,A2andA3pV 西南大学硕士学位论文*nwashiherthanthatofrouA401</<.05buherewasnosiificanceamong.00,ttgp()ggofthegroupAi,A2andA3(P〉0.05).3.Withregardtomeatquality,(1)pH24h,driplossandmeatcolorwerenotaffectedbytheforagetoconcentrateratio(尸>0.05).ComparedwithgroupAi,cookinglossofgroupA2,A3andA4wereincreasedsignificantly(尸<0.01),buttherewasnosignificantdifferencebetweengroupA3andA4oncookingloss(P>0.05).Shearforce(SF)ofrouAandAwerelowerthanthoseofrouA3andAP<0.01buttherewasnoi2p4)gp,g(significancebetweengroupAiandA2P>0.05).DehydrationrateofgroupAitoA4(0owere13.34%、1/、1%土%、1444%.04%±03.50%土O.2303.940.14.土0.13/o,respectivelyandtherewassinificantdiferenceamonfourgrousP<0.01.,ggp()-tWHCAWaterholdincaaciofrouwashiherthanrouAA3ndAbutgpy()gpiggp2a4,,therewasnosignificantdifferencebetweengroupA2andA3,groupA3andA4onWHC(P>0.05).(2)Therewasnosignificantdifferenceamongfourgroupsonmoisture{P>0.05.ComaredwithrouAcruderoteinofrouA2wasdecreased0.01<P<)pgpi,pgp(0.05andthatofrouA3andA4weredecreasedsinificantlP<0,01buttherewas),pg(),gynosignificantdifferencebetweengroupA2andA3,groupA3andA4(P〉0.05).CrudefatofrouAitoA4were1.57%±0.09%、1.30%士0.10%、1.12%±0.04%、1.08%士gp0.04%androuAiwashierthanthatofotherrouP<0.01,buttherewasno,gpghgp()significancebetweenA3andA4(P>0.05.Withreardtoaminoacid,seventeenfree)gaminoacidsandtotalaminoacid(TAA)ofgroupA2washigherthanthatofothergroup,andthesequenceofdescendorderwasgroupA2,groupA3,groupA4,groupAi.Therewassignificanceamongfourgroupstoasparticacid(Asp),glutamicacid(Glu),glycineGl,lsineLsandalanineAla0.01<P<0.05.Thecontentofflavoraminoacid(y)y(y)()()ineachrouwasA7.25/100.39/lOO、A.10/100±0.71/lOO、A37.84gpigg±0gg28ggggg/100±0.51/lOOg、A47.34/lOOg土0.31g/lOO.FattacidinlongissimusdorsiggggymusceaturafattacdwasthtcreaseoftetolstediSFAdecreasedwihedehefora,y()gconcentrateratio,buttheSFAwasincreasedwhentheforagetoconcentrateratiowas1:9nhnarunsaratedfatidUFAwadsiththincreas.Otecotrytutac)secreaedweeof,y(theforagetoconcentrateratio,andtheindiceswasdecreasedingroupA4.TherewassinificantdiferenceamonfourroustoalmiticacidCI6:0oleicacidCI8:1ggg(),pp,()a-linoleicacidC18:3arachidicacidC20:eicosenoicacidC20:landlinoceric(,(0),())gAOacid(C24:0)(0.01<P<0.05).UFAofgroupAi,2,A3,A4were46.75%±0.88/&、ooo52.27/o±L33%、57.08/o土2.20%、51.26%±1.47/oresectivl.Theresultsshowed,pythatcontentofUFAwasincreasedandcontentofSFAandflavoraminoacidwereVI Abstractdecreasedwiththeincreaseofforagelevelwithincertainlimits,butlowforagetoconcentrateratiodecreasedthecontentofUFAinmutton.4ihhedecreaseheforaeconcentraeraioilceridetotal.WttoftgtotttrTG),gy(,sterhn--ndcholeolTCihdensitlioroteicholesterolHDLCalowdensit(),gypp()y--lioroteincholesterolLDLCweredecreasedandtheseindicesreachedthepp(),minimumvalueonthegroupA4.TGofgroupAitoA4were3.31rmnol/L+0.27mmol/Lmmol/L土0mmol/L、2mmol/L±44mmol/L、mmol/L土、2.37.37.080.1.830mmol/LandTGofrouAwashiherhanthoseofrouAandP<.33t,A3A,gpiggp24(0.01),buttherewasnosignificanceamonggroupA2,A3andA4(P>0.05).Therewass-significantdifferenceamongfourroutoTCandHDLCP<0.01.Comaredwithgp()p-trouA3andA4LDLCofrouAandAincreasedsinificanl<0.01buttheregi2p,gpgy(P),wasnos-ignificancebetweengroupA3andA4inLDLCP>0.05.Withreardto()gserumvolatilefattyacid(VFA)aceticacid/roanoicacidwasdecreasedwiththe,ppncreaseforaeconcenaraioandrouAswasiofgtotrtetiwa0.82±0,04A20.92士,gp,0.05,Aswas1.80±0.25,A4was2.07+0.48,andgroupAiwaslowersignificantlythangroupA3andA4(尸<0.01),andgroupA2waslowersignificantlythangroupA3andA4(0.01<P<0.05),buttherewasnosignificancebetweengroupAiandA2onaceticacid/propanoicacid(P>0.05).Aceticacid,propanoicacidandbutyricacidofserumfirstlywereincreasedandthendecreased,andgroupA2reachedthemaximum(P<0.01.)5H-tFABPt.TranscriionlevelofFASandenesinliverissuewasdecreasedwithpgthedecreaseofforaetoconcentrateratioxression-levelofFASandHenesg.EpFABPgofgroupAiwasthehighest,andthatofgroupA2werenext,whilethatofgroupA4and-A2werethelowest.ComaredwithrouAexressionlevelofHFABPeneofgpip,pggroupA2,A4andA3weredecreased17.45%,55.56%and60.32%,respecticely(0.01<尸<0.05).AndtheexpressionlevelofFASgeneofgroupAiwasincreasedby20.72%,44.09%and47.25%comaredwithrouAAandA3resectivel.pgp2,4,pyInsummarytherewasaositiveefectontheroductionerformanceandthe,pppslaughteringperformanceofDazublackoatbyincreasinthedietaryconcentratelevel,ggtttmoderatel.Onheoherhanditcouldfacilitatethefadeositionofmusclesandalsoy,pimrovedthemeatualitwithincreasinthedietarconcentratelevelroerl.pqygy,ppyKeywords:Foragetoconcentrateratio;Productionperformance;Meatquality;FatdepositionGeneexression;pVII ^一。大足黑山羊是近年来发现的个地方山羊遗传资源,产自重庆市大足县十年来,遗传育种工作者对其幵展了扩群和保护等工作,并在遗传性能研究、选种一定的研究进展育种及良种繁育体系建立等方面取得了。2009年10月正式成为国家级畜禽遗传资源,2014年列入国家级畜禽遗传资源保护名录。调查研究发现,59.5±5.8k40.2±3k大足黑山羊成年公母羊体重分别达到g和.6g,超过其它地方品种;遗传特性表现为,毛色全黑,体型较大,耐粗词,适应性强,生长发育快,肉用特征明显,基本可达到两年三胎,初产母羊平均产黑率达到218.0%,经产母羊单胎平均产盖率达272.2%,具有明显的高繁殖性能特征。可见,大足黑山羊繁殖性能高一,产黑率是国内山羊品种和类群中较高的种群之,其生长速度和产肉率都较高,是难得的遗传资源。近年来,对大足黑山羊的研究注重于其种质特性、繁殖性能和生产性能等领域,而对其营养生理、肉质等方面的研究甚少。随着时代的进步,城乡居民生活水平不断提高,饮食结构不断调整,对营养价值高、有利于身体健康的肉产品的需求量也逐渐增加,这就对大足黑山羊科学词养技术提出了更高的要求。影响肉、质的因素很多,如遗传环境和加工等,其中通过饲料营养素调控基因的、营养一表达是提高肉质的主要途径之。日粮精粗比在反台动物消化代谢及改善肉质方面起着举足轻重的作用。长期以放牧为主的词养管理方式,使大足黑山羊对于精料水平较高的词粮已无法适应。鉴于此,本试验结合当地饲料资源设计不同精粗比日粮,测定不同日粮条件下大足黑山羊的生产性能、屠宰性能和肉质指标;同时研究其血液中脂肪代谢指标的变化规律,阐明日粮精粗比对肉质脂肪沉积的影ea-响。在此基础上,运用RltimePCR技术,探索日粮精粗比对脂肪代谢基因表达的调控,揭示日粮精粗比影响大足黑山羊肉质的机理。为促进大足黑山羊产业化发展和养殖效益的提升提供理论依据。IX 第1章文献综述第1章文献综述随着反当动物养殖业集约化程度的提高,为追求高生产性能,大中型养殖场⑴通常釆用高精低粗的日粮类型。研究表明,日粮精料水平的增加,短时间内可取24一得定的效果[]时间的延长化生理出现素乱,但随着,反当动物消,健康受到损害,干物质消化率降低,不仅生产性能下降、产品品质不尽理想,动物的生产年限也会缩短。配制合理的日粮精粗比对反当动物健康养殖至关重要。1.1日粮精粗比对反自动物生产性能的影响5[]反当动物的生产性能主要受到日粮精粗比、粗饲料纤维含量的影响。日粮精粗比不同实际上是日粮营养水平的差异,精料水平高的词粮,因非结构性碳水化-structuralcarbohdrateNSC)等养分含量高瘤胃内的发酵速率和通合物(Nony,,在6[】过消化道的速度较快,消化率升高,从而有效提髙了反当动物的生产性能。产肉能力作为评价肉用家畜生产性能的重要指标,受到词料能量供给的影响较大。众多研究表明,放牧+补词精料的饲养方式可显著提高反会动物的增重效率7-91。[]][。赵占强等分别用精粗比为67.1:32.9、57:43和45.7:54.3的日粮饲喂安格斯牛,结果表明,随着精料水平的增加安格斯牛能获得较好的增重效果和生产性能,11I2[一][]该结论与1¥6、徐吉华等研究致。淡瑞芳研究发现粗比接乂等,当日粮精近55,。,:时反当动物的生产性能达到最佳状态但当反当动物釆食过多精料后瘤胃内容物的pH值会迅速降低,当pH值下降到5.0时,乳酸菌迅速繁殖产生大量一。血乳酸乳酸含量快速升高,会使部分乳酸转化成乳酸钠直接进入血液循环,液中乳酸含量的增高,导致血液中C02结合能力下降,从而引发酸中毒。因此,适宜的日粮精粗比对于维持机体正常生理功能很重要一,定范围内提高日粮精料比例,不仅能够改善肉用家畜的生产性能和词料转化率,同时还可以减少饲料浪。费,提高经济效益14张石荡等[1报道,奶牛的产奶量和4%标准奶产奶量均随精料水平的升高而升60:4040609.59%、15.82%。高,精粗比组较:组分别提高了1杨学梅等人为,不同日粮精粗比对奶牛的产奶量影响较大,当精粗比达到60:40时产奶量为最佳水平。产奶量主要受血糖浓度的影响,饲喂精料比例高的日粮能促进瘤胃内的丙酸异生和饲料蛋白生糖氨基酸的异生作用,从而提高血糖浓度,产奶量增加。虽然在一定范围内增加精料在日粮中所占比例能提高产奶量,但随着产奶量的增加,l6[]。Arriaa-Jordan乳成分中乳脂率会显著降低g等研究表明,增加日粮精料水平会17[]一显著降低乳脂率研究结果致。这主要是由于高精低粗日粮结,这与郭冬生等构使反当动物瘤胃内形成丙酸发酵,丙酸浓度增加,乙酸产量降低,乙酸/丙酸比。值下降,导致乳脂合成效率下降11 西南大学硕士学位论文1.2日粮精粗比对反当动物消化生理的影响1.2.1日粮精粗比对反台动物瘤胃发酵的影响-反会动物可利用单胃动物不能利用的纤维和非蛋白氮(Nonroteinnitroenpg,NPN一)等营养物质,这是由于瘤胃独特的内环境为厌氧微生物繁殖提供了个天然发酵罐-。进入瘤胃的饲料中,4080%可消化的干物质首先经过微生物发酵分解o-为短链脂肪酸(ShrtchainfatyacidSCFA),经瘤胃上皮吸收后进入肝脏合成葡,-NPN萄糖,为机体提供6080%的能量来源;同时瘤胃内的微生物还能利用词料中的18BK[]合成菌体蛋白、族维生素以及维生素等营养物质。显然,作为反当动物所特有的消化器官,瘤胃的稳定发酵是维持机体正常运作的前提,若内环境发生紊乱,则会引起消化障碍,从而导致疾病产生。1.2.1.1日粮精粗比对瘤胃pH值的影响瘤胃pH值是评价内环境发酵状况的基本指标,主要受釆食量与反当时间、日粮精粗比与日粮颗粒大小、挥发性脂肪酸(VolatilefatyacidVFA)的产生与吸收,及排出的影响。瘤胃内容物pH值是食糜中VFA与唾液中缓冲盐相互作用,以及瘤胃上皮对VFA吸收及随食糜流出等因素综合作用的结果。当瘤胃pH<6.2时,6_][-微生物合成菌体蛋白的速率开始降低。Sato等研究发现,pH<5.55.6时,反2[W合动物会出现瘤胃酸中毒的症状。Vaii研究表明,瘤胃pH〉5.7为微生物生长的最佳值。研究发现,日粮精料水平与瘤胃pH值呈负相关,即精料水平升高时,pH值降低。主要原因是精料水平的提高,使日粮中纤维物质的含量下降,减少了反台动物的阻嚼行为,导致进入瘤胃的唾液分泌量减少,缓冲能力降低;再加之精料的发酵速率快,产生的VFA大量堆积,最终导致瘤胃酸度升高,pH值下降。Serment21[]分别用精料水平为等70%和35%的日粮饲喂奶山羊,结果发现随着精料比例的22H值显著降低[]升髙瘤胃p。杨艳玲等研究发现,与饲嚼日粮精粗比为60:40相比,一麦稻型日粮在比例达到80:20时,pH值显著下降,这与Kononof等结果致。24][但汪水平等研究结果表明,瘤胃pH值在不同日粮精粗比条件下均保持在正常变2526[[]]动范围内,精料水平对瘤胃内环境没有显著影响。Farmer等和1^0503110等研究结果同样发现,日粮精料比例对瘤胃pH值的变化没有影响。1.2.1.2日粮精粗比对瘤胃挥发性脂肪酸浓度的影响进入反当动物瘤胃的碳水化合物,首先被微生物分泌的酶水解,生成的短链低聚糖再次被微生物摄取,并产生终产物VFA。反当动物体内,最为重要的VFA有直链乙酸、丙酸和丁酸,约占瘤胃发酵VFA总量的95%,其中乙酸占总量的12 第1章文献综述-7075%。反当动物体内代谢所需的葡萄糖不是由瘤胃微生物分解得来,而是来源于体内肝脏组织的糖源异生,而丙酸是主要的生糖前体物质,乙酸在还原型辅酶ADPH-II(N)的作用下合成体脂,丁酸则以P经丁酸的形式进入肝脏参与体内物。质代谢,可见VFA在反当动物体内最基本的作用是提供能源。瘤胃中VFA的产量和组成主要受日粮类型的影响高精料日粮中淀粉含量高,瘤胃淀粉分解菌占优势,导致两酸和乳酸大量产生,形成两酸发酵,。同时高精瘤胃丁酸浓度及血楽中-料日粮使瘤胃原虫活性增强,从而使P轻丁酸浓度增加。高粗料日粮使瘤胃纤维分解菌产生乙酸和甲烧增多,形成乙酸发酵。大量研究发现,日粮精料水平与瘤胃中丙酸和丁酸浓度呈正相关,而与乙酸浓度呈负相关27—2823[]onono[]。Kf等50:50和75:25的日粮饲喂奶牛分别用日粮精粗比为,结果发21[+]1111现随着日粮精料水平的增加,(乙酸丁酸)/两酸呈现出下降趋势。861116等研究发现,高精料日粮词喂的山羊瘤胃VFA浓度有所升高,其中乙酸/两酸显著下29一[]降。这与张建励等、张腾等结果致。1.2.1.3日粮精粗比对瘤胃氨态氮浓度的影响瘤胃氨态氮(NH-3N)主要来源于饲料中蛋白质氨基酸的脱氨基作用和NPN-物质的降解。瘤胃NH3N的浓,其浓度反应了蛋白质降解与合成之间的平衡状态度除了会受到词料中蛋白质和NPN降解的影响外,还会受到瘤胃上皮吸收和食糜31][-排空速度的影响。NH3N能提供瘤胄内微生物合成菌体蛋白所必需的氮源,因32[]此适宜的瘤胃NH-3N浓度是保证菌体蛋白合成效率的首要条件浓度过高或过,低均不利于菌体蛋白的合成。瘤胃NHrN浓度过低会导致日粮中纤维物质的分解-。N浓度过效率下降,不能满足微生物对氦源的需求,从而影响生产性能当NH3高时,容易引起氨中毒以及尿素合成过量而直接排出体外,造成资源的浪费和损间失。-N浓度受饲料类型由于瘤胃NH3、组成、伺喂方式以及个体差异的影响较大,一4[]-因此目前各试验对最佳浓度没有个准确的说法。Yan等认为,NH3N浓度若g34[]低于5mg/dL会导致菌体蛋白合成效率的降低。Ma等研究12种日粮精粗比对NH-N浓NH-N浓度呈直瘤胃3度的影响发现,随着精料水平的升高,3线上升。这35一36]【[]与鲍宏云等研究结果致。但是Auerre等研究结果表明,日粮精料水平的g-N浓度没有显著影响升高对瘤胃NH3。121.4..日粮精粗比对瘤胃微生物区系的影响反会动物瘤胃内存在着各种各样的微生物,主要包括厌氧性的细菌、真菌、37[]古生菌和原虫,还有少数暖菌体等。其中细菌的数量占微生物总量的绝大部分。瘤胃的微生物种群与宿主之间以及微生物群体之间,在长期自然进化过程中形成13 西南大学硕士学位论文一了个复杂而又完善的发酵系统,它们之间相互制约、相互依赖保证了微生物与宿主及微生物相互间的动态平衡。这种动态关系不仅能影响反会动物的机体健康,从而反映到其生产性能和泌乳性能方面,还能对外界环境以及食品卫生安全产生一定影响。通常情况下,高精料日粮会导致反会动物瘤胃中细菌和纤毛虫数量增多,并且随着精料水平的升髙而逐渐增加。王梦芝等研究不同日粮精粗比对瘤胃微生物区系的影响时发现,与精粗比1090相比,50:50组的瘤胃原虫数量显:著增加,但当精粗比达到60:40时,原虫数量开始下降。研究发现,原虫数量和甲院气体的1839[][]产生呈正相关。张庆節认为,瘤胃内甲院气体的大量产生是导致发酵能量损失的重要因素。因此,合理调控日粮精粗比对优化瘤胃微生物区系具有十分重要的作用。1.2.2日粮精粗比对采食量的影响反当动物干物质采食量(Drymaterintake,DMI)是机体采食营养素以维持基本生产活动所必需的量化基础。DMI受到众多因素的影响,包括日粮精粗比、饲4°[]料可消化率、瘤胃物理填充以及代谢反馈调剂等。当以高精词料作为日粮的主要成分时,适口性的提高使进食速度加快,由于食糜通过瘤胃的速度快于以粗饲料为主的日粮,因此改变了食糜对瘤胃壁的物理刺激以及在消化道停留速度,使41[]反当动物DMI增加,导致饲料消化率发生变化。Johnson等研究发现,DMI随1[〗日粮精粗比的增加而提高:,当日粮精粗比为6040时,DMI达到最大值。王吉峰认为,当日粮精粗比例高于70:30,过少的粗料进食量已不能维持瘤胃的正常发酵,42DM[]I明显下降。薛白等用20:80、50:50和80:20日粮精粗比分别饲喂牦牛和黑白花奶牛,结果发现,黑白花奶牛DMI与日粮精料水平呈正相关,耗牛在精粗比为50:50时有最高采食量。说明适宜的日粮精粗比能提高DMI,进而提高饲粮中。营养物质的利用率综上,DMI的高低是维持和挖掘其潜在生产性能关键所在,摄入不足会限制增重效果,产肉性能和产奶量无法达到最佳水平;摄入过剩不仅43[]会提髙饲料成本,而且大量未被消化吸收的养分会随粪便排出,污染外周环境。1.2.3日粮精粗比对养分消化利用的影响曰粮精粗比的改变其本质是饲粮中碳水化合物的变化。碳水化合物是反会动物日粮中主要的能源物质,大体上可将飼料中总碳水化合物分为结构性碳水化合44[]物(StructuralcarbohydrateSC)和NSC,具体分类见图1。虽然SC和NSC在,瘤胃内最终都会被降解为VFA,为动物机体提供能量,但是两者分子结构的不同决定了其发酵速度。SC在瘤胃内的发酵速度较慢,故能量的释放也相对较慢,其数量与构成决定了日粮中的可利用能量;与SC不同,由于NSC在瘤胃中能快速14 第1章文献综述降解,故其在日粮中的比例决定了瘤胃的初始发酵程度。日粮中SC和NSC的比(eutraeentier例是影响反当动物对中性洗潘纤维NldtergfbNDF)、酸性洗漆纤维,(Aciddetergentfiber,ADF)降解率的主要因素。谭支良认为,当绵羊日粮中NSC:SC为1:2.86时,瘤胃能最大限度发挥其功能,提高营养物质的降解率。研究表明,增加日粮中淀粉含量可显著降低日粮中纤维素的消化率,若提高日粮NDF47]_[的比例该作用效果会更明显。Waldo也认为,NDF在瘤胃内的消化速率与日粮中NSC比例呈负相关,且当NSC比例为75%时,NDF消化率最低。Knowlton48[]等分别用精粗比为75:25和50:50的日粮饲喂奶牛,研究结果表明,日粮精粗比49[]的降低可提高粗纤维的消化率。王加启等研究表明,当日粮精粗比为50:50时,NDF和ADF降解率达到最大值:30可不同程度地影响NDF;但将精粗比提髙到70和ADF的降解率。非结构性糖,碳水化合物淀粉f有机酸非纤维性碳水化合物夂其他储备性碳水化合物总碳水化合物彳果胶物质〉半纤维素、结构性纤维i中性1碳水化合物木质素酸性t洗漆纤维、酸性或中性洗漆不同氮I洗涤纤维」■.图1词料中碳水化合物的分类F1Trigureheclassificationofdietarycarbohdatey1.3日粮精粗比对反与动物肉品质的影响1.3.1日粮精粗比对肌内脂肪含量的影响肉品质是由多个指标共同决定的一个性状,最初肉品质被定义为消费者对肉类的满意程度随着时代的发展和科技水平的提高,人们对肉类的要求逐渐从数量到质量发生转变,评定肉品质优劣的指标也从最初的嫩度、pH值、肉色、系水a-力(WterholdingcapacitWHC)等,增加到风味、肌内脂肪(IntramuscularfatIMF)y,,含量、脂肪酸以及氨基酸含量。影响肉品质的因素众多,例如品种、年龄、性别、营养水平、饲养方式和宰前应激,其中营养水平对肉品质有着至关重要的作用。因此,怎样在实践生产中根据广大消费者的需求生产出优质的肉类,是未来很长一段时间动物营养学者需要关注的焦点。大量研究表明,,日粮精粗比对反当动物肉质嫩度和IMF含量有直接影响其51]原因可能是精料和粗料中大量营养物质之间组合效应的结果[。宋杰研究发现,高能量水平日粮饲喂的盖羊,IMF含量高,胴体脂肪沉积较快,从而肉样的嫩度15 .西南大学硕士学位论文52[]得到提髙。李冬光等认为,高能量水平日粮可显著改善杂交牛肉的熟肉率和嫩5354[]I]度,而对胴体肉色、刘也报、pH值和大理石纹指标影响不显著。陈红跃丽等道,随着能量水平的升髙,育,日粮能量水平的高低是影响牛肉嫩度的重要因素肥期肉牛的MF沉积越多,嫩度越高。其原因是日粮能量水平的升高改变了原有的肌纤维状态和结缔组织含量以及蛋白酶在肌肉中的结构,增加IMF含量的同时。使剪切力下降,改善了肉质的嫩度总体说来,高精粗比日粮主要通过促进IMF的沉积,提高肉质的嫩度、保水性和熟肉率,而对于精粗比对其他肉质指标的影响,如pH值、肉色等鲜有报道。1.3.2脂肪沉积的基因表达调控肉质的脂肪沉积不仅决定了肉的嫩度和风味,还关系到肉产品是否符合绿色健康食品的标准。作为中等遗传力性状,动物机体的脂肪沉积能力主要受到脂肪合成、脂肪分解和脂肪酸转运三大部分的调控,因此凡是参与这三个过程的各种55[1因素如酶、激素以及营养水平等,都可以对机体内脂肪代谢进行调节。11.3.2.脂肪合成的基因调控56][研究发现,动物机体的肝脏和脂肪组织是脂肪合成的主要场所。甘油三酯(TrilycerideTG)是哺乳动物体内含量最多的脂类,由3分子的脂肪酸和1分子g,、的甘油酷化形成。肝脏中合成的TG与载脂蛋白磷脂和胆固醇结合后,以极低密度脂蛋白(Verylowdensitylipoprotein,VLDL)形式|C存于脂肪组织中。机体脂肪沉积所需的脂肪酸大部分来自于脂肪酸的从头合成一系列的酶参与,该过程需要才能完成,如脂肪酸合成酶(Fattyacidsynthase,FAS)、乙醜CoA幾化酶(AcetylCoAcarboxylase,ACC)和苹果酸脱氧酶(Malatedehydrogenase,MDH)等。ACC是脂肪酸合成过程中的限速酶,能催化乙酷CoA转化为丙二酸单酰CoA;MDH是催化L-苹果酸成为草酰乙酸的酶,后者与乙酰CoA缩合的产物能进入三幾酸循57FAS则是动物[]环机体内脂肪酸合成的转录调控关键酶,其主要作用是催化乙;酷CoA、丙二酸单酷CoA和NADPH合成内源性脂肪酸。58][FAS活性的提高能显著增加TG的生成,从而促进体脂的沉积。MS基因表59[]达量直接影响FAS活性的高低,其在组织中的表达量通常受到日粮营养成分及激素水平的影响,起初认为营养成分是通过调控基因的转录水平从而达到调节表达量的效果,但后来的研究发现,营养素对基因表达的作用主要发生在转录或是翻译前水平上■。高精料日粮因富含NSC,通过提高E45基因的表达水平从而促进_脂肪的沉积。Clarke等对大鼠分别禁食24h和48h,然后饲喂高碳水化合物日粮,结果发现禁食24h的大鼠肝脏组织中基因表达量是禁食48h的100倍。6i[]Mildner研究结果表明,用髙蛋白质日粮伺喂猪会使其脂肪组织中Fd^SmRNA.*16 第1章文献综述_的丰度下降。Girard等也发现,当饲喂高脂肪、低碳水化合物的日粮时,断奶仔鼠肝脏组织中FAS的表达量受到明显抑制。有研究发现,日粮中的营养物质是6364[】[】通过胰岛素的作用来提高FAS基因在机体内的表达。Yin等研究胰岛素对脂肪细胞的影响,结果发现加入lOn/mL胰岛素培养48h后,脂肪细胞中g的丰度与对照最相比提高了近7倍。1.3.2.2脂肪分解的基因调控动物机体的脂肪沉积是一个复杂的过程,当机体内糖原摄入不足以提供活动所需能量时,脂肪会在分解酶的作用下水解为甘油和脂肪酸,在血液循环的作用下运输到其他组织氧化利用。在脂肪动员过程中,激素敏感酷酶(Hormonesensitive---lipaseHSL)、碱脂1(Carnitinealmitoltransferase1CPT1)和腺苷酸,酰转移酶py,AMP-ac活化蛋白激酶(tivatedroteinkinaseAMPK)的活性显,著影响着体脂的沉p积。,其中HSL是经典的TG水解限速酶其活性受到磷酸化或去憐酸化的调控65[]howdha-早在1994年,Cry等已将猪的HSL基因精确定位在6p1.11.2上。有研究发现,不同组织中的FSZmRNA水平存在着显著差异,如在心肌和骨豁肌中没67_[]有检测到HSXmRNA,而在怀孕动物的卵巢中则能检测出。潘洪彬等研究不同能量水平日粮对乌金猪//见基因表达量的影响,结果表明用高能量日粮词喂的-HSL基因的表达水平显著下降乌金猪,当体重在30100kg时脂肪组织中。1.3.2.3脂肪酸转运的基因调控血液中的游离脂肪酸不仅能以简单扩散方式一一,从高浓度侧向低浓度侧扩散进入脂肪细胞内合成TG,还能通过协助扩散的形式进入脂肪酸转运体系。目前研究已发现几种能促进脂肪酸转运的蛋白,如脂肪酸结合蛋白(FattyaddbindingroteinsFABPs)、(FatacidtransortroteinFATP)和脂肪p,脂肪酸转运蛋白ypp,酸移位酶(Fatyacidtranslocase,FAT)。一68[]FABPs是类分子量较小结构特殊的细胞内蛋白,脂肪酸与FABPs结合后通过细胞膜被运送到TG和磷脂的合成位点进行氧化和醋酷化。FABPs最初7[”是在1984年由Ockner等在肠系膜中发现,而最先在心肌细胞中发现的即被命--名为心型脂肪酸结合蛋白i-H(HeartfatacidbndinroteinHFABP)。除FABPy,gp夕卜,目前还发现8种不同类型的脂肪酸结合蛋白,分别为脂肪型脂肪酸结合蛋白----(AFABP)、脑型(BFABP)、髓憐脂型(MFABP)、表皮型(EFABP)、回肠--)-T-型(ILFABP、肝脏型(LFABP)、睾丸型(FABP)和小肠型(IFABP)。H-FABP对长链脂肪酸有很强的亲和力,它在细胞内与脂肪酸结合后,使细胞一定范围内保持稳定从而促使细胞摄取脂肪酸内外的浓度差在,。通过对小鼠H-FABP基因进行敲除试验-FABP,证明H能够承载着长链脂肪酸在细胞衆和亚细17 西南大学硕士学位论文71][胞器之间顺畅通行,对脂肪酸的转运和代谢调节起着至关重要的作用。已确定’-FABP基因序列包含-H1.6kb的上游控制区和0.2kb的3非转录区。不同物种之间虽然内含子差异很大,但外显子具有高度的保守性。H-FABP不仅有调节脂类代谢以及参与细胞内脂肪酸隔室化分布等生物学功能-FABP对脂肪沉积的作用还表现在能调节MF的含量,此外H。有研究认为,H-FABP基因多态位点上不同的等位基因可能使骨豁肌细胞中脂肪酸的流动更有7273]][[。erbens研究发现-效,使得肌内脂肪沉积加速G,HFABP基因的表达量与猪背最长肌中IMF含量存在正相关。1.4大足黑山羊资源研究状况1.4.1大足黑山羊的起源进化据《大足县农牧渔业志》、《大足县志》和《〈民国重修大足县志〉点校》记载和对当地农户和长者调查,以及对大足黑山羊地方类群及周边地区山羊品种的亲74][缘进化关系研究,表明大足黑山羊与合川白山羊、金堂黑山羊、成都麻羊的遗一传距离较远,并且遗传性能相对稳定个独立,是长期繁衍于大足及周边地区的自然类群,伺养历史至少超过百年。.14.2大足黑山羊的种质特性大“”足黑山羊毛色全黑,大多数有角有髯,角粗壮、向侧后方伸展呈倒八字型,鼻梁平直;耳窄、长,向前外侧方伸出;体型较大、躯体呈长方形,前胸。376k±2k、.发达,胸宽深生长发育较快,周岁公、母羊体重平均分别为.g.6g277kg±3.2kg;屠宰率较髙,周岁公、母羊屠宰率分别为44.93%±2,28%、44.72%±1.24%。一-大足黑山羊达到性成熟最早为4月龄,公羊般初配月龄为78月,利用年限5-年以上,68,母羊6月龄幵始配种利用年限年。母羊常年发情,产后发情间隔时间短,利用率高,两年三胎;乳房结构好,泌乳能力强,盖羊成活率高;适应性强,耐粗饲,在南方湿热环境中能正常生长和繁育,抗病能力强;适宜于广大山75[]区(牧区)放牧和农区、半农半牧区圈养。1.5本研究的目的与意义本试验主要研究日粮精粗比对大足黑山羊生产性能、肉质指标及常规营养成分的影响,同时从脂肪沉积相关基因raRNA表达水平入手,对其有关脂肪酸代谢一一的营养调控机理进行探讨,为进步开发利用大足黑山羊这优良种质资源,生产高品质羊肉积累更多的资料。18 第2章材料与方法第2章材料与方法2.1试验材料2.1.1试验设计-本试验采用随机单位组试验设计,从35月龄大足黑山羊中,分别选出体况良好、健康无病的32只公羊,按体重、出生日期相近的原则,分成8个单位组。将各单位组的4只羊随机分到日粮精粗比分别为4:6(A)、3:7(A、2:8(A、1:9i2)3)(A4)的处理组,进行饲养实验。试验期为59天,其中预饲期10天,正式期49天。测定饲喂4种日粮的大足黑山羊的生产性能、屠宰性能、肉质和血液脂肪代Re--limePCRFABP基因转录表达。谢等指标,然后运用at技术检测FAS和H水平2.1.2日粮配置8-参照中国肉用山羊词养标准(NY/T162004)中的山羊营养需要量,根据大足黑山羊长期养殖模式和当地饲料资源状况,设计日粮。具体精料配方和日粮组成及营养成分见表1、表2。表1日粮精料配方Table1Formulationsofdietaryconcentrate原料Ingredients配比Percentage(%)玉米Cora50麦麸Wheatbran12豆柏Sobeanmeal24y菜粕Rapeseedmeal8憐酸氢I?Calciumhoshate2pp碳酸韩Calciumcarbonate1食盐Salt1预混料Premix2注:预混料为每千克词粮提供:Can.6;P9:1:Cu25m;FeSOOm;Mn20m;Zn40m:ggMggggggCo2mSe0.8mVA0VD0UVE390。g;g;62500lU;6550l:10IU19 西南大学硕士学位论文表2日粮组成及营养成分(干物质基础)Table2CompositionandnutrientlevelsofthedietsDMbasis()日粮组分日粮组成Experimentaldiet(%)%—Comosition)p(AA,A;A4丨混合粗料Compoundfomeg苜稽干草Alfalfahay18212427黑麦草Ryegrass12141618酒糟Brewersdriedrain30354045g馄合精料Compoundconcentrate40302010营养成分NutrientlevelsDECMJ/Kg)8.898.227.556.88CP(%)14.2313.4012.5611.72EE(%)2.432.372.312.25CF(%)21.1624.0526.9529.84Ca(%)0.910.870.840.80P(%)0.570.510.450.39:a西南地区规模化牛羊养殖场因干草资源缺乏注,地方酒厂的白酒糟常作为粗词料原料使用。本研究所釆用的酒糟千物质中粗纤76--[〗,粗蛋白为维含量实测值为31.3%〗2.8%,属于粗词料范畴,CFN形式为1110000》b营养成分中CP和CF为实测值,DE、EE、Ca和P为计算值。2.1,3饲养管理动物试验于2014年3月8日至5月7日在大足县铁山镇双桥村大足黑山羊育8:000种基地进行,共计59天。试验羊按处理组分群饲喂,每天喂料2次(和16:0),每次投料前先词喂精料、苜蒂草粉和酒糟的混合日粮,再投喂新鲜的黑麦草,下。次投料前收集剩料并称重;自由饮水每日记录采食量,观察试验羊采食、排泄情况以及精神状况。试验期间按照常规要求进行免疫、清洁和消毒。实际投饲量通过干物质采食量与日粮干物质百分比的比值计算得出,每只羊的干物质采食量为活体重的5%。根据羊的体重、增重和词喂情况,各组日粮饲喂量每15天调整1次。=(1)实际投饲量干物质采食量/日粮干物质百分比=(2)干物质釆食量5PFx5%式中:5『为活体重,单位为kg。2.2测定指标及方法22.1生产性.能的测定以处理组为单位,将各处理组的饲料累加,计算日采食量(Averagedailyfeed20 第2章材料与方法naeI):itkADF;每只羊试验幵始和结束时,于早晨800空腹称重,记录末重(kg),与初始重(k),并按如下公式计算出日增重(AveraedailainADG)和料重比ggyg,(FeedconversionratioFCR)。,=-(1)日采食量(ADFI)(投喂量剩料量)/试验天数/各处理组羊只数=(2)日增重(ADG)-(试验末体重试验初体重)/试验天数比=(3)料重(FCR)日采食量/日增重2.2.2屠宰性能的测定饲养试验结束后,随机选取3个单位组,共12只大足黑山羊,称宰前活重。、、采用静脉放血屠宰的方法,剥除毛皮,去掉内脏头前肢膝关节和后肢趾关节77[]以下部分,称取肾脏及其周围脂肪在内的躯体重量,记为胴体重。立即取倒数第1与第2助骨之间背最长肌的横切面,用于眼肌面积的测定。通过测定宰前活重、胴体重,计算出屠宰率;用硫酸绘图纸描绘出眼肌横切面的轮廓,并用如下公式估测眼肌面积。=><(1)屠宰率胴体重/宰前活重100%2二Xx(2)眼肌面积(cm)眼肌髙度眼肌宽度O.72.2.3肉质指标的测定77[]饲养试验结束后,随机选取3,参照张英杰的方法个单位组的大足黑山羊,°静脉放血后屠宰,每只公羊采集新鲜背最长肌用自封袋装好,置于4C保存的肉样用于常规肉质分析-;e存于2(rc冰箱的肉样供营养成分测定。2.2.3.1常规肉质指标旳测定(1)pH24h值°测定前先用H=C冰p6.86标准憐酸盐缓冲液对pH计进行校正,从4箱中取出屠宰后冷藏24h的肉样,室温下用手术刀切幵肌肉面,然后将电极头部完全包埋在肉样中,以便H计能插入肉样中心部位。静置5min以上p,读取数据,每个肉78H值三次[]样测定p。(2)滴水损失XXm一将肉样切成235c的长方体后称重,计为ffi;用别针钩住肉样的端,使肌纤维垂直向上,装,肉样不与袋壁接触,口入充气的塑料薄膜袋中扎好袋,°79C[]吊挂在4冰箱中,je藏24h后再次称重,计为^^2。计算公式如下。=-X滴水损失(%)(WW)/PF100%iii21 西南大学硕士学位论文(3)肉色将屠宰后24h内的背最长肌切为约2cm厚的肉片,置于全自动色差仪上测定**值I;值、a值和b,读数稳定后,记录读数旋转肉片,再次记录读数,如此重复;-4次测得的结果取平均值3。(4)剪切力°从4C冰箱中取出熟化96h的肉样,放置室温后,将肉样放入8(rC恒温水浴锅中加热,当肌肉中心温度达到7(rc时取出冷却至2(rc。按与肌纤维平行方向切3cm-1cm,LM3B型成长,宽、高均为的条状肉块用数显式肌肉嫩度仪C测其剪一三次_切力,同样品测量,计算平均剪切力。(5)蒸煮损失取出肉样,用感应量为0.0001kg的天平称蒸煮前肉样重,计为的;将肉样置于9(rC恒温水浴锅中加热45min,取出后冷却至室温,在通风处瞭干后再次称重,81[]计为计算公式如下。=^X10蒸煮损失(%)1^2/^0%1(6)失水率切取厚度约为1.0cm的肉片.0001k,用感应量为0g的天平称压前肉样重,计为Wi;用滤纸将肉样夹住,上下各垫20层滤纸,加压至35kg,并保持5min后51[]立即称量压后肉样重,计为的。计算公式如下。=-失水率(%)(JVfrxioo%i2)m(7)系水力82[]用烘干法测得肉样的含水率,按如下公式计算系水力。=-X系水力(%)(含水率失水率)/含水率I00%2.2.3.2肉质营养成分的测定(1)干物质,05t:烘箱中供至恒重,用感应量为0将洗净的称量瓶置于1.0001g的电子天平称重,记录为Fo。待肉样充分解冻刹成碎肉后,准确称量3g左右的样品放入105rPF。称量瓶中,记录为的,于烘箱中供至恒重,称重并记录数据2计算公式如下:=-rX干物质含量(%)(mfVo)/iioo%(2)粗蛋白,称取1g左右的肉样,准确至0.0002无损地放入消化管中,加入硫酸铜0.4g6,0mL。2(rC的g,无水硫酸钾g与肉样混合均勾后再加入浓硫酸1置于4消煮炉上消化,直至溶液呈透明的蓝绿色后,再加热消化15min。取出放凉后移入100mL22 第2章材料与方法。容量瓶中,作为试样分解液按照全自动定氮分析仪测量程序进行测定。最后用O.lmol/L盐酸标准滴定溶液滴定,溶液由亮蓝色变为浅粉红色为终点。计算公式如下:'=-VXXX粗蛋白含量(%)(V12)Xc0.0146.25/w(V/V)式中:C为盐酸标准滴定溶液浓度,mol/Lm为肉样质量F;,g;为滴定时所j需盐酸标准液体积,mL,mLF为空白滴定所需盐酸标准液体积厂为试样分解;2;液总体积。(3)粗脂肪°入滤将置于105C烘箱中干燥后的肉样,精确称取0.7g左右,记录为队放°纸包中。于105C烘箱中烘至恒重,冷却后称重,记录为ffi。将滤纸包放入索氏°抽提器中,用无水乙酸抽提8h,取出后置于105C烘箱中干燥2hF。,记录为Pi计算公式如下:粗脂肪含量二(%)/『式中:PT为取样肉样换算成鲜样的质量,干物质含量(%)(4)氨基酸指标的测定A肉样的前处理准确称取样品250mg于15x150mm试管中,向试管加入10mL6mol的盐酸,-振荡混勻。用酒精喷灯把该试管口下1/3处拉细到46mm,抽真空10分钟后封管。°C将处理过的试管置于110土rC的恒温烘箱中,沙浴水解22h后拿出冷却至室温,摇勻过滤。取ImL滤液于50mL烧杯,在水浴锅中6(rC恒温水浴至滤液蒸干,加入0.02mol盐酸稀释13倍,用0.22滤膜过滤上机分析。B分析条件一-采用日立L8800型全自动,53min氨基酸分析仪个样品分析周期为,分析°时有两个柱(1)分离柱(4.6mmx60mm):洗脱液流速0.4mL/min,柱温70C,11柱压.627MPa(2)反应柱:苗三酮及萍三酮缓冲液流速0.35mL/min,柱温;°135C,柱压1.078MPa。(5)脂肪酸指标的测定A肉样的前处理准确称取冷冻干燥的肉样1g于50mL离心管中,分别加入1mL的苯和3mL的5%甲醜氯溶液(10mL乙醜氯缓慢加入100mL无水甲醇中),游祸震荡1min°C后70水浴2h,水浴过程中若溶剂蒸发,则冷却后加入2mL苯继续水浴。水浴,5mL6%、1mL1min500rm完成后冷却至室温加入碳酸钾溶液苯,震荡后1p离心5min。将上层溶液转入10mL离心管中,用无水硫酸钠干燥,震荡后静置1h,1500rpm离心5min后取上层苯溶液待测。23 西南大学硕士学位论文B分析条件-B-FFAPxx采用岛津GC/MS2010气相色谱仪,配色谱柱D(30m0.25mmO.25°o14rCCrC^m)柱温采用程序升温方式,初始温度(,以5/min的速度升温至23(,保持8min。检测器温度23(rC,进样口温度23(rC。载气为高纯氮气,总压力为100kPa,总流量49.2mL/min,吹扫流量3.0mL/min,尾吹流量30.0mL/min,H2流量40.0mL/min,空气流量400.0mL/min,分流比:1:50,进样量:1iL。^2.2.4脂肪代谢指标的测定饲养试验结束后,随机选取5个单位组,共20只大足黑山羊进行采血(已禁食24h,8h)。早晨空腹颈静脉釆血10mL,注入离心管内断水,待血样常温自然3500r-2(rC凝固后,pm离心15min,取上层血清,分装后保存,用于血液指标测定。2.2.4.1血液中脂质代谢指标的测定运用分光光度计参照试剂盒说明书方法测定甘油三酯、总胆固醇、髙密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇共4个指标,试剂盒购自南京建成生物工程研究所。2.2.4.2血清挥发性脂肪酸指标的测定(1)血清的前处理取1mL血清样品于10mL离心管中,分别加入0.2mL的50%硫酸溶液,2.0°mL的乙醚,震荡30次后10000rm离心5min4C冰箱内放置30min上p,于,取_层乙酸溶液备用。(2)分析条件-20-FFAKxx采用岛津GC/MS10气相色谱仪,配色谱柱DB30mmO.25mmO.25°°°[un)o柱温采用程序升温方式,初始温度100C,以5C/min的速度升温至150C,保持5min。载气为高纯氣气,进样口温度27(rC,分流比:1:50,进样量:1[iL,°检测器温度280C。2-.2.5肝脏中FAS基因和HFABP基因转录表达水平的测定2.2.5.1总RNA的提取饲养试验结束后,,随机选取3个单位组的大足黑山羊,静脉放血后屠宰采集每只公羊的肝脏组织-rc保存备用。,立即置于液氮中速冻后,8(肝脏总RNA的提取严格按照大连宝生物TaKaRa试剂说明书的方法进行,获得的RNA利用1%琼脂糖凝胶电泳检测质量。总RNA提取操作步骤如下:24 第2章材料与方法样品置于研钵中,加入液氮快速研磨至粉末状IA酶的1取适量粉末状样品于无RNA酶无DN.5mL离心管I加入适量的提取液RNAisoPlus后祸旋混勾I室温静置5minI。13000rin4C心10mhp离I上清液转移至一DNAmL新的无RNA酶无酶的1.5离心管加入1/5RNAisoPlus体积量的氯仿I振荡混勻,室温静置5minI°12000rpm4C心5niin离一水相层溶液转移至新的无RNA酶无DNA酶的1.5mL离心管加入与上清液等体积的异丙醇mn颠倒混勾后室温静置10ii°心12000rm4C10minp离加入1mL75%乙醇清洗沉淀I弃上清保留沉淀各真空浓缩干燥后溶解于适量的DEPC处理水中各琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量25 西南大学硕士学位论文2.2.5.2cDNA的合成?cDNA的合成严格按TaKaRa公司的PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser试剂盒说明书进行。并按说明书的操作步骤去除RNA中残留的gDNA详细操作步骤如下:(1)gDNA的去除表3去除DNA反应体系gTable3ReactionsystemofgDNAelimination反应液成分体积5XgDNAEraserBuffer2iL[DNAEraser1iLg\总RNA5RNasedFreeH^O2iL[总体积10°反应条件:42C,2min。(2)cDNA的合成cDNA合成体系为20iL体系。\表4反转录反应体系Table4Reactionsystemofreversetranscription反应液成分体积纯化的RNA10Lh5XPrimeScritBufer24xLpfPrimeScritRTEnzmeMixI1py^irMixLRTPrme1pRNaseFreedHO4)Ls\总体积20°°反应条件:37C15min合cDNA85C5s终止反。,成;,应2ea-tmePGR引物设.2.5.3Rli计与合成84_85[]H--R引参照参考文献设计FABP和只4>^基因RealtimePC物,序列见表5。所有引物由上海Invtroenig公司合成。26 第2章材料与方法5-表RealtimePCR引物序列Tarmefr-bReiassalesSequencesofirsoaltmePCRpy’’基因基因登录号引物序列一目的(53)TaretenesAccessionnumberPrimerSeuenceggqAF479289F:CCCAGCTCAACGAAACCR:GACGAGGTCAACACCCTTCC'FABPAYH157617F:TGACCAAGCCTACCACAAR:CACTATTTCCCGCACAAGGAPDHAF030943F:ACTTTGGCATCGTGGAGGR;GAAGAGTGAGTGTCGCTGTTG2-.2.5.4RealtimePCR检测?o-RadCFX96PCRYBRPren采用伯乐Bi实时突光定量仪,参照SiixExTaq试剂盒建立20iL反应体系(表6),PCR反应条件见表7。以基因为内参^基因,利用GeneStudy软件分析基因的相对表达量。6-表RealtimePCR反应体系T-abRsRealPle6eactionystemoftimeCR反应液成分体积SYBRPremixExTaq10iL|cDNA1iL|上游引物llL^下游引物1LndHO7Ljn总体积.20nL-表7imePCRealtR反应条件Tab-mele7ReactionconditionofRealtiPCR反应条件温度时间。预变性95C3min变性95V10s复性5rC30sT2V30s^循环数40个2.3结果统计与分析“试验数据经Excel初步统计后用SPSS18.0进行方差分析,结果以平均值±”法标准差表示,多重比较采用q。27 西南大学硕士学位论文28 第3章实验结果第3章实验结果3.1日粮精粗比对大足黑山羊生产性能的影响表8日粮精粗比对大足黑山羊生产性能的影响TablesEfectofdietarforaetoconcentrateratioontheroductionerformanceygppofDazublackgoat-.A:::.i46A237A28A^OP)()3()()ForagetoconcentrateratioIn13.0士2.3913.12士2.3013.05±2.2913.05士2.24初始重itialweightk7(g)?。。^^。仁20.53±2.82...士2..土.末重F1975±2691784721737272inalweihtkg(g)如?'。匸」曰增重ADG(士〔g),士0.71.±.81.149.43.±.12627131229119873309140.89±0....土0...日采食量ADFI14088土01407812078士015(kg)°^?八.士0.8±.9.64±1..69土1.13料重比FCR(g/g)70157.911131410<注:①同行中不含相同小写字母表示差异显著0.01<P0.05)同行中不含相同大写字母者表示差异极显著(尸<0.01(;②):③下表同。Note:Datewiththediferentlittleletterinthesamerowaresinificantldiferent0.01<?<0.05;②Datewiththedifferentcaitalletter?gy()pareexremesicanerentPOhesamemeannforothertables.inthesamerowtlynifitliff.Ol)③Tigyd(;g不同精粗比日粮饲喂大足黑山羊,生产性能见表8,结果显示,Ai组末重极显著高于其余三组(尸<0.01),其次是A2组,A3和A4组最低,其中A3组略高于A4组,但两组之间差异不显著(P>0.05);日增重方面,Ai组日增重也极显著高于八2、A3和A4组(P<0.01),分别提高了11.11%、35.77%和41.98%日粮精粗;比的改变对羊只的采食量并无显著影响(P>0.05);从表8还可见,料重比随精粗比的升高而极显著降低(P<0.01),Ai组分别低于A2组11.39%、A3组27.28%、A4组34.42%。由此看来,日粮精粗比的增加,使大足黑山羊日增重和末重提高,料重比明显降低。3.2日粮精粗比对大足黑山羊屠宰性能的影响表9日粮精粗比对大足黑山羊屠宰性能的影响Table9EfectofdietaryforagetoconcentrateratioontheslaughteringperformanceofDazublackgoat匕.A4:6A3:7A2:8Al:9i()3()4(2())Foragetoconcentrateratio^19_33士..±..土..i.宰前活重Slauhterweihtk193190016717231401667l72gg(g)^?^±P〔3t7.57士0.67.97±0.76.000.5.士0.胴体重Carcasswe66(56767ihkg(g)&?'。。匸。屠宰率Dressinercentae(%)39.17±0.5036.62±0.7834.81±0.2533.97士0.56gpg?^^匕眼肌面积13.86士2.6213.64±2.4712.92±2.6912.02士1.31Lionmuscleareaerf()日粮精粗比对大足黑山羊屠宰性能的影响见表9。对于宰前活重,Ai和A2组极显著高于A3组、A4组,其中A和八2组之间差异不显著(P>0.05);Ai组胴体i重极显著高于A2、A3和A4组(P<0.01),分别提高了8.61%、26.17%和33.51%;屠宰率方面,Ai组也是最高,与Ai组相比,A2、A3和A4组分别降低了6.51%、A^11.13%和13.28%,其中3与八4组之间差异不显著(i〉0.05);眼肌面积而言,Ai、A2和A3组显著高于A4组CP〈0.05),但Ai、A2和A3组之间差异不显著CP29 西南大学硕士学位论文>0。、.05)可见,随着日粮精粗比的升高大足黑山羊的胴体重屠宰率和眼肌面积均增加。3.3日粮精粗比对大足黑山羊肉质的影响3.3.1日粮精粗比对大足黑山羊常规肉质指标的影响表10日粮精粗比对大足黑山羊常规肉质指标的影响Table10EffectofdietaryforaetoconcentrateratioonthemeatualitarametersgqypofPazublackgoat八4:6A3:7A2:8Al:9】(),()3()^()toconcentrateratio值6.30±0.266.29±0.106.23±0.066.13±0.17Cc?''±'^±知Cooko%...±...蒸煮损失inlss3205±0.29337406435.090273581069g()丨C。匚。?''紅.±±Fkf3...剪切力S.270093.47±0093.810114.17±0.07(g)滴水损失Driloss%2.48±0.022.51±0.062.53±0.072.55±0.07p()°〔?八失水率Dehdrationrate%)13.04±0.3413.50±0.2313.94±0.1414.44±0.13y(&仙b?=?。^*系水力WHC(%)82.57±0.4381.79±0.4481.17±0.3280.44±0.28'L41.98±0.4942.18±0.2742.32±0.1542.81±0.38@色*a.58士0.431...±0..±.11177±0321192511209056“M,eatcolor'b14.47士0.1514.06±0.7613.85iO.5213.47±0.55由表10可知,pH24h值和肉色值,Ai组较A2、A3和A4组均稍有升高,但?差异不显著(尸>0.05)滴水损失、肉色!;、a值随着日粮精料比例的升髙,均;而■呈现下降趋势,但各处理组间差异不显著(P〉0.05)。由此看来,日粮精粗比的变_*化对肌肉pH24h值、a\b、滴水损失、肉色L值影响不明显。从表10还可看出,蒸煮损失Ai组极显著低于A2、A3和A4组(PCO.Ol),分别下降了5.01%、8.66%、10.50%,其中A3与A4组之间差异不显著(P〉0.05);曰粮精料比例的提高使Ai和A2组的剪切力极显著髙于A3和A4组CPCO.Ol),其中A.05),Ai与八2组之间差异不显著(P>0;失水率方面4组的失水率也极显著高于其余三组(P<0.01),与A4组相比,Ai组降低了9.69%、A2组降低6.51%、八3组降低3.46%;对于系水力而言,Ai组显著高于A2、A3和A4组(0.01<P<0.05),分别提高了0.95%、1.72%、2.65%0以上结果说明,肌肉的剪切力、蒸煮损失和失水率随日粮精粗比的升高而下降,系水力则随精料比例的升髙而升高。3.3.2日粮精粗比对大足黑山羊肌肉营养成分的影响3.3.2.1日粮精粗比对大足黑山羊常规肉质营养成分的影响表11日粮精粗比对大足黑山羊肉质营养成分的影响(鲜肉基础)(%)Table11EffectofdietarforaetoconcentrateratioonthemeatnutrientinredientsyggofDazublackgoat(Freshbasis)(%)八八3:7A2:8AU1:9?〗_2().())toconcentrateratio.水分Moisture74.80±0.4274.17士0,6674.04土0.6073.83士038?'=。^沾b'?de.±0...±..±.粗蛋白Crurotein25113323;76±06223100762213079p^?^?'=?'Crude1.57±0.091.3(}±0.10I.12±0.041.08±0.04粗脂肪fat30 第3章实验结果不同日粮精粗比对大足黑山羊肉质常规营养成分影响见表11。结果可见,曰粮精料水平的升高对肌肉中水分含量提高的趋势,但差异不显著(P〉0.05);肌肉粗蛋白含量方面,Ai组显著高于A2、A3和A4组(0.01<P<0.05),分别提高了5.68%、8.70%、13.47%,其中八2和A3组之间,A3和A4组之间差异不显著(P〉<0对于粗脂肪含量.01)A0.05),A组也极显著高于其余三组(P,与组相比,;iiA2、A3和A4组分别下降了17.20%、28.66%、31.21%。由此看来,日粮精料水平的增加显著提高了背最长肌中粗蛋白和粗脂肪的含量,但对各试验组间水分含量的影响甚微。3.3.2.2日粮精粗比对大足黑山羊肌肉氨基酸含量的影响表12日粮精粗比对大足黑山羊肌肉氧基酸含量的影响(g/lOOg)Table12EfectofdietaryforagetoconcentrateratioonthecontentofaminoacidofuaDazblackgotg/lOOg()S八1(4:6)A.(3:7)A3(2:8)A^(l:9).eoconcenraeraiotttt仙灿灿&.±.士0.0±±0天冬氨酸As1390.0315851.480.061.47.05p0.75士0.±.±0苏氨酸Thr.040820080.80.050.76±0.040.6±0..±._士0...丝氨酸Ser10306800706604062±003&b±'^G2.29士0.08.0.08...±.谷氨酸lu252243士005231010'&b±^_09±.1.260.12.±..±.丙氨酸Alal007121005111006Bb处灿b?^l0.93±0.101.23士0.101.10±0.06o.97±004甘氨酸Gy.半胱氨酸Cs0.21±0.010.29±0.070.24+0.010.22±0.01yVa.83士0.050.91±0.070.89±0.060.84±0.04缀氨酸l0±蛋氨酸Mt0.44士0_030.490.040.48土0.020.45±0.01e异亮氨酸lie0_83士0.050.90±0.080.88±0.060.84士0.03亮氧酸Leu1.46±0.091.56±0.161.53士0.121.47士0.07T0.6±..±0..±..±.酷氨酸r100406605065004062003yi苯丙氨酸Phe0.88士0.080.960.080.95士0.070.89±0.02b±''^&0士s.41±0.02.09.54±0.07.480赖氨酸Ly11.6311.06组氨酸His0.63±0.080.70±0.070.69±0.060.64±0.04士土±0精氨酸1.170.071.280.151.26.091.19±0.04Arg0.72±0.070.87±0.130.84士0.060.74±0.0脯氨酸Pro1a7.±..±..士0..士.鲜味氣基酸F2503981007178451734031lavoraminoacidb6±0土±必需氨基酸EAA.62.367.270.577.080.437.04±0.43总氨基酸TAA16.28土0.8918.34±1.2517.65±0.8816.59±0.57EAA/NEAA0.64±0.080.66±0.020.67士0.010.68±0.01/0=:EAATAA.41b0.0030.4(^0.0010.40±0.0050.40±0.001注:a鲜味氣基酸包括A、Glu、Ala、GlLs。spy和yb必需氣基酸包括Thr、Val、Met、He、Leu、Phe和Lys。12。7种氨基酸含量中日粮精粗比对肉蛋白中氣基酸含量的影响见表在1,日粮精料比例的升髙显著影响5种氨基酸在肌肉内的含量。天冬氨酸:A2组的含量显著高于A3和A4组(0.01<P<0.05),A3组次之,A)最低,并且八2组极显著髙于Ai组13.67%CP<0.01);谷氨酸和丙氨酸方面:A2与A3组的含量显著高于A4和Ai组(P<0.05),其中A2组和A3组之间,A4与Ai组之间差异不显著(P>0.05);对于甘氨酸含量:A2组极显著高于A4、A组(P<0.01)提高了26.80%和i,分别3226%A>0.05)。:八.,其中2与A3组之间差异不显著(P对赖氨酸而言2组含量31 西南大学硕士学位论文显著高于Ai组15.60%(P<0.05),但与A3和A4组之间差异不显著(尸〉0.05);从鲜味氨基酸含量来看,A组含量最高2,其次为A3组,A4组和A组最低,但是i各处理组间差异不显著(P<0.05);必需氣基酸含量方面,A2组含量也稍高于其余三组,与A3、A4和Ai组相比,分别提髙了2.68%、3.37%.9.82%,但精粗比的升高对必需氨基酸含量影响不显著(尸>0.05);结果还显示,日粮精粗比的变化对EAA/NEAA和EAA/TAA无显著影响(PXKOS),比值趋于稳定。由此看来,随着日粮精料水平的增加,羊肉中各游离氨基酸以及总氨基酸含量均呈现先升高后降低的趋势,由大到小的顺序依次是A2组〉A3组〉A4组〉Ai组。3.3.2.3日粮精粗比对大足黑山羊肌肉脂肪酸含量的影响表13日粮精粗比对大足黑山羊肌肉脂肪酸含量的影响(%)Table13EfectofdietarforaetoconcentrateratioonthecontentofygfattyacidofPazublackgoat(%)匕.A4:6A3;7A2:8A4l:9F,()2()3()()oragetoconcentrateratio,必'±'必...±2.4...Citi78215317662963±1.543222±186I6:0棕榈酸Palmcacid35C18:0脂酸Stearicadd1.14±0.470.91±0.130.45±0.220.95±0.32硬"也'"40"±±0"C18.23±1.042.651.66.72.11.6.3:l油酸Oleicacid74324^21C18:2亚油酸Linoleicacid2.81±0.913.88土0.174.03±0.843.71±0.62?'沾^C18:3亚麻酸ci-Linolenicadd1.08±0.571.33±0.683.28±0.691.21±0.2严''"-^'>.±....±..±0.4C20iid11021341049±14998610912135:0花生酸Arachdicac>^'="**C20ik0.77±0.340.89±0.352.26±1.041.25±0.33:l二十稀酸Ecosenoacidhencac,..i0...._C22id208士01719337120±067133士036:0二十二院酸BeiC22:l芥酸Erucicacid1.66i0.623.49±0.863.57±1.013.44士0.81“灿?'版C24:0二十四院酸Linocericacid3.24±0.292.63±0.331.78±0.462.11±0.36g^?"^'±±2'=SFA53.25±1.1647.7313严42.92.4048.74±1.46.±Be沾&'^?''UFA46.750.8852.27±157.....3308±2205126±147?°&^"^*^MUFA42±.46..671.1747.02±0.884955±1.6829±1.62Bb心^砠PUFA3.88±1.455.21±0.697.31±0.864.93±0.48B*^^''^°''±'±±UFA/SFA0.87±0.031.100.061.330.131.050.06"“注:aSFA包括C16:0、C18:0、C20:0、C22:0C24:0。和bUFA、,、。包括C】8:lC18;2C18:3C20:l和C22:lc:、:。MUFA包括C18lC20l和C22:ld88。PUFA包括CI:2和CI:3如表13所示,Ai组的SFA含量显著高于A4组9.25%(0.01<P<0.05),同时Ai组极显著高于A2和A3组(P<0.0O,分别提高了11.57%和24.07%。日粮精粗FA<^<比的升高导致A3组U含量显著高于A2、A4和Ai组(0.01/0.05),分别提髙了9.20%、11.35%和22.10%;MUFA、PUFA和UFA/SFA方面,A3组含量也显著高于其余三组(0.01〈P<0.05),A2组含量次之,A4和Ai组含量最低;从表中还可知,肌肉中掠榈酸、油酸、亚麻酸、花生酸、二十稀酸以及二十四院酸的含量受日粮精粗比的影响较大,在各处理组之间差异显著(0.01<P<0.05)。由上看出,日粮精粗比的变化导致羊肉脂肪酸含量呈现出两种趋势,对于饱和脂肪酸而言,随着日粮精料比例的升高出现先降低后升高的趋势,在A3组达到最低值;而不饱和脂肪酸则随精粗比的增加而升高,A3组含量最高,随后在A2组含量开始下32 第3章实验结果降。3.4日粮精粗比对大足黑山羊脂肪代谢的影响3.4.1日粮精粗比对大足黑山羊血液脂质代谢指标的影响表14日粮精粗比对大足黑山羊血液脂质代谢指标的影响(mmol/L)Table14EffectofdietaryforagetoconcentrateratioonthebloodfatmebabolismparametersofDazublackgoat(mmol/L)粗&.A4:6A23:7A2:8A4l9,:i()()3()()Foragetoconcentrateratio如Bb??"甘油三酷TG3.31±0.272.37±0.372.08±0.44l.SSiO.SS^?。°TC4.40±0.383.40±0.302.65±0.321.21总胆固醇.69±0A?。°-±±.±±HDLC...0....高密度脂蛋白胆固醇18101414801079009022006?。 ̄'匸-低密度脂蛋白胆固醇LDL.±..±.1±0.C251015195025.4218如表14所示,、,与Ai组甘油三酷含量相比A2A和A4组的含量极显著低于3A组(PCO.Ol),分别降低了28.40%、37.16%、44.71%,其中Az、A3和A4组之i间差异不显著(P>0.05);对于总胆固醇,Ai组极显著高于A2、A3和人4组(P<0.01),与Ai组相比,ki、A3和A4组含量分别降低了22.73%、39.77%、61.59%;高密度脂蛋白胆固醇方面,Ai组含量也极显著高于A2、A4和A3组(尸<0.01),Ai组分别是A2组的1.2倍、A3组的2.3倍、A4组的8.2倍;对于低密度脂蛋白胆固醇而言,与A2、A3和A4组相比,Ai组极显著升高了28.72%、66.23%、76.76%(P<0.01),其中A3与A4组之间差异不显著CP〉0.05)。可见,大足黑山羊血液中甘油三酷、总胆固醇、髙密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量均随日粮精粗比的升尚而升尚,Ai组的血液脂质代谢各指标均为最大值,其次是八2,A3和A4组的数值最小。3.4.2日粮精粗比对大足黑山羊血清挥发性脂肪酸浓度的影响表15日粮精粗比对大足黒山羊血清挥发性脂肪酸(VFA)浓度的影响Table15EfectofdietaryforagetoconcentrateratioontheserumVFAofDazublackoatg八4:6A.3:7A2:8AU1:9,()()3())concentrateratio"知?=ZMetcac.±..±0.0±..Acidmmol/L14900230261560^242±002i()?'?'''^°'"^''^.±..±0.1....immo1810063291044±018121±025丙酸PropanoicadiyL()-2?'=舰?&'x.77±0.224.15±0.293.61±0.092.84±0mmo.14丁酸Butyricacid(lOl/L)2册?''^知乙酸/丙酸Aceticacid/Proanoicaid0.82±0.040.92±0.051.80±0.252.07±0.48p日粮精粗比的变化对大足黑山羊血清中VFA浓度的影响见表15。由表15可知,A2组乙酸浓度极显著高于A3、A4和A组(PCO.Ol),A2组分别是A3组的i1.1倍,A4组的1.2倍、Ai组的2.0倍;血清丙酸浓度方面,A2组两酸浓度也极显著高于其余三组(尸<0.01),与A2组相比,Ai、A3和A4组分别降低了44.98%、56.23%和63.22%,其中A3与A4组之间差异不显著(P〉0.05);A3、A4、A组的i33 西南大学硕士学位论文一,丁酸浓度与A2组相比稍有下降变化趋势与乙酸浓度致,从大到小依次为:八2〉A〉A(<P<.乙酸/丙酸比值随4组,0.01005)组〉A3组i组各处理间差异显著;着日粮精粗比的升高而降低,Ai组极显著低于A3和A4组(PCO.Ol),A2组显著低于A3和A4组(0.01〈尸<0.05),其中Ai和A2组之间差异不显著(P〉0.05)。由此可见,乙酸/丙酸比值随着日粮精粗比的提高而下降,血清中VFA的浓度则随精料比例的升高呈现出先增大后降低的趋势,三种VFA浓度均在A2组均达到最大。值,其中乙酸和丁酸浓度在A,两酸浓i组中最小度则是在A4组中达到最低值3.5日粮精粗比对大足黑山羊脂肪沉积相关基因表达量的影响表-FABP基因16日粮精粗比对大足黑山羊和H表达量的影响TFAS-FABPable16EffectofdietaryforagetoconcentrateratioontheexressionlevelofandHpgenesofliverofPazublackgoat入4:6A.3:7A32:8Al:9,))?((().()toconcentrateratioFAS1.34±0.361.11±0.250.91±0.080.93±0.04-HFABP1.26±0..±.23104±0150.50±0.120.560.15为了明确日粮精粗比对大足黑山羊脂肪沉积相关基因表达的变化规律,以总RNA反转录后所得cDNA为模板,为内参基因,并以表5所列引物进行Rea-ltimePCR检测。结果如表16所示,基因的转录表达水平随着日粮精粗比的下降而下降,与Ai组相比,A2、A4和A3组分别降低了17.16%、30.69%和32.09%;基因的转录水平也随精粗比的下降而下降,与Ai和A2组相比,A3组的相对表达量大幅度下降,分别降低了60.32%和51.92%,并且A3组相对表达量也低于A4组,与基因表达量趋势相同。上述结果显示,随着日粮精料比例的降低,脂肪沉积相关基因在肝脏中的表达量均下降,在日粮精粗比为2:8达到最低值,当。精粗比继续下降时,基因表达量逐渐上升34 第4章讨论第4章讨论4.1日粮精粗比对大足黑山羊生产性能的影响精粗比是影响反会动物日增重的重要因素,这是因为高精粗比可以提高日粮_8687[]营养水平,能有效促进肌肉的生长和蛋白质的沉积,提高动物的增重速度。,本试验结果表明,随着日粮精粗比的升高大足黑山羊的末重和日增重均显著增力口,说明羊只的生长速率受饲粮营养水平影响较大。日粮精粗比的改变,其本质是词粮中SC与NSC比例的变化,精料水平的增加可使微生物生长所必需的能源一易消化碳水化合物的浓度提高物质,导致瘤胃微生物活性增强,从而提高机体对日粮中营养物质的消化、代谢与利用,最终影响动物的增重。日粮精料比例的提高也意味着日粮中蛋白质水平的增加,研究表明,高蛋白水平日粮能明显提高88[1耗牛对干物质的消化率,从而改善氮的利用率,提高反当动物的生产性能。Papi_[82]等、梁大勇研究发现,高精粗比日粮可明显增加反当动物的日增重,该结论一_与本研究结果相致。而代江生等用精料比例分别为100%、70%、50%、30%的4种日粮饲喂2月龄盖羊75天,结果发现精料比例为70%组的日增重比其余三.Ol),组都髙,差异极显著(PCO;100%组在育肥前期日增重最高但在育肥后期出现酸中毒一,随即日增重迅速降低。可见,在定范围内提高日粮精料比例,有利于大足黑山羊的生长育肥,但过量的精料会导致瘤胃液酸度过高,破坏瘤胃内91[]。微生物区系的平衡,从而产生各种代谢疾病和障碍考虑到大足黑山羊长期以放牧为主,日粮结构中粗料比例髙,达到90%,甚至不补精料,为了避免试验羊在短时间内不能很好适应精料水平较高的饲粮而发生酸中毒现象,故本试验并未设计日粮精粗比较高的处理组。反当动物干物质采食量与饲料营养特性(饲料消化率、精粗比、瘤胃物理填充以及代谢反馈调节等)有关。NRC(2001)认为,当日粮精料水平占干物质总量60%以上时,干物质采食量会随精料水平的升髙而增加。也有研究发现,饲粮92_93[】营养水平的提高对生长盖羊干物质采食量影响不大。本试验结果可知,随着曰粮精粗比的升高,大足黑山羊干物质采食量稍有升高,但差异不明显。分析其原因可能是由于日粮精粗比的提高引起瘤胃微生物区系的改变,纤维降解菌减少,粗纤维利用率下降,导致黑羊的釆食量与低精粗比组相比差异不大。本次试验中还发现,虽然试验组间采食量无明显差异,但由于词料组分不同,各处理组之间一k料重比的差异较大,这数据说明精料比例越大,饲料转化率越高,生产1g羊9495[][3肉所需的饲料质量越少,可获得较好的经济效益。这与杨彬彬等、江喜春等研究结果相符。35 西南大学硕士学位论文4.2日粮精粗比对大足黑山羊屠宰性能的影响一项重要指标胴体重和屠宰率是评定畜禽肉用性能高低的,眼肌面积是反映96]家畜胴体发育程度的指标[,通常情况下,眼肌面积与胴体重存在正相关。研究97_98表明[]。,日粮能量水平与反会动物屠宰性能密切相关从本试验结果来看,宰前活重、胴体重、屠宰率随精料比例的增加而增加,此外眼肌面积也随日粮精粗比的升高而增大,意味着日粮精粗比的增大有助于提高大足黑山羊的屠宰性能。其可能原因是随着精粗比的增加,日粮营养水平也同时升高,加快了羊只体内蛋白质的合成速度,提高词料转化率;也有研究认为精粗比的提高能促进反当动物_1^[]消化系统的发育,进而增强其对营养物质的吸收。赵彦光等对放牧状态下的云南半细毛羊补词不同程度的精料,结果表明胴体重、宰前活重和屠宰率均随补_饲水平的升高而显著增大(P<0.05)。研究表明:刘鹤翔,试验3组(5050)比试验1(30:70)、2(40:60)组7的胴体重分别高出.79%和5.64%,屠宰率均高出1.02%,并且试验1组的眼肌面积最小,试验2、3组都显著高于1组(P<0.05)。说明日粮精粗比的改变会导致宰前活重、胴体重、屠宰率和眼肌面积等屠宰指标。随营养水平呈线性变化,营养水平越高,产肉性能也就越好4.3日粮精粗比对大足黑山羊肉质的影响4.3.1日粮精粗比对大足黑山羊常规肉质指标的影响一系水力是影响羊肉多汁性、风味和营养成分的重要指标之、嫩度,这是因为系水力低的鲜肉水分流失快,即滴水损失和失水率较高,水分的损失会伴随着肌肉中可溶性的蛋白质和风味物质以及血红素的流失。通常我们所说的水分指的是r:存在肌纤维中不易流动的水,在屠宰后损失的也是这部分水。本试验发现,大足黑山羊肌肉的系水力隨精料比例的升高而升高,失水率和滴水损失的变。化趋势则与系水力相反究其原因,日粮精粗比的升高有利于IMF的沉积,增加了肌纤维中的疏松组织,从而保留住更多的水分,系水力因此提髙。赵彦光等研究发现,高营养精料日粮滴水损失显著降低(??<,与低营养水平精饲料组相比1°5[]0.05)。4:68:2的全混合日粮词喂4月龄羊只闫秋良等分别用精粗比为和,结果表明,高精粗比日粮组的蒸煮损失较低精粗比组低,本试验研究结果与之相符。?61=[]-有研究表明,r0。肉样的蒸煮损失与多汁性存在很强的负相关性(.50)嫩度也是评定肉质优劣最常用的指标,其很大程度上受大理石纹脂肪水平的一1”定范围内[]影响,IMF水平的升高会使肉的嫩度提高。本试验结果表明,随着日粮精粗比的升高剪切力显著下降,这可能是因为高精料日粮影响了盐溶性和酸溶性胶原蛋白的比例以及胶原蛋白的交联程度,使羊肉中新合成的热不稳定胶原蛋白或可溶性胶原蛋白的比例提高,肉的成熟度降低,从而肉质嫩度得到改善;36 第4章讨论也有研究认为,日粮低营养水平组的胴体较轻,皮下脂肪较薄,使得胴体在预冷1%[]时其温度下降过快,容易引起寒冷收缩,导致肌肉剪切力的增加。综合上述结果可知,,日粮精粗比的升高可以明显改善羊肉嫩度,提高保水性降低失水率和。蒸煮损失,使羊肉品质得到提升本次研究还表明,日粮精料比重的升高对羊肉pH24h值和肉色影响不显著。pH1^值下降是导致肉质发生改变的主要原因[]。Warris等认为pH值过高或过低都会影响肌肉汁液的渗出。本试验中,宰后24h的pH值虽然随着精料比例的增加呈一=5-现缓慢上升的趋势.86.3)说明,但依旧维持在正常范围内(pH24h定程。度内日粮精粗比的升高,对羊肉的pH值影晌不大目前,日粮营养水平对胴体肉一111一[]色影响的研究结论不致,李冬光等、李旭等报道,定范围内日粮营养水82]平的提高对牛肉胴体肉色影响不大[。梁大勇分别饲喂6月龄荷斯坦公牛低、中、*高三种精粗比日粮,2个月后屠宰测其肉色发现,高精粗比日粮组的I;、a\b值n3]〉[均低于低精粗比日粮组,处理组间差异不显著(P0.05)。而李石友等研究不同蛋白质水平对杂交肉牛肉质的影响,发现当日粮蛋白质水平为20%、17%、14%*和11%时的I;、值显著高于对照组(P<0.05),但从a值来看,各试验组与对*P>0照组相比差异均不显著(.05)。由本试验结果可知I;a,肉色和值在低精粗?比时较高一,而b值较低,研究结果与前人不致的原因可能是品种、年龄和营养水平均在不同程度上影响了胴体肉色。4.3.2日粮精粗比对大足黑山羊羊肉营养成分的影响本试验结果表明,日粮精粗比的升高使羊肉脂肪含量增加,这可能是由于高精日粮满足机体合成脂肪所需的葡萄糖含量,从而使山羊在育肥期间沉积了较多51的体脂肪[]F,保证了羊肉的美味和多汁性。宋杰研究结果表明,髙能量组的IM114[尸<]含量显著高于对照组(0.05),能明显改善肉的口感。杜讳对荷斯坦淘汰奶牛饲喂不同能量水平的日粮,结果发现用高能量水平日粮伺喂的荷斯坦奶牛,其牛肉的粗蛋白含量比低能量组高,该结论与本次研究相符,证明精粗比的升高伴随着日粮蛋白水平的提髙,为肌肉的生长提供了充足的能源物质,加快了肌肉蛋白质的合成效率。(TotalaminoacidTAA)肉类中总氨基酸,,含量越高尤其是必需氨基酸511E[1(ssentialaminoacid,EAA)含量越高,肌肉的营养价值则较高。本试验测得人体所需7种EAA,即赖氣酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(lie)、苏氨酸(Thr)、織氣酸(Val)和苯丙氨酸(Phe)。结果表明,不同精粗比模式下的4种羊肉EAA含量丰富,必需氨基酸含量占氨基酸总含量(EAA/TAA) ̄的40%41%,符合FAO/WHO标准中40%的推荐比例并且,各试验组必需37 西南大学硕士学位论文氨基酸含量与非必需氨基酸含量的比值(EAA/NEAA)均高于60%,满足FAO/WHO对优质蛋白质的评价标准。此外,苏氣酸(Thr)、蛋氧酸(Met)和苯丙氣酸(Phe)占FAO理想氨基酸含量的90%以上,赖氣酸(Lys)、组氣酸(His)和精氦酸(Arg)含量更是高于理想気基酸含量,这说明大足黑山羊羊肉满足人类对优质蛋白质食品的要求一,是消费者较为理想的肉类。本研究结果还发现,定范围内增加精料比例可以提高羊肉中游离氣基酸含量,但继续加大精料词喂量则不利于富含氨基酸的优质羊肉的产生。作为鲜味氨基酸,天冬氨酸(As)、谷氨酸(G、甘氨plu)酸(Gly)和丙氨酸(Ala)在鲜肉中的含量明显受到精料水平的影响,这意味着117曰粮精粗比主要通过增加肌肉中鲜味氣基酸的含量从而改善羊肉风味[]。梁格旺研究也发现,羊背肌中鲜味氨基酸的含量随着稻草饲喂量的降低以及精料蛋白水平的增加而呈上升的趋势。通常来说,肉类中所含的脂肪酸多为长链脂肪酸,按饱和度将其分为饱和脂肪酸(SaturatedfattacidSFA)和不饱和脂肪酸(UnsaturatedfatacidUFA),其y,y,中UFA按照不饱和键的个数再分为单不饱和脂肪酸(Mommsaturatedfattacidy,MUFA)和多不饱和脂肪酸(Polyunsaturatedfattyacid,PUFA),PUFA根据双键位---置及功能的不同又可将其分为C03系列和?6系列。a亚麻酸、二十碳五稀酸(EPA)二二-和十碳六稀酸)3(DHA)属于0系PUFA;亚油酸(LA)、共辄亚油酸(CLA)一-和花生四稀酸(AA)属于C06系PUFA。SFA是自然环境下的种脂肪形式,广泛存在于动物性脂肪和植物油中,大部分SFA对机体内胆固醇含量有升高的作用,如掠榈酸、月桂酸、豆蔻酸以及花生酸等。SFA摄入过量易导致高血脂、高血压一糖尿病、心脏病等系列疾病的产生。相反,UFA有调节血脂、清理血栓和预防心血管疾病的作用,并且还有增强机体免疫力、提高视力和记忆力等功能。随着人类生活水平的提高,越来越多的人意识到UFA对人体健康的重要性,因此富含UFA的食品受到更多人的青陳。研究发现,动物体内脂肪酸的含量和类型主要受到词粮营养的影响本研究结果表明,调节日粮精粗比能直接影响肉类中脂肪酸的含量,,,特别是SFA和UFA含量随着日粮粗料比例的升高大足黑山羊羊肉中UFA/SFA比例逐渐上升,除Ai组外,其余三组羊肉中UFA含量均高于SFA含量,UFA/SFA大于1.0,说明用低精粗比词喂的山羊其肉中脂肪酸构成比例较好,符合现代健康绿色食品的标准。4.4日粮精粗比对大足黑山羊脂肪代谢的影响TG和总胆固醇(TotalcholesterolTC)是血衆中的中性脂肪,广泛存在于动,物机体中。TG是由甘油的3个轻基和3个脂肪酸缩合而成,哺乳动物以TG的形。式把供能物质,主要参TC是生物膜和胆it存于脂肪组织中与机体内的能量代谢38 第4章讨论汁酸的重要组成成分,同时也是类固醇激素和维生素D的合成原料机体内TC的含量受饲粮因素的影响较大,当动物摄入高能量饲粮时,动物机体TC的合成量增多,通过血液循环使血液TC的浓度提高。本试验结果表明,随着日粮精粗比的增加,血液中TG和TC含量均明显上升,说明高精日粮可使机体内总脂肪水211平显著的提高[1。贾玉东研究发现,随着精粗比的逐渐提高,血清TG浓度呈上:、P<升的趋势,全精料日粮组浓度最大,显著高于307035:65日粮组(0.05)。刘mi[研究结果也表明TG作华,随着日粮能量水平的升高,血清和CHO含量均显著提高(P<0.05)。这些结论均表明,高精日粮可显著提高大足黑山羊体内的脂质代谢能力,从而加快脂肪沉积。血液中的脂质通过与特殊蛋白质一(载脂蛋白)以疏水性相互作用结合在起,-。形成脂质蛋白质复合物,以脂蛋白形式在血液中被运输根据脂蛋白分子大小和密度的不同将其分为高密度脂蛋白(HihdensitlioroteinHDL)、低密度脂蛋白gypp,(LowdensitylipoproteinLDL)、VLDL以及乳糜微粒(Chlomicronemulsion,y,--CM)。高密度脂蛋白胆固醇(HighdensitylioroteincholesterolHDLC)是HDLpp,从细胞膜上摄取胆固醇后经卵憐脂胆固醇酷基转移酶催化而形成的内源性胆固醇酷,它可以将携带的胆固醇转移到LDL上,形成低密度脂蛋白胆固醇(Lowdensity-orotein-choleserolC。litLDL)人类医学研究已证实LDL所携带的胆固醇水平与pp,123][-心血管疾病的发生率存在密切的联系,HDLC含量升高会增加人类患冠状动脉故“”心脏病的危险性,可将其通俗地理解为坏胆固醇。本试验结果显示,高精一比日粮组的HDL-C和LDL-C含量与低精粗比日粮组相比粗,均有定程度的上升,表明日粮精料水平明显影响动物机体脂质代谢水平,精粗比例越高,脂质代124[]-谢越快。梁辛等研究结果表明,补词不同水平的精料对水牛血液中HDLC含<0.05)。,与3070组相比量有显著影响(P贾玉东研究发现日粮精粗比为:,55:45日粮组的HDL和LDL含量均显著上升(P<0.05),分别提髙了40.83%和一61.29%。从营养学角度来看胆固醇具有两面性,方面,胆固醇具有保持生物膜的完整性、维持骨豁的正常发育、促进脂类物质的消化和吸收等重要功能,是人一方面,体不可缺少的营养物质;另胆固醇摄入过多,容易引起相关的心血管疾病,如高血压、心肌梗塞、周边动脉阻塞性疾病等,因此含胆固醇较高的羊肉是大众所排斥的。如何平衡反合动物最佳生产性能和肉质中胆固醇的含量,仍然是动物营养学者需长期关注的焦点。VFA是反当动物的瘤胃微生物对碳水化合物发酵的终产物。瘤胃中VFA主要包括乙酸、丙酸、丁酸,它们在反当动物体内最基本的作用是提供能源。VFA的形成类型受众多因素的影响,其中瘤胃微生物区系的组成和数量、底物发酵类型。以及伺粮是最重要的三个因素高精料日粮中淀粉含量高,瘤胃淀粉分解菌占优39 西南大学硕士学位论文’,导致丙酸和乳酸大量产生日势,形成丙酸发酵;而高粗料粮使瘤胃纤维分解菌产生乙酸和甲院增多,形成乙酸发酵。近年来,国内外许多学者对反当动物瘤胃中VFA的组成进行了大量研究,从试验结果来看,大部分学者认为日粮精料水平_125127[]的变化对瘤胃VFA浓度有显著影响。目前,关于瘤胃VFA与血清VFA相127][关性的研究较少。贾玉东等研究发现,血清两酸浓度与瘤胃两酸浓度之间呈现极显著的负相关性(P<0.01),而血清乙酸、丁酸浓度与瘤胃乙酸、丁酸浓度的相215]mou[关性不显著(P>0.05)。Seyr等报道,瘤胃丁酸可抑制瘤胃上皮对丙酸的吸收利用,从而减少瘤胃内丙酸进入血液代谢的总量。从本试验结果来看,血清VFA浓度并未在精粗比为4:6时,即处理组的最高精料水平达到最大值,而是在3:7组出现最高浓度、,随后精料水平降低,使乙酸丙酸和丁酸均出现显著下降。从乙酸/丙酸的角度来看,随着日粮精粗比的降低,乙酸/丙酸比值明显增大,4:6组最低。张腾研究发现,精粗比6:4组奶山羊血楽中乙酸丙酸的比例显著低于一4:6组(_P<0。.05),这与本研究结果致对于本试验中血清VFA浓度随精粗比例的增加总体出现上升的现象一,还有待进步研究证实。本研究结果表明,调节日粮精粗比例能直接影响大足黑山羊肌肉中棕榈酸、油酸、花生酸、二十稀酸的含量,,并且SFA含量随日粮精料比例的升高而升高。说明髙精粗比日粮有利于肌肉中SFA含量的沉积结果还显示,当日粮精粗比达到2:8时,再降低精料比例山羊肉中SFA含量不会继续下降,反而会使含量稍有升高。4.5日粮精粗比对大足黑山羊肌肉脂肪沉积影响的分子证据7329.13,11[]--HFABP和FAS是近年来发现影响肌肉脂肪沉积的候选基因。HFABP基因广泛存在于各种组织中,尤其在脂肪代谢相对活跃的器官中表达较高,如心__肌、肝脏、骨豁肌以及乳腺。张涛认为,F必在肝脏及脂肪组织中均有较高8-9倍。因此水平的表达,并且在肝脏组织中的表达水平是脂肪组织中表达水平的,为了能更准确地从分子水平阐述日粮精粗比对大足黑山羊脂肪沉积的影响,本研究选择不同日粮饲喂的大足黑山羊肝脏组织作为研究材料,检测肝脏组织中H-FABP和FAS基因转录表达水平变化情况。134]一[运用PCR-RFLP方法-李武峰等,在牛HFABP基因内发现个多态位点,并且利用最小二乘法拟合线性模型对不同分子标记基因型效应值间肉品质大理石纹和嫩度性状差异显著性检验,结果发现,牛基因中的hh纯合基因型对135[牛肉嫩度有较大的影响1。文力正等研究发现,草原红牛肉质的剪切力在136[<]基因的三种基因型(AA、AB和BB型)间差异极显著(尸0.01)。李志才等研究也发现-,湘西黄牛HFAjBP基因的多态性与IMF含量和大理石花纹存在显著40 第4章讨论-的相关性。以上结果均说明///^4^?基因的表达能促进_?沉积,但目前尚没有对H-FABP基因如何具体调控IMF含量给出详细的解释。本试验结果表明,日粮一精料水平的下降导致肝脏组织中基因表达量降低,但当精料比例下降到定水平时一,尸基因的转录水平不再下降,该趋势与SFA的变化走向致。罗137][献梅等研究发现-E4BP基因在猪肌肉组织中的表,低营养水平日粮可以提高H】38达[]。朱晓岩等研究了高、中、低营养水平对利木赞/515PJ基因表达的影响,结果表明,日粮营养水平从高降到中时,FABP3表达量随即下降,但将曰粮营养水平继续降低至低水平时,反而会提髙基因的表达量,本试验结果中A3组基因表达一量稍低于A4组,与上述研究结果致。本试验研究结果还发现,基因在肝脏中的表达量也随日粮精粗比的下降而139一[]下降,但日粮精粗比达到定水平后,基因的表达水平不再下降。舒常平等研究表明,的mRNA表达丰度的提髙能促进鹅肝脏组中脂肪酸的沉积,本研一FAS基因。究结果与此致有研究还发现,碳水化合物调控表达的机制是用高碳水化合物饲喂的动物体内葡萄糖应答元件结合蛋白(GRBP)的含量较高,GRBP可以与基因中的胰岛素应答元件(IRE)结合诱导基因转录。Rea-利用ltimePCR方法检测大足黑山羊肝脏组织中脂肪沉积相关基因的转录表达水平一,结果显示,定范围内降低日粮精粗比会导致基因表达量的下降,说。明用低精粗比日粮饲喂的山羊,羊只肝脏中脂肪沉积较慢41 西南大学硕士学位论文42 第5章结论第5章结论由本试验可得出以下结论-5.1本实验条件下,日粮精粗比的增加可提高大足黑山羊的日增重、胴体重、屠宰率和眼肌面积,降低料重比,显著改善大足黑山羊的生产性能和屠宰性能。5.2随着日粮精料比的增加,羊肉中蛋白质和IMF含量增加,提高了肉质的嫩度和保水性:,降低了肉质的蒸煮损失、滴水损失和失水率;当日粮精粗比为37时,羊肉中17种氨基酸含量均最大,其中鲜味氨基酸含量达到差异显著水平。月旨肪酸方面,棕楣酸、花生酸、二十四院酸、油酸、亚麻酸和二十稀酸含量受日粮一精粗比的变化而出现不同程度地变化,定范围内SFA随着日粮精粗比的降低而下降,但当粗料占到总量的90%时,SFA含量出现略微升高,而UFA含量则下降,28说明用精粗比为:的日粮伺喂大足黑山羊,其肉产品中含有丰富的UFA。5.3不同精粗比日粮对大足黑山羊血液脂肪代谢具有重要影响。血液中TG、-L-血清中乙酸/丙酸比值TC、HDC、LDLC含量随日粮精料比例的升高而升高,而随精粗比的升高而下降;血清中VFA浓度随精粗比的增加呈现先升髙后下降的趋势,在3:7日粮组乙酸、丙酸和丁酸浓度均最大。5-.4肝脏组织中HFABP和基因转录表达水平随日粮精料比例的下降而下降,从mRNA表达层面证明了日粮精料水平的提髙可促进大足黑山羊的脂肪代谢,提高IMF的沉积。43 西南大学硕士学位论文44 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西南大学硕士学位论文-AnimalScience199337:10621070.,,48KnowltonKF,AllenM,EricksonPS.Lasalocidandarticlesizeofcomrainfordaircows[]pgyinearlylactation.1.Effectonperformance,serummetabolites,andnutritentdigestibility[J.]Journaar179457-lofDiScience996:5564.y,,()49王加启,冯仰廉.不同来源可发酵碳水化合物和可降解氮合成瘤胃微生物蛋白质效率的[]27-研究.9942:97104.[J]畜牧兽医学报,1,()[50JulM,ZeuthenP.ualitofimeatforfreshconsiimtionM//ProressinFoodand]Qypgp[]gNutritiionScence.Oxford:PeramonPress1981.g,51-宋杰.日粮不同能量水平对绵羊羊肉品质及不同组织中HFABP基因表达的影响D.硕[][]士学位论文业大学2010.保定:河北农.,52李冬光,夏先林,朱丽莉.不同营养水平对牛肉品质的影响J.黑龙江畜牧兽医,2011,[][]9557-59:.()53陈红跃.营养模式对肉牛生产性能的影响研究[D].硕士学位论文.北陪:西南农业大学,[]2005.54刘丽光宏.饲养水平、年龄及体重对牛产肉性能影响的研究J.黄牛杂志20013:,周,[][]()-1410.eriLRNAN-55朱琳娜、M?6甲基腺苷水平及脂肪沉积的影.Fro基因表达对猪脂肪细胞m[].博士学位论文20响研究[D].杭州:浙江大学14.,[56]LeveilleGA,RomsosDR,YehY,etal.Lipidbiosynthesisinthechick.AconsiderationofsiteofsnthesisinfluenceofdietandpossiblerelatormechanismsJ.JournalofPoultry,guy[]y-Science1975544:10751093.,,()57Ln-xiuCYGratALKimKHetal.PorcinesomatotroindecreasesacetlCoAcarbolase,,,[]pyyeneexpressioninporcineadiposetissue[J.DomesticAnimalEndocrinolo,1994,111:g]gy()25-1321.58SemenkovichCF.ReulationoffattacidsnthaseFASJ.ProressinLiidResearch1997,[]gyy()[]gp,36-1:4353.()59单体中汪以真刘建新等.不同日粮猪腹脂中脂肪酸合成酶ms)基因表达规律的研[],,,-究J.畜牧兽医学报2006377:662666.[],,()[60]ClarkeSD,ArmstrongMK,JumpDB,etal.NutritionalcontrolofratliverfattyacidsynthaseandRNAJJN2-224S14mabundance.ournalofutrition,1990,1202:18.[]()61MilderAM,ClarkeSD.Porcinefattacidsnthase:CloninofacomlementarDMAtissue[]yygpy,distributdiiiiionofitsmRNAansuppressonofexpressonbysomatotronanddetarroteinJ.pyp[]Journa-lofNutrition19911216:900907,,().62GirardJ,PerdereauD,FoufelleFetal.Reulationoflioenicenzeneexressionb[],gpgymegpy48 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西南大学硕士学位论文79李泽.[.AMPK活性对宰后羊肉能量代谢和肉质的影响极其机理研究P].博士学位论文呼]业大学2010.和浩特:内蒙古农,80李梦云.猪PRKAG3基因表达规律及其与肉质关系的研究D士学位论文.博.雅安:四[][]川农业大学2006.,81罗朋M].孙玉民.畜禽肉品学济南:山东科学技术出版社.1993.,[][82梁大勇.日粮精粗比对荷斯坦青年公牛生长和肉质的影响[D].硕士学位论文.陕西:西[]2009北农林科技大学.,83贾益群叶福媛王双等.生物样品中短链脂肪酸的快速提取与分析方法J.[],,,[]实验室研20123172-究与探索:62264.,,()[84]HuangZG,XiongL,LiuZS,etal.ThedevelopmentalchangesandefectonIMFcontentofH-FABPndPARexnheeluicnomaPymRNAressionismusceJ.JornalofGenetsandGeics,pp[]2006336-:507513.,()[85]QiaoY,HuangZG,LiQF,etal.DevelopmentalchangesoftheFASandHSLmRNAexressionandtheirefectsonthecontentofintramuscularfatinKazakandXininsheeJ.pjgp[]-Journa.lofGeneticsandGenomics20073410;909917,,()[86]杨强,张石藤,贺喜,等.低蛋白质日粮不同能量水平对育肥猪生长性能和胴体性状的影响J-6.动物营2008204:37137.]养学报,,()[87NahashonSNAdefoeNAmenenuAetal.Efectsofdietarmetabolrandishableen[],p,y,yegycrudeproteinconcentrationsongrowthperformanceandcarcasscharacteristicsofFrenchrsJP-uiceineabroile.oultSienc200584:337344.g,,[]y[88]韩兴泰,陈杰,韩正康.饲喂不同蛋白水平日粮的牦牛瘤胃氮代谢与十二指肠各氮组分流-量J.动物营养学报81143,1990:34.[],()--TmE-n89PaiNehraniAanlouHetaernMostafal.ffectsofditaforaetoconcetrateratioso,,[]p,ygist-erformanceandcarcasscharactericsofroinfattailedlambsJAnimlFpgwg.aeed[]encenoo-SciandTechl2011163:9398.gy,()90代江生刘国庆张云峰等.不同精粗料比饲料饲喂黑羊育肥试验J.[],,,[]黑龙江畜牧兽医,200641-42.,3:91彭玉麟,贾志海,卢德動,等.不同蛋白质水平的日粮对内蒙古白线山羊消化代谢的影响[]J2002334-:21.畜牧兽医学报3326.,,[]()92LuinbuhlJM,PooreMHConradAP,Effectoflevelofwholecottonseedonintake[]g,,-madiestibilitanderformanceofroinoatsfedhaybaseddietsJnlgwmale.JournalofAiy,pggg[]Sce-6ienc2000786;1677183.,,()93PrietoIGoetschALBanskalievaVetal.Efectsofdietarroteinconcentrationon[],,’yppostweaninggrowthofBoercrossbredandSpanishoatwethersJ.JournalofAnimalg[]50 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参考文献bu-trateintherumenoflactatingdaircowsivennormalandlowrouhaedietsJ,Daiiyyggg[]y-Science200386:36203633.,,[127]贾玉东,王振勇,柴同杰,等.日粮粗精比对奶牛瘤胃液和血清乙酸、两酸、丁酸的影响J-.西北农林科技大学学报2008367:2732.,,[]()PDVD128张腾.不同精粗比对奶山羊瘤胃、组织和肝脏脂肪酸代谢的影响.硕士学位论文,[[]]南京:南京农业大学,2012.129TsuoshiA,JunichS’HiroyukiH,etal.NovelmutationsoftheFASNeneandtheireffect[]ygonfacomJBochemn200947-ttyaidcositioninJaaneseblackbeef,iicalGeetics56;pp[],,()-411397.Fa130ChrisAMNeilGC,BelindaCGetal.ttcidsnthaseeffectsonbovineadiosefatand,,ya[]ypmkM-fli116ilatJ.ammaanGenome20078:474.[],,()131庞卫军,杨公社.8个猪种和野猪尸基因分子标记与IMF含量的关系[J.农业生物[]]2005-技术学报,136:733738.,()132郝称莉李齐发乔永等.湖羊肌肉组织和基因表达水平与肌内脂肪含[],,,20084-量的相关研究[J].中国农业科学111;37763783.,,()133.D张涛不同能量水平日粮对绵羊脂肪酸合成酶基因和肥胖基因表达的影响.[[硕士学]]位论文.保定:河北农业大学2007.,134李武峰,许尚忠,曹红鹤,等.3个杂交牛种基因第二内含子的遗传变异鱼肉品[]质性状的相关分析J医学报200452-.畜牧兽353;2255.[,,]()135文力正.草原红牛基因单核苷酸多态性,赵玉民,张国梁,等及其对肉质的影响[]J20081-.中国农业通报245:721.,,[]()136李志才,易康乐.湘西黄牛的基因对大理石花纹和肌内脂肪含量相关性分析J].[][中国牛业科学20-10361:14.,,()137罗献梅余冰陈代文.能量水平和能量来源对猪脂肪代谢、基因表达和肉质的[],,影响[C.2008.]中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集,138朱晓岩,史晓霞,张良等.营养水平对杂交肉牛基因表达及IMF的影响[C].中[],国畜牧兽医学会-第三届中国兽医临床大会论文集2012.,[139]舒常平,王宝维,李侦,等.填词鹅肝脏组织中脂肪酸沉积于FAS基因mRNA的表达丰J-度.20124510:20022011.[中国农业科学,,]()53 西南大学硕士学位论文54 致谢ii论文是在导师宋代军副教授精心指导和严格要求下完成的,从试验选题、设计、。实施到论文撰写的整个过程,宋老师倾注了很多的心血宋老师严谨的治学态度,忘我的工作精神、高尚的生活情操以及谦虚豁达的人品永远是我学习的措模,令我终生受益。宋老师不仅授我以文,而且教我做人,虽历时三载,却给以终生受益无穷之道!,在此毕业之际,特向恩师表示崇高敬意和衷心的感谢感谢杨游老师和李先碧老师在试验过程中对我的热心指导和帮助,老师们精益求精的工作作风对我影响深远。感谢西南大学动物科技学院的各位老师的悉心指导,他们博大学术思想,严谨的科研态度,精彩的语言和丰富的学识对我知识让我受用一,谨向老师们致以崇高层面的升华的有着十分重要的影响,生。在此的敬意!、在本次试验中,还得到羊场场主和评审组老师的大力支持指导以及部分同一学的工作配合。起走过的研究生岁月是我人生中最难忘的时期,衷心感谢西南大学动物科技学院研究生12级同学在三年来对我的友好帮助和支持。衷心感谢父母以及亲戚们多年来对我的学业和生活给予的巨大支持、鼓励和默默付出。最后!,感谢所有关心我的人们,祝你们身体健康、工作顺利、万事如意王子苑2015年5月55 西南大学硕士学位论文56 攻读学位期间发表的论文情况攻读学位期间发表的论文情况1宋代军.J.西,王子苑,杨游,等影响畜禽肉质的主要因素及其作用机制[南大学学报,[]]-20141112633.,():57

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