《翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发酵活性物质含量的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
分类号S816.7学校代码10129U0C579.8学号2012216032硕±学位论文、....翻料工芝及不同菌种纪合对复合菌固态发酵活性物质含呈的影响Effectofturnedmaterialrocessanddifferentstrainsofp*.combinationonmitricin的coiUentofcomoundbaderiasolidp.一..-''statefermentation\申请人:张锦玲'学科口类■:农学学科专业:预防兽医学_硏究方向:兽医微生物与免疫学vS指导教师';刘大程教授-?—,.'■.'--、.V'?;.■知'—论文提交曰期;:二〇五年六月b:■’;!^巧,.'‘ArV-片兴:,’,1..I..';;'‘^-LV:1■\V,--'■?—J *.??.内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明^本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加W标注^日致谢的地方外,论文中不包括其他人己经发表或撰写过的研究成果,也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。一申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担切相关责任。论文作者签名:燕含奉疼日期:如1C谷.3内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定,目P;研巧生在攻读学位期间论义工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅。学校可W公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外),采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名;架續徐指导教师签名:曰期:>作1 摘要本论文研巧翻料和不翻料两种不同发薛工艺对复合茜培养物营养活性物质含量的影响,同时研究不同菌种组合对发酵产物中的营养活性物质含量及体外消化率的影响;并采用体外批次培养的方法研究不同日粮精粗比与复合茜培养物添加量之间的关联性一,进步明确复合菌培养物在日粮中的适宜添加量,;通过在绵羊日粮中添加复合菌培养物考察复合菌培养物对绵羊生产性能的影响,为复合菌培养物的合理利用提供理论依据。试验结果表明:1,.、固态发醇稱经过翻料处理后可显著提高饲料中的营养活性物质与-、、不翻料沮相比,酵母活菌数P葡聚糖含量、甘露聚糖含量、多肤含量总氨基酸當量和总有机酸含量分别提髙了63.、、、.64%、846%1.48%2.3%〇0.46%和3.72/〇。2、W酿酒酵母菌BC、XR4和枯草芽抱杆菌AK进行3菌株固态发酵,-发酵产物中多肤、总有机酸、P葡聚糖、甘露聚糖4种营养活性物质含量分别比2株酵母菌(BC、XR4)发酵提高了2.29%、12.14%、9.46%和20.11%;并且将枯草芽抱杆菌和酵母菌进行协同发酵,可显著提高饲料营养物质的体外消化率。3、在日粮中添加复合菌培养物可W显著提髙瘤胃TVFA浓度(PC0.05),增加其BCP浓度,显著降低乙酸/丙酸比值(戶<0.05),对H。:5p值无显著性影响在日粮精粗比为5条件下,复合茜培养物添加量W30%最:4。佳,其添加量W25%最佳;在6条件下4、在动物实验中用复合茜培养物等量代替全混合日粮,肉羊平均日增重较对照组提高了9.96%,料重比比对照组降低了5.12%;试验结束时试验组比对照组每只羊可增加收益8.16元,具有较大的推广价值。关键词;;生:复合菌;营养活性物质瘤胃发酵产性能 Effectofturnedmaterialrocessanddifferents化ainsofpcombinatio打onnutricinescontentofcompoundbacteriasolidstatefermentationAbstractTheexerime打twasconductedtostudyo打theeffectoftwodifferentpferine打tationprocesses,whetherturnedmaterialover,o打thecont:e:ntof打utricinesofcompoundbacteriaculturea打dstudyo打theeffectofdifferentstrai打combinationso打thecontentof打utrici打esoffermentationproductsandvielaiifinitrodigest化ility*Atthesametmethecorrto打betweenthedferent,forageratioandtheaddingamountofcompoundbacteriaculturewasconductedinvitrotoclarifytheoptimumaddingamountofcompoundbacteriaculturei打tothediet.Throughaddi打gmicrobialfeedintosheepdietstodiscusstheeffectofmicrobialfeedo打sheepproductio打erforma打ceandpeconomicefficie打cytopovidea化eoreticalbasisforthereasonableuseofbioloiclfe.gaedThexerimentresu:epltsshowedthat1TheCO打tentof打utrici打esimrovedsi打ifica打tlafterturi打overthe()pgygsolidstatefermentationfeed.Comparedwithnotturnmaterialgroup,theconte打tsofviablecoimt,betagluca打,manna打,polypeptide,totalaminoacid〇%andtotalora打icacidwereincreasedb63.64/i8.46%1.482.3%andgy,,,0.46%and3.72%resectively.p2SaccharomycescerevisiaeBCX民4a打dBacillussubtiUsA15were(),,usedtoCO打ductsolidstate托rme打tation.TheCO打te打tsofpolypeptide,totalorga打icacidbetaluca打a打dmanna打werehihertha打2east艮G;XI14,ggy(,)〇fermentatio打andincreasedby2.29%12.14/〇9.46%and20.11%resectively.,,pI打additionusinbacillussubtilisandeasttoconductsneristic,gyygfermentationcouldsig打ifica打tlyimprovethefeednutrie打tdigestibilityinvitro.3Addi打thecomoundbacteriaculturei打tothediet打otonlcould()gpysig打i打cantlyincrea化化econcentratio打ofTVFAandBCP戶<0.05),butalso(siiflca打tlreducedtheratioofaceticacidtoroio打icacid戶<0.05.Whilegnypp(),therewasnosigni巧canteffecto打thepHvalue.Whenthedietaryconcentratetoforageratiowas5:5化ebestaddinamoimtofcompoundbacteriaculture,g〇was30/iwhileu打dertheCO打ditio打of6:4thebestaddi打amountwas25%.,,g (4Experimen化1roupwasfeddietsreplaced4kgthebasaldietwith)gequalualityofmicrobiolofermentedfeedtheaveraedailweihtainqgy,gygg〇intheexperimen化1groupincreasedby9.96/〇thanthatintheCO打trolgroupandthematerialweightthanthatin化econtrolroudecreased5.12%.Atthegpendoftheexperiment,eachsheepoftheexperimentalgroupcouldincreasedrevenue8.16uanwhichhadreatromotionvalue.y,gpKe乂Words:CompoundbacteWa;Nutricines:民umenfermentation;ProductionerormancepfDirectedby:Prof.LIUDachengApplicant干orMasterdegree:ZhangJinIing(ClinicalVeterinaryMedicine)ColleeofVe化nnarMedicine,InnerMonoliaAnculturalUniversit,Hohhot010018,China(gyggy) 目录1引B11.1酵母培养物及相关酵母产品的介绍141.2酵母培养物的作用机理及应用14.2.1酵母培养物的作用机理15.2.2酵母培养物的应用效果1.3YC对瘤胃发酵功能的影睛616.3.1YC对瘤胃发酵产气量的影响17.3.2YC对瘤胃pH的影响1VFA7.3.3YC对瘤胃的影响-18.3.4YC对瘤胃NHN浓度和BCP含量的影响s18.4酵母培养物对反当动物营养物质消化率的影响1.5复合益生菌制剂概巧919.5.1复合益生茵的作用机理1.510.2复合益生菌发酵作用效果‘11.5.3用现状1复合茜制剂的应112.6酵母培养物与日粮结构对瘤胃发酵效果的影响21.6.1日粮类型对酵母培养物应用效果的影响11.6.2日粮粗精比对瘤胃微生物菌群的影响131.7本课题研究的目的与意义142试验研巧162.1复合培养物不同发酵工艺的比较研究162.1.1材料与方法162.119.2结果2.1.3讨论312.131.4小结2.2不同茜种组合对固态发酵料中营养活性物质含量及体外消化率的影响322.232.1材料与方法2.2.2结果352.2.3讨论432.2.4结论452.3复合菌培养物作用效果与日粮结构间的关联性452.3.1材料与方法45 2.3.2结果53.23.3讨论632.3.4小结652.4复合菌培养物对小尾寒羊育肥性能的影响652.4.1材料与方法652.4.2结果662.4.3讨论682.4.4小结683结论69致谢70参考文献71作者简介83 插图与附表清单13.图1酵母细胞壁组成2.图2翻料工艺对固态发酵料温度的影响203.图3翻料工艺对固态发酵料中活菌数的影响214-.图4翻斜工艺对固态发酵料中P葡聚糖含量的影响225.图5翻料工艺对固态发酵料中甘露聚糖含量的影响23625.图6翻料工艺对固态发酵料中酒石酸含量的影响726.图7翻料工艺对固态发酵料中巧樣酸含量的影响826.图8翻料工艺对固态发酵料中苹果酸含量的影响9.图9翻料工艺对固态发酵料中班巧酸含量的影响262710.图10翻料工艺对固态发酵料中总有机酸含量的影响11.图11翻料工艺对固态发酵料中蛋氨酸含量的影响2912.图12翻料工艺对固态发酵料中赖氨酸含量的影响2913.图13翻料工艺对固态发酵料中精氨酸含量的影响2914.图14翻料工艺对固态发酵斜中总氨基酸含量的影响30'15.图15翻料工艺对固态发酵料中多肤含量的影响3116.图16不同菌种组合对多狀含量的影响3517.图17不同茜种組合对精氨酸含量的影响3718.图18不同菌种组合对蛋氨酸含量的影响3719.图19不同菌种姐合对赖氨酸含量的影响3720.图20不同菌种組合对总氨基酸含量的影响3821.围21不同菌种组合对酒石酸含量的影响3922.图22不同菌种组合对巧樣酸含量的影响4023.图23不同菌种组合对苹果酸含量的影响4024.图24不同菌种组合对號巧酸含量的影响4025.图25不同菌种组合对息有机酸含量的影响4126-.图26不同茵种狙合对0葡聚糖含量的影响4227.图27不同菌种姐合对甘露聚糖含量的影响422843.图28不同菌种组合对固态发酵料体外消化率的影响29.图29样品预处理4830.图30己酸惊准曲线4931.图31丙酸标准曲线4932.图32T酸标准曲线已0 33.图33氨态氮标准曲线5134.图34菌体蛋白标准曲线5235.图35复合菌培养物对绵羊体重的影响6736.图36复合菌培养物对经济效益的影响6837.表1标准曲线的制备2038.表2翻料工艺对固态发酵斜中活菌数的影响2039.表3翻料工艺对固态发酵料中多糖含量的影响2240.表4翻料工艺对固态发酵料中酒石酸和巧樣酸含量的影响2441.表5觀料工艺对固态发酵料中苹果酸和規巧酸含量的影响2442.表6翻料工艺对固态发酵料中总有机酸含量的影响25743.表翻料工艺知固态发酵料中3种限制性氨基酸含量的影响2744.表8翻料工艺对固态发酵料中总氨基酸含量的影响2845.表9翻料工艺对固态发酵料中多肋含量的影响3046.表10不同菌种组合对多化含量的影响3547.表11不同菌种沮合对3种限制性氨基酸及总気基酸含量的影响3648.表12不同菌种姐合对有机酸含量的影响38-49.表13不同菌种组合对B葡聚糖、甘露聚糖含量的影响4150.表14固态发酵料体外消化率测定结果4251.表15试驗日粮组成及营养水平46-52.表16NHN标准液的a配制5153.表17BCP标准液的配制己254.表18日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对产气量的影响5455.表19日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对pH值的影响55表20日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对TVFA浓度的影响5657.表21日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对乙酸浓度的影响已758.表22日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对丙酸浓度的影响5859.表23日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对T酸浓度的影响5960.表24日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对立酸/两酸的影响606NH-N1.表25日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对a浓度的影响6162.表26日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对BCP浓度的影响6263.表275:5日粮条件下体外发酵各指标Topsis综合分析结果6264.表286:4日粮条件下体外发酵各指标Topsis综合分析结果63652966.表各姐饲粮组成及营养水平 6766.表30试始羊采食量和增重情况6867.表31试驗羊经济效益 缩略语表YC酵母培养物VFA挥发脂肪酸TVFA总挥发脂肪酸BCP菌体蛋白NH-3N氯态氮ARG精氨酸LW赖氨酸MET蛋氨酸州4甲病NSC非结构性碳水化合物SC结构性碳水化合物IVDMD干物质体外消化率IVCPD粗蛋白质体外消化率IVND阳中性洗练纤维体外消化率IVADFD酸性洗絡纤维体外消化率 内蒙古农业大学硕±学位论文_11引言反当动物的瘤胃经过长期的进化,其庞大的微生物体系可!^利用日粮中的各种营养成分,,尤其是纤维物质并将发酵过程中分解和转化的小分W子发酵产物供给动物机体作为必需的代谢能量和营养物质被吸收利用。因此,如何调控瘤胃这个复杂的发酵体系来增强反当动物利用粗饲料的能一直成为营养学家们研巧的热点力。目前,用来调控瘤胃微生物体系的方法己有很多,例如应用抗生素和离子载体等。但抗生素应用在饲料工业中带来了诸多问题,如导致动物免W""疫为低下及食品安全等问题,因此寻找新型的天然非抗生素饲料添一的方向加剂成为研巧者们致努力追求。微生物饲料添加剂包括真菌(如酵母)、细菌等,大量研巧表明它们均具有良好的作用效果,其中[U酵母口]培养物(Yeastculture,YC)尤为显著。YC是经干燥的产品,既保存酵母本身的活性,又含有代谢过程中所产生的营养活性物质目前,国内外用制备YC的常用菌种有酿酒酵母菌、乳酸杆菌,并伴有添加米曲霉或其提取物。关于YC对反当动物生产性能的影响虽然报道不一,但大多数研巧表明,YC能够刺激瘤胃微生tW物活性,促进其增殖,提离生产性能和产奶量并对改善反当动物瘤胃微" ̄"生态起到关键性的作用。1.1薛母培养物及相关醇母产品的介绍(1)酵母培养物酵母菌是单细胞真核微生物,在生长繁殖过程中自身菌体体积和数量不断増加,且在发酵底物中还可W代谢产生大量发酵产物,酵母菌在不同、培养条件下会代谢产生不同的发酵产物,除包括我们所熟悉的矿物质氨基酸"、B族维生素、香味物质和之外,还包含人们所不熟悉的许多未知"I"生长因子。YC是一种较复杂的产品,它除含有酵母本身的营养物质外,还含有发酵后所形成的酵母代谢产物,此种代谢产物可为胃肠道微生物茜群提供丰富的营养,促进动物机体的健康生长,起到提高家畜饲料利用率及改善动物生产水平的作用。YC早在20世纪20年代,就被用作反当动物的蛋白质补充饲料应用到生产中。到50证实了在动物的日粮中添加少量年代,的YC可W提高巧牛的増重和奶牛的产奶量。此后国内外大量的研究表明YC添加到动物饲粮中可W刺激有益菌生长,改善反当动物瘤胃内环境一,促进动物生长及提高生产性能等作用。故YC作为种生物活性饲料 2翻斜工2及不同菌种组合对复合菌固态发巧活性物质含量的影响添加剂对动物健康和生产具有明湿的改善作用。(2)活性干醇母(ADY)ADY是利用先进的设备及生物技术将酵母细胞规模化的干燥成含水分5%W下的产品,可作为化质的氨基酸和蛋白质的来源。ADY并不是完。全失去活性的酵母细胞产品,而是W固态形式存在活性干酵母主要由W一下几个基本特征:首先,将ADY在定条件下复水活化后,即恢复成具有正常生理功能的酵母细胞;其次,在常温条件下可W长期贬存而不会失""去活性最后是活性干酵母性能稳定适于运输,活性干酵母的营养价值!很早就被人们认识并在饲料、食品、医药等行业中得到了广泛运用。许多报道表明活性干酵母具有调控瘤胃内环境、缓解瘤胃酸中毒、辆激、纤维分解茜生长活性的能力,同时对瘤胃甲烧的产生及氮氨代谢都具有重要作用。(3)薛母提取物、通常氨基酸、抗生素酶制剂等添加剂都含有某种特定的有效成分,、但酵母培养物中营养成分复杂繁多,主要成分有氨基酸、B族维生素多一一肤。因此单种代谢产物不够被认为是特定的、微量元素及呈味核巧酸或主要的作用成分。这些代谢产物都是酵母茜在特定发酵工艺条件下按照自身的代谢规律和特征产生的。它们共同体现出的相互协同效应才是酵母一的作用特征培养物唯,正是由于这种协调作用才体现了酵母培养物作用的特殊性。具有向胃肠道内的微生物提供额外的营养底物来维护内生态环11"境的相对稳定及刺激它们代谢活性的功能。由于酵母抽提物营养丰富且,加工性能良好,具有増强食品的醇厚感和鲜美味的作用被广泛的应用于食品行业中。(4)酵母细胞壁酵母细胞壁约占整个细胞干重的30%左右其产品为粉末状,微黄色,,。,具有较好的耐酸性,能完好的进入胃肠道酵母细胞壁结构类似H明治一50%般由H层姐成:内外两层分别为葡聚糖层(约)和甘露聚糖层(约W40%),中间为少量的糖蛋白和几T质(约2%)。酵母细胞壁组成和结构见图1。 内蒙古农业大学硕±学位论文^4-0-M%remnanl ̄/'Jy…覇'\^-^uS5t?ryxJi_乂J'酸泡向诚flwi^心I。.>一;图1酵母细贿壁组成Fig.1Thecompositionofyeastcellwall其中葡聚糖为酵母细胞壁的主要成分,位于细胞壁的内层,具有维持一-—-细胞壁结构及保持细胞正常生理功能作用般由l6葡聚糖和。P()""----—-->3葡聚糖组成,大部分由D葡聚糖分子3Dl3键的方式相P〇)(()-D-—结合形成的聚合物,也有小部分高度分支的P(16)键结合所形成的聚糖(约6%)、碱性葡聚糖(约20%)和中性葡聚糖(约,分为酸性葡聚糖W34%)三种类型。葡聚糖在消化道中具有不可溶、不吸收、不黏连的特性-,有研巧表明,P葡聚糖为免疫反应的基质,网状内皮系统在其作用下""、能够产生大量的巨噓细胞,可W通过吞嗦作用吸收破坏及清除体内损-葡伤、衰老和死亡的病原微生物等,从而提高动物机体的免疫功能,故P一聚糖又被称为免疫多糖-。此外,将定量的P葡聚糖添加到动物日粮中可II"W降低应激性及动物机体外周淋己细施的转化率。具有保持消化道微生态的稳定和提高饲料报酬的功能。甘露聚糖位于酵母细胞壁外层,赋予其""细胞生物学活性和免疫特性,其主链长度约为50个甘露糖基,与蛋白质一^?W共价键的形式连在起,其对分子质量为20000200000。在其主链----2上连结由3个左右甘露糖Wa(l3)和a(l)键相连构成的支链。这些支链上可W结合不同构型的基团,是抗原的决定部位,能促使动物机体产生特。异性抗体因其具有与病原菌受体相似的结构,因此具有很强的结合凝集素的能力可W干扰肠道病原体在肠道的定植及清除胃肠道基质,对保持肠道微生态平衡有着很重要的作用。甘露聚糖不仅可吸附外源性毒素。和病原菌,还可W通过激活机体细胞和体液免疫来提商自身的免疫力 4翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发酵活性物质含量的影响1.2薛母培养物的作用机理及应用1.2.1轉母培养物的作用机理YC中含有各种营养成分和某些重要的协同因子,综合国内外研巧结" ̄1"果,YC通过向动物体内的微生物菌群提供营养底物来调控瘤胃发酵和改善菌群结构,对动物生产起着重要的作用:可■提高动物对粗蛋白、粗矿物质、纤维、维生素等各种营养成分及能量的消化、吸收和利用;提高饲料的适口性、可促进消化道有益菌群的繁殖、抑制有害菌的增殖,对此外"",YC中还含有未知生长因子动物体内微生态平衡起到调节作用;,""具有促进动物生长、増强其免疫力等作用。但YC的其体作用机理尚不完全清楚,依据大量试验研究结果可W假设性的概括为W下H种:控氧理论、营养理论和小狀营养代谢扳机理论。(1)控氧理论控氧理论认为瘤胃并不是100%的厌氧环境,〇2占瘤胃总气体量的0.5%左右。化的存在对厌氧菌生长不利,它能抑制纤维分解菌对纤维的附着及瘤胃细菌的生长。酵母菌为耗氧菌,在瘤胃中可消耗〇2,造成瘤胃的厌氧环境,有利于瘤胃的发酵。Newbold等(1996)研究发现,具有摄氧功能的两种菌株的酵母及商品制剂在瘤胃液中能刺激纤维分解菌和总厌氧茜数的增加,〇在瘤胃液中的,且当酵母干物质含量増加为原来的2倍时2消失速度可提高50%左右,且对瘤胃中的细菌没有影响;而不具有摄氧功能的菌株则没有此功能。研究还发现将具有摄氧功能的菌株经过漠化石锭诱变后,,将不能再刺激瘤胃中纤维分解菌和厌氧菌的生长其摄氧功能丧21"失。乔国华等(2005)研究发现,YC具有刺激瘤胃微生物生长繁殖的。作用,从而有利于瘤胃发酵研巧还发现,瘤胃厌氧真菌经活酵母刺激,tw-纤维素饲草的能力后,増强了其在瘤胃内降解富含木质素。(2)营养理论营养理论认为YC中含有巧、磯,为、氨基酸等营养成分瘤胃中的現酸利用菌提供了充足的营养,加大了瘤胃的发醇强度。Callaway等(1997)报道,将1%、5%酿酒酵母菌滤液分别加入到含0心乳酸(5g/L)的培养基中,可W刺激反自兽月形单细胞菌H18、HD4和T81及埃氏巨球形菌的生长,YC滤液增加了挥发性脂肪酸(VFA)及反与兽月形单细胞菌HD4的乙酸Awi1t含量,増加了总VF产量及反当兽月形单细胞菌H8的丙酸含量?Nisbe等(1991)发现,反当兽月形单细胞菌HD4经不同水平的^苹果酸刺激后均能提高对乳酸的利用,其中lOmmol作用效果最好,而YC滤液中的レ苹果酸含量可达4.9mmol,因此被认为YC中的^苹果酸在刺激反自兽 内蒙古农业大学硕±学位论文^W4对乳。月形单细胞菌HD酸的利用过程中起重要作用大量研巧发现,WPL151/1在含葡萄糖的H2环境中生长时,培养基中的親巧酸产量显著增加,这说明WPL151/1中含有延胡索酸还原酶,因为这种细菌经随意途径" ̄fw合成號巧酸的前体物为苹果酸和延胡索酸。(3)小化营养代谢扳机理论小肤营养代谢扳机理论认为YC中可能含有一种与小肤结构类似的物ewbo质起到刺激瘤胃内微生物的作用。Nld等(1998)研究发现,经福射灭活的酵母在瘤胃中仍保持刺激活性,而酵母经高温高压灭活后此活性则丧失一,因此可W推测,酿酒醇母可能依赖于种未知的热不稳定因子来刺U"激细菌的生长。有研巧表明,YC刺激热不稳定因子和R.a比US的耐热因""子的分子量均低于WkD。人工合成的含有氨基酸的小狀也具有刺激瘤胃纤维分解茜等茜种生长的作用。当小肤的质量浓度较低时,它的刺激活性也相应较低,这表明,这些物质具有刺激瘤胃益生菌生长的代谢扳机功能。1.22.薛母培养物的应用效果1.2.2.1薛母培养物巧单胃动物中的应用效果YC含有丰富的营养物质与未知生长因子,在猪和禽类的日粮中添加YC,不仅能竞争性排斥胃肠道病原茜,促进肠道吸收,还能提高粗纤维表。观消化率和日増重及减少动物应激,W保证动物正常的生产水平Korn巧ay(1995)研巧发现,将8%的豆壳或花生壳添加在生产猪的日粮中提离了""其日増重。张瑞文等(2002)将0.25%的YC添加在斤猪饲粮中也取得""一了相似的效果。彭凡等(2008)研巧结果表明,将YC添加到断奶仔猪日粮中,积极的改善了仔猪所产生的断奶应激反应补饲YC也可提(2004)0.3%的YC添加高家禽的生产性能,周淑芹将到肉仔鸡日粮中,一定的促生长趋势使肉斤鸡在生长前期表现出,提高了肉仔鸡对营养物质W的利用率及体液免疫机能。金植(2003)将活性酵母饲料等量替换鸡饲粮中的部分鱼紛时,显著提高其增重效果,若全部替換,则影响鸡的正常生长发育,说明酵母培养物氨基酸种类齐全且蛋白含量高,易于机体消化U"吸收。大量研究表明在鱼卧等水产动物上补饲酵母培养物可W增强机体的抗病能为和免疫力;使增重加快;提高其对营养物质的消化吸收。能力,増加水产养殖的经济效益1.2.2.2酵母培养物在反自动物中的应用效果自YC作为蛋白质补充料饲喂给奶牛起,YC就被广泛的应用到反当动 翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发酵活性物质含量的影响物生产领域中。许多研巧结果表明,YC能够提高瘤胃内VFA浓度,改善瘤胃pH值,防止瘤胃酸中毒;增加瘤胃纤维消化菌数量和瘤胃微生物总""。数量,从而提高反当动物的生产性能在肉牛日粮;提高其抗应激能力中添加YC可W显著提高肉牛的采食量。国外研究人员综合多个研巧结果发现,在肉牛饲粮中添加YC可使增重速度提高7.5%。国内也有类似研究?表明,3%8%,在肉牛肥育期补饲活性酵母益生素可使其生长速度提高,w禍体净肉率增加3.35%。但也有研究者认为动物机体采食量不受YC的影响而Mohamed等(2009)研巧表明,虽然添加YC组的采食量并无变化,却显著提高了其体增重;关于YC对肉品质影响的研究也有报道W1。研巧认为,YC对肉牛的质量级无影响,却影响其数量级;在鹿的饲粮中添加YC,结果表明,其试验组背最长肌面积显著优于对照组,鹿的4"禍体品质得到明显改善1而也有实验表明YC对脂肪等级和屠宰率影响;"11。并不显著,而对順体品质有很好的作用效果1.3YC对瘤胃发醉功能的影响一-瘤胃反当动物拥有个密闭且复杂的天然发酵系统,它在反当动物整个消化过程中有着非常重要的作用。其内部微生物种类繁多且庞大,它们之间相互依存、相互作用,分解为肤类、。饲料在瘤胃中经微生物发酵氨及挥发性脂肪酸等成分,并由微生物利用这些发酵产物合成菌体蛋白(BCP)、B族维生素及各种必需氨基酸等。反当动物发酵的终产物,如BCP和VFA等都是可被自身利用的营养物质。这也强调了调控瘤胃发酵使之达到最佳水平的重要性一。般反映瘤胃发酵状况的几个方面包括产气量、""-¥H值、NH3N、VFA等巧表明(1,:可八通过刺激瘤胃微生物p,许多研活性、促进微生物菌群生长及増强纤维素酶活性等来调控瘤胃内环境稳定,从而提高饲料利用率和自身的生产性能。因此YC具有重要的调控瘤胃平"I"。衡稳定的作用,也使之成为当前的研巧热点1.3.1YC对瘤胃发轉产气量的影响一产气量是反自动物瘤胃发酵的个重要指标,它与饲料底物的发酵强H度呈正相关关系。研究表明,YC具有减少胃肠道甲烧(C4)产生量的作用,虽然YC的添加只能引起CH4产量发生微小的变化,却对于瘤胃发酵类型的评定具有重要的意义Doreau等(1998)研究表明,添加YC可^^增W加饲喂前CH4的浓度,降低C化的浓度,却对混合样不产生影响。而也""有研究认为,添加YC对饲喂前后气体产生量均无影响,研究发现,当 内蒙古农业大学硕±学位论文1_W淀粉为底物添加YC进行发酵时,对CH4的产生量不产生影响;而不添"51加任何底物时,提高了CH4的产量。还有研巧发现,青贬饲料体外发酵的总产气量和CH4的产量96%变异是由于体外中性洗涂纤维、粗灰分^心及有机物质消化率而引起的。1.3.2YC对瘤胃pH的影响瘤胃一pH值作为个评定瘤胃内环境是否稳定的重要指标,对瘤胃生理功能、瘤胃发酵产物及瘤胃微生物区系等方面具有重要的作用。pH值受底物营养姐成及微生物代谢产物等多种因素的影响,健康瘤胃的pH值变?55.5化范围通常是在.7之间处于6.0状态下最为理想,因为此时微生物,生长繁殖速度达到最大值,更加有利于瘤胃发酵关于添加YC对瘤一,Williams等(1991)研究指出胃pH值的影响报道不,将YC添加到奶<r牛的日粮中,在采食后4h发现瘤胃pH值显著提高(戶0.05)Kuma1>/等997报道,,YC^^l5d/头的添加量补饲在梗牛日粮中经4周的饲喂()g时间后,,试验组瘤胃液pH值思著高于对照组,而YC停止添加2周后对"81Ena化eYC的照组和试验姐之间无显著差异。jrt1999研究报道,添加试()验组pH值相比对照组妾化不大,但可W稳定瘤胃pH,维持瘤胃内环境平""衡。也有研巧者报道了不同的结果,Erasmus等研巧指出,YC对pH没有显著影响,但可W降低瘤胃中乳酸浓度Doreau等(1998)在泌乳早W期的奶牛日粮中补饲YC,瘤胃pH并未受其影响。1..33YC对瘤胃VFA的影响大量试验结果表明,YC可调控瘤胃发酵方式,影响乙酸丙酸比及总VFA的浓度等,。Martin等研究发现在奶牛的日粮中补饲YC使VFA产""量增加,艺酸丙酸比例降低。Williams等(1991)发现,YC的添加使乙酸"1丙酸比从3.3:1降到2.8:1,而对瘤胃总YFA浓度不产生影响。与此相反,Sullivan等(1999)研究了在不同营养底物下添加YC后对瘤胃发酵的影响,结果发现,首猜干草为底物时,己酸、丙酸比例上升;底物为玉米碎粒时,YC对乙酸、丙酸比例及总VFA不产生影响底物为海岸狗牙根时,;而T酸、戊酸、丙酸、石酸等浓度增加,总VFA产量提高,己酸丙酸比例tw降低。张爱忠(2006)体外研究结果指出,瘤胃液总VFA浓度在发酵9h后降低,随后逐渐升高,21h时达到峰值,此时1.0%YC组显著高于其他"’1。,处理组,而其他时间点各处理组之间差异不显著由此可知明确YC的最适添加量对YC在生产实践中的应用具有重要指导意义。 8翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发酵活性物质含量的影响-1.NH.34YC对瘤胃3N巧度和BGP含量的影响YC刺激瘤胃微生物生长繁殖高对NH-N的3,提利用而加快菌体蛋白的合成。将YC添加到反当动物的日粮中发现,小肠细菌氮流量和瘤胃内W-细菌浓度增加,而NHN浓,由此可知NH3水平的降低不是由于3度降低脱氨作用或蛋白质降解而引起的,而是由于添加YC后刺激瘤胃微生物活性使之加速对NH3的摄取并合成蛋白质引起的,因此瘤胃内BCP含量增加""。瘤胃中BCP合成的效率和细菌的数量直接影响着微生物蛋白含量的高低-N和BCP浓度的高低反映了在特定日粮组成下。而瘤胃中NH3,蛋白质合成与降解二者所达到的平衡,且与微生物的数量和代谢密切相关。Saer-N浓m,lt等研究报道当反与动物瘤胃内NH3度在5g/化时可W保持瘤胃细菌的较高生长速率还有研究认为,酵母菌可W通过剌激反当动fwL酸菌的,,物瘤胃内f增殖,使BCP的含量升高还有研究认为酵母菌可aP-W促使瘤胃中的NH3大量转化为BC,因而降低了瘤胃中NH3N的浓度,若NH3浓度较低,则会影响到BCP的产量若NH3浓度过高,就表明反自动物瘤胃微生物降解氮源的速度远远超过瘤胃微生物利用NHs合成蛋白的速率,,平衡打乱将会导致瘤胃内氮循环的奈乱并造成氮素的流失。1.4酵母培养物对反自动物营养物质消化率的影响反当动物瘤胃中微生物对所摄入物质的分解作用,反应其瘤胃消化能力。YC具有调控瘤胃微生物,稳定瘤胃pH值,増强其瘤胃发酵的作用。研巧结果表明,在动物日粮中添加YC可提高其有机物、干物质、纤维素、半纤维素、粗蛋白、中性洗涂纤维和酸性洗涂纤维的瘤胃消化率及整个胃""H厮道的消化率。YC能有效调节瘤胃p,为纤维素分解菌群创造适宜的生存环境,使其保持较高活力。谭支良等(2004)体外试验表明,在日粮中补饲YC,可使其总的和不同发酵时间点的干物质降解率得到显著提W高。Dolezal.J等(2007)也经体外实验研究表明,YC可显著提高有机""物质的消化率。Williamsetal1991)研究发现,在动物进食后24h,添(加YC的试验组其纤维降解率显著高于对照组,但48h时整个胃肠道的纤W维消化率没有明显变化。大多数研巧者认为,YC的添加只在瘤胃消化的初始阶段对纤维物质具有降解作用,而不能对整个胃肠道起到降解和消化"7W作用。而Yoon等(1995)则认为,由于添加YC后对瘤胃消化的时间一相产生定的影响,再加上后肠发酵的影响,因此整个胃肠道的消化率并""不发生改变。黄庆生(2005)的研巧解释到YC的添加虽然能刺激瘤胃内水杨昔酶、木聚糖酶和簇甲基纤维素酶的活性,但木质素和纤维素等结 内蒙古农业大学硕±学位论文9_构致密区的相关酶活性并没有提高,因此限制了YC对纤维总消化率的作""生长和增加营养物质的消化率用。由此可知,YC在促进瘤胃微生物的这两方面与纤维分解酶的活性紧密相关。1.5复合益生菌制剂概述o一益生茵制剂(Probtics)是种生物活性制剂,不仅包含微生物生长i,,促进剂,还含有益生素可通过动物胃肠道并提高其非特异性免疫机能增强其抗病能力,。随着发酵工艺的不断发展微生物发酵生产饲料的方式一逐渐由单菌种发酵转向多菌种组合发醇,并侧重不同微生物之间的互补"",性具有同时降解饲粮中多种底物的作用,使其发挥正组合效应复合,工出的一种优菌制剂是由多菌种协同作用,并通过相应的生产工艺生产加。质高效的微生态制剂。最大限度的提高饲斜利用率及促进动物机体生长目前被协同用于微生物发酵技术的菌种主要有乳酸菌、霉菌和酵母菌,它们所产生的各种酶系可W将词料中的淀粉、蛋白质等大分子物质降解为小分子的单糖,使产物中蛋白质含量不、双糖、各种氨基酸及其他营养物质""""断増加更加有利于畜禽吸收。国内有制造高蛋白饲料是通过利用米曲"31霉、黑曲霉等菌种来发椿啤酒糟的试验研究。此外,我国引进的EM复""合微生物制剂良好的应用效果。复,在水产养殖和畜禽生产中均取得了一,因此定程度合菌制剂的产品价格虽然相对较高,但其使用时添加量低上也控制"53了成本。1.5.1复合益生菌的作用机理1.5.1.1微生物优势种群理论一,有益在正常情况下,动物肠道的菌群处于种平衡状态菌占绝对优99%。,占势,对整个菌群起决定作用动物肠道内的优势菌群主要是厌氧菌""W上、乳酸杆菌、满化杆菌、拟杆菌等。当这些优,其中主要是优杆菌势菌群受到破坏时,就会导致肠道微生态失去平衡,导致动物满化功能素。乱,导致生产性能下降此时使用,病原菌乘虚而入,从而抑制动物生长微生态制剂可W有效的补充或恢复优势菌数量,抑制病原微生物的生长繁。殖,从而,使肠道微生态恢复平衡使动物机体恢复健康1.5.1.2生物夺氧理论动物肠道内的有益菌都是厌氧菌,微生态制剂中的有益需氧菌进入肠,有利,道后可W消耗肠道内的氧气,造成厌氧环境于厌氧茜的定植和繁殖 〇翻料工艺及不同菌种巧合对复合菌固态发醇活性物质含量的影响2从而抑制需氧菌和兼性厌氧菌的增殖,使失谓的肠道微生态恢复到正常。某些微生态制剂含有枯草杆菌和蜡样芽抱杆菌等需氧芽抱杆菌,这些菌不能在肠道长期定植,,但可迅速消耗氧使肠道pH值迅速降低,从而有f?利于乳酸杆菌与双歧杆菌的生长。Maruta等(1996)研巧将含有枯草芽袍杆菌的饲粮喂给猪后,在其粪便中检测到的双歧杆菌数量显著增加,而链71"球菌和梭菌的数量显著下降,并且对仔猪的效果化于母猪。1.51..3生物屏障理论又称生物措抗理论,包括生物屏障和化学屏障,两种屏障直接或间接参与肠道内正常菌群的生物防御屏障。化学屏障是通过肠道内有益菌产生的郭酸、细菌素及过氧化酶等活性物质来阻止和杀死致病菌。蔡访勤等研究发现,,小鼠口服嗜酸乳杆菌后,粪便中的肠球菌数量显著减少大肠杆菌略有减少;巧氧菌群中的拟杆菌、双歧杆菌和梭菌的数量均呈增多的趋势;停服后,肠球菌数量增多,大肠杆菌数量持续减少;双歧杆菌持续增""4化多,梭菌和拟杆菌则减少。张帆等2004)的研究发现,嗜酸郭杆菌对(的发酵液中沙口氏菌和大肠杆菌的杀灭率分别可达13..52%和1672%,而对肠道正常生理菌群植物乳杆菌、、戊糖片球菌粪链球菌的生长没有抑制""生长。生物作用,说明嗜酸现杆菌不会影响它们的屏障则是益生菌附着在肠壁上,抑制病原菌的定植、生长和繁殖。1.5.2复合益生菌发酵作用效果,饲料经复合菌发醇处理后,能够刺激有益菌群的生长繁殖抑制有害菌的增殖,,因此有助于维持肠道微生态平衡从而增强机体免疫机制。am-toner,HilMill等(2002)研究报道,不同的益生茜对机体影响程度不同""。有些益生菌可W影响机体的免疫系统,而有些益生菌不具有此种功能-San加o(2Mattilalm等002)通过试验也发现了益生菌具有増强机体免疫"21系统应答的能力。复合益生菌制剂含有多种有益的活菌微生物,有利于动物肠道内微生态平衡系统的建立,,动物对其中的营养成份可充分吸收利用益生菌在发酵过程中能够产生大量的淀粉酶、蛋白酶、纤维素分解酶、脂肪酶,维生、素A,蛋白质、能量等营、D和B族维生素等提高了动物机体对矿物质、养成分的利用率,且提高了谷壳粉枯杆等粗纤维饲料的吸收利用率;复合菌在发酵过程中能够产生大量的有益代谢产物,可W抑制或杀死肠道有害菌群,。如有机酸的产生可^?降低肠道pH值促使形成不利于有 内蒙古农业大学硕±学位论文^。.Baia害菌群生长繁衍的有害环境,起到维护肠道微生态平衡的作用O.M等(2001)发现,益生菌制剂具有很好的抑制或杀害沙口氏菌群的作用效83里[]TfC01.5.3复合菌制剂的应用现状1.5.3.1复合菌制剂在单胃动物中的应用,能复合菌制剂主要是活菌为主的饲料添加剂够定殖于动物肠道内,促进肠道菌群平衡,刺激肠粘膜细胞免疫和体液免疫应答,具有增强动物机体免疫机制、提高其对饲料养分的消化利用率及促进动物生长等作用。潘木水等(2005)发现,将(芽抱杆菌+乳酸菌)的复合益生菌W0.3%的添加量补饲到肉仔鸡日粮中,经14d饲养试验后发现,试验组的肠糜蛋白酸18%、32%和15%,此、小肠淀粉酶、蛋白酶活性分别比对照组提高了外菌体本身还含有许多营养物质能够被动物机体消化利用,既可W提高其""饲料利用率。苏志勇等(1999)在30周龄左右的蛋,又使生长速度加快,鸡曰粮中添加微生态制剂,结果发现饲料转化率和产蛋率均显著提高,"51(因而每只鸡的经济收益也得到相应提高。陈丽艳等2006)研究表明,05%,饲将.的乳酸杆菌制誦添加至肉仔鸡的基础曰粮中料转化率相比对照""组提高了4.24%。朱万宝等(1999)通过给断奶仔猪饲喂由粪链球茜、蜡状芽袍杆菌等菌株制成的复合微生态制剂,进行为期20d的饲喂试验后11.2发现,增重比对照组提高了9.6%52,且每,饲料节约%头猪经济效益"71增加了5.96元。徐建雄用由植物干酪乳杆菌、乳链球菌等组成的产酶微生物制剂饲喂育肥猪,发现,其采食量、屠宰率及眼肌面积分别提高了""5.11%,3.35%和15.79%;料肉比和失水率分别降低了11.11%和4.81%。1.5.3.2复合菌制剂在反与动物中的应用益生菌可W提高反当动物瘤胃发酵水平、改善牛奶品质和产奶量还具有抑制肠道有害菌、调控菌群平衡的作用。张克梅等将复合微生态制剂饲喂给奶牛,发现添加微生态制剂姐的日产奶量显著高于对照’f"组。许毅等(2004)用现酸杆菌微生态制剂饲喂奶牛,其乳脂率和产"5>奶量分别提高0.03%和26%。楽广春等研究报道,将纳豆芽抱杆菌添加60d在奶牛日粮中,,饲喂试验后发现其产奶量、乳脂率及乳蛋白率均显s"t著提高。刘彩娟等研究报道,在奶牛饲粮中添加由(链球菌、乳酸杆NH-N菌、酵母菌等)组成的复合益生菌制剂,其瘤胃氨态氮(3)浓度、挥发性脂肪酸(VFA)pH值及水杨昔酶、簇甲基纤维素酶等纤维素酶活性 u翻料工芝及不同菌种巧合对复合菌固态发醇活性物质含量的影响也得到显著提高。表明复合益生菌制剂具有改变奶牛瘤胃发酵环境、刺激""纤维素酶活性的作用。1.6薛母培养物与日粮结构对瘤胃发醇效果的影响大量试验研究证明,YC与日粮结构之间存在互作关系,YC改变瘤胃发酵方式的能力主要因日粮不同而异。在动物日粮中添加YC,对改善微生物菌群、提离动物生产性能及促进机体对营养物质的消化吸收等具有重""要作用。日粮结构即日粮的沮成结构,也指日粮的养分含量及精粗比。不当的"W。日粮结构不仅造成营养物质的浪费,还会影响动物的生产性能若精料在日粮中养分浓度过高,则会扰乱瘤胃微生态系统的平衡,严重的会引发代谢奈乱及消化系统疾病(如蹄叶炎、肝胺讲、亚临床丽病及急慢性瘤胃酸中毒等),则会使养分的摄入量及瘤胃微生;如若日粮中粗饲料比例过高物活性受到抑制,从而影响到动物的生产性能,其中育肥牛和高产奶牛最为显著。因此,适宜的日粮结构是保证反当动物最大饲料营养利用率及高产性能的基础。近年来,大量的研究表明在动物日粮中添加YC可改善饲料适曰性、促进机体对饲料中营养成分的消化吸收,从而提高采食量及家畜生产性能。在反当动物曰粮中添加YC,通过对微生物菌群的作用可(^1提高乙酸丙酸比例及总挥发性脂肪酸的含量、通过调节H值可W稳定瘤胃内环境YCp;还具有増强瘤胃微生物对氨的利用而合成菌体蛋白,使氨更多的转化为菌体蛋白,且通过刺激纤维分解菌的活性改善饲料粗纤维和其它营养物质的利用率等调巧作用。1.6.1日粮类型对薛母培养物应用效果的影响61.11..日粮组成对轉母培养物应用效果的影响YC的作用效果随日粮姐成不同而异,日粮组成发生很小的变化都会引起YC作用效果的很大差异。Wiedmeie等研究指出,在闻牛的日粮中补1饲YC,其日増重增加了9%,而不添加YC的对照姐日增重仅增加了itw.7%。Edwards991现6等(1)发,词喂添加了YC的大麦和高纤维的农畐。产品的作用效果不如添加YC的青胆饲料作用效果好。当给奶牛饲喂40%的括杆、60%的精料时,补饲YC其产奶量增加了17.50%,若用青干草替代诘轩时产奶量只增加了还有研巧指出,将YC添加到奶牛的小麦和首靖干草日粮中时,可增加其产奶量,但是将玉米换作小麦时无此 内蒙古农业大学硕±学位论文^作用效果。Fallon等1987)研究发现,当饲喂高梁等淀粉精料时可提高较(牛对营养物质的消化率和日增重,而饲喂玉米面筋等非淀粉精料时则无此"W作用效果。可见,在不同的日粮组成条件下,YC的使用效果具有很大的差异,。目前,该方面的研巧还不够细致和规范添加不同YC时的最佳日粮组成条件还需进一步得到完善。1..6.12日粮精粗比对轉母培养物应用效果的影响日粮精粗比在反当动物饲料中起着重要的作用,它制约着瘤胃微生物区系的合成、影响着瘤胃发酵及终产物的形成。有关日粮精粗比影响瘤胃,通常情况下微生物菌群的研巧报道已有许多,奶牛采食高精料的日粮其瘤胃内菌群浓度要高于采食了高粗料的奶牛。随着可利用能量的不断摄入,瘤胃的菌群浓度也会不断升高。日粮精粗比不同添加YC后作用效果也存在差异,有研巧表明,当非结构性碳水化合物(NSC)浓度少于日粮干物质总量的25%时,添加YC后效果不明显,还会影响其饲料利用率和产奶量。因为日粮中NSC比例低时,YC在瘤胃内发酵和存活就缺少足够的代谢能给予维持,因此就有产奶量下降的报道。当日粮中NSC比例低时,随着日1W1粮水平的不断升高YC的作用效果也逐渐加强,好像在高NSC日粮的水""f平下添加YC,动物机体才会出现最好的生产反应。WUliams等(199。发现,将YC添加在精粗比为50:50的日粮中,干物质采食量和泌乳量分别增加了1.2k/d和1.4L/d60:40g,而YC添加在的W2精粗比日粮中,效果最为显著。张爱忠W.0%、2.5%、3.0%的YC添加在精粗比分别为20:80和30:70,,,饲粮中结果表明除YC添加量为2.0%、精粗比为20:80的试验组在晨饲后Oh瘤胃比对照组高外pH值,其它添加h"量和时间点均对瘤胃pH值不产生影响。Yoon等(1995报道,当日粮中)""可摄取能量高时,则添加YC作用效果不明显。谭支良等(1998)研究一认为,,日粮中存在着个SC/NSC的最适宜配比关系,在此比例下既不,又可增加各种物质的瘤胃降解率影响瘤胃降解动力学参数,并得出绵羊tiw日粮的最适SC2一/NSC为:l。,.86总之YC的添加效果不能概而论,W"而是依据日粮的精粗水平,过低或过高均会影响YC发挥其作用效果。1.6.2日粮粗精比对瘤胃微生物菌群的影响一反当动物的瘤胃是个十分庞大且复杂的微生态系统,栖息着各种各样的微生物,,包括瘤胃细菌、厌氧真菌和瘤胃原虫等它们对营养物质的消化和瘤胃发酵起到关键性的作用。宿主经过长期的适应和选择,与瘤胃 U翻料工艺及不同菌种巧合对复合菌固态发薛活性物质含量的影响微生物之间形成了一种彼此依赖、彼此制约的动态平衡关系。此种平衡对提高动物生产性能、维持动物机体健康和保证产品安全等方面具有重要的作用。微生物菌群的生长需要合适的瘤胃内环境,而适宜的日粮精粗比有利于微生物菌群在发酵前建立比较稳定的共生体系,不同的精粗比制约着瘤胃微生物区系的形成及合成效率、瘤胃内环境及VFA等终产物的消化吸收tiw。有关,曰粮精粗比影响瘤胃微生物菌群的研究己有许多,通常情况下反当动物采食高精料日粮时瘤胃微生物菌群主要有:乳酸杆菌、消化链球菌、嗜淀粉瘤胃杆菌、反与兽新月单胞菌,而采食高粗料日粮时其瘤胃微生物W溶纤维T酸弧菌、白色瘤胃球菌、产瑰巧酸丝状杆菌及黄化瘤胃球"t"菌为主。王梦之等(2009)发现,瘤胃细菌、原虫和真菌的数量受日粮精粗比I""的影响。王照华等(2005)报道,日粮精粗比影响着瘤胃内厌氧真菌的数量,,随着精料比例的增加真菌数量也逐渐下降,这可能是因为精料的111"增多致使瘤胃pH值下降,而影响了瘤胃厌氧菌的营养基础。也有与此相反的报道,王海荣(2006)研究证明,日粮精粗比对瘤胃真菌数量不产生影响,但是随着日粮精粗料比的递增真菌数量也出现了降低的趋势,而1'"1瘤胃细菌数量有增加的趋势,但是差异不显著。71.本课题硏究的目的与意义微生物发酵饲料的生产与应用己有很长的历史,主要是利用微生物的生长繁殖和代谢产物来生产及调制的饲料一。固态发酵过程般分为前期好氧发酵和中后期兼性厌氧发酵,且发酵过程中不进行翻料处理;由于酵母菌在前期发酵过程中生长旺盛释放大量的生物热加之发酵过程中物料的收缩和空隙的减少使热量难消除造成氧气供应不足,直接影响着菌体的生长繁殖及最终产品的生成,因此本试验通过对翻料和不翻料2种工艺的对比研究来阐明翻料工艺对酵母菌固态发酵的必要性,为翻料工艺在生产实践中的应用提供理论依据。随着发酵工艺的不断发展一,微生物发酵饲料的生产方式逐渐由单菌种发酵转向多菌种组合发酵,目前己有的研究多是枯草芽抱杆菌与霉菌协同发酵,而酵母菌与芽抱杆菌协同发酵的研究鲜有报道,而且这些研究都测定发酵饲料中的粗蛋白或活菌数作为评定产品质量的指标,而把发酵过程中产生的营养活性物质作为评定饲料质量标准的研究也未见报道。鉴于此,,本试验W鼓皮、玉米皮等为发酵底物W酵母菌与枯草芽拖杆菌为 内蒙古农业大学硕±学位论文1^.混合发酵菌种,探索不同菌种姐合对发酵产物中营养活性物质含量及体外消化率的影响,为其在反当动物上的应用提供理论依据。大量研究表明,酵母培养物改变瘤胃发酵方式的能力主要因日粮不同。而异,日粮结构发生很小的变化都会影响酵母培养物的添加效果本试验采用体外批次培养的方法研究不同日粮精粗比和复合茜培养物添加量对瘤一胃发酵的影响,进步明确复合菌培养物在日粮中的适宜添加量。并通过在绵羊日粮中添加复合菌培养物,考察复合茜培养物对绵羊生产性能和经济效益的影响,为复合菌培养物的合理利用提供理论依据。本论文主要由W下四部分组成:试验一复合茵培养物不同发酵工艺的比较研究试验二不同菌种组合对固态发酵料中活性物质含量及物料体外消化率的影响试验H复合菌培养物作用效果与日粮结构间的关联性试验四复合菌培养物对小尾寒羊育肥性能的影响 翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发薛活性物质含a的巧响^2试验研究2.1复合培养物不同发醉工芝的比较硏究2.1.1材料与方法2.1.1.1供试菌株’'XRccAarowcescerewwaeSC)两株,编号为4和BC,酿酒酵母菌(Say,均来源于内蒙古农业大学兽医学院反当动物微生态制剂课题组菌种库。.2.1.1.2培养基::麦芽汁液体培养基酵母菌斜面活化培养基:酵母菌液体扩培培养基麦芽汁琼脂培养基:;醇母菌平板计数培养基虎红琼脂培养基(均购自于广东环凯微生物科技有限公司。)、固态发酵培养基:W鼓皮、玉米粉、玉米皮、豆巧、棉化、米穂无机盐为原料按试验设计的要求混合固态发酵培养基。2.1.1.3主要仪器设备-450Varian气相色谱仪GC:原产地德国。ThermoScientific生物安全拒;原产地德国。-Sigma216pk髙速低温冷冻离也机;SIGMA公司生产。安捷伦LC1100液相色谱仪:原产地美国。液相色谱仪2:产地为上海科学器材有限公司。1ATSartorius精密电子分析天平;德国赛多利斯公司生产。2.1.1.4主要试剂?-铅化玻璃珠(粒径0.450.6mm)、P葡聚糖和甘露聚糖均购于英国Sima-Aricgldh公司。牛血清白蛋白购自北京政博伟业生物科技有限公司。-考马斯亮蓝G250购于天津市光复精细化工研究所。巧樣酸、甲基红、磯酸氨二钟、磯酸二氨钟、硫酸按、碳酸納和硫酸镶均购自于上海国药集团化学试剂有限公司。2.1.1.5试剂的配制蛋白质溶液的配制;准确称取牛血清白蛋白O.lOOOg,用蒸饱水定容于’C冰lOOOmL容量瓶中/L。,即为lOOmg的蛋白质溶液,保存于4箱中备用72%(w/w)H2S〇4溶液的制备:准确量取652mL98%H2S〇4溶液,加蒸 内蒙古农业大学硕±学位论文\1_馈水定容至lOOOmL。0.2mol化,pH8磯酸缓冲液的配制:称取KH2P〇4〇.41g、K巧PO45.巧g,’C用蒸馈水定容于1L的容量瓶中,即为磯酸缓冲液,于4冰箱中保存备用。pH4.8巧樣酸的制各:准确称取50mg巧樣酸定容于^OmL的容量瓶中,然后用精密酸度计调节pH值至4.8。21.1.6.试验设计"1"根据课题组前期试验结果确定的固态发酵培养基配方,将两株酵母"1"菌株(BC和XR4)按1:1比例,8%的接种量,接种至固态培养基中,在初始含水量50%左右的条件下将500kg混合均匀的微生物发酵饲料分为试验1组(不翻料)和试验2组(翻料)两个试验组,分别进行堆积发酵3一(料层厚度约50cm),期间每小时进行次室温和料温的监测记录。当’C时’温度达到40(不宜超过45C)试验2组进行翻料处理,整个发酵过程?W觀料23次为宜,之后进入厌氧发酵阶段。2个试验组分别在Oh、3h、、1、-6h、9h、1化5h、1化、21h24h、2化、28h和30h取样进行活菌数和p葡聚糖、、甘露聚糖、氨基酸、多狀有机酸等营养活性物质含量的测定。2.1.1.7试验方法2.1...171菌株活化培养I’-80C冰将酿酒酵母菌BC和XR4从箱中取出,室温下融化后接种于麦’芽液体培养基中,30C、180r/min培养48h,用接种环挑取少量菌液划线培养于麦芽汁琼脂平板培养基上,培养30h后挑取表面光滑且隆起明显、边缘整齐、质地发粘的茜落进斤镜检,确认菌体细胞无杂茜污染且生长良’好后,挑取茵落在麦芽汁琼脂斜面培养基上划线璋养24h后于4C冰箱保存备用。将活化后的酿酒酵母菌BC和XR4分别接种于麦芽汁液体培养基扩大‘培养,30C、180r/min震荡培养48h。2.1.1.7.2薛母菌活菌数的测定""1采用平板倾注法。称取5g样品放于装有45mL灭菌生理盐水的三角瓶中,充分振荡混匀,用微量移液器吸取ImL加入装有9mL生理盐水-的试管中1,旋锅振荡Imin左右,得到10浓度的菌液,W此类推进行倍比稀释-5-60、1〇,分别取1两个梯度的菌液ImL至无菌平皿中,每个稀释’C度3个平斤,然盾倾注培养于高压过并冷却至45的虎红琼脂培养基中,I1 8翻料工艺及不同菌巧组合对复合菌固态发醇活性物质含里的影响J‘充分混匀。待平板凝固后倒置放于30C恒温培养箱中培养48h后进斤菌落计数。2-.1.1.7.3葡聚糖P、甘露累糖含量的測定’C满流微珠破壁:将所取不同时间的发酵料,55烘干后称取0.5g试样于玻璃试管中,每个样品做3个平行,向其中加入3mL去离子水,充分0-震荡.40.6mm,收集洗液,重复5次,合并洗液后,向洗液中加入的玻璃珠Ig。再加2mL,PH8.0的磯酸缓冲液。然后在游祸混合仪上W400化U1"振动速度处理15min,3min/循环,处理循环5次。收集酵母多糖:从处理后的样品液中收集玻璃珠1ml,并用去离子水’日C将玻璃珠洗干净,重复次,收集洗液与样品液合并,将所得液体55静置24h蒸发水分。"W硫酸水解:用72%的硫酸溶液处理。同时分别称取葡聚糖和甘露聚糖各5.00m、6.25mg、7.50mg、8.75mg、10.00mg、12.50mg和15mg,g.硫酸水解后使多糖的最终浓度为〇.2mg/mL、0.25mg/mL、0.3mg/mL、0.35m/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL和0.6mg/mL制作校正曲线。g-单糖含量测定:采用液相色谱示差折光检测器测定各样品及校正多糖中甘露糖和葡萄糖的含量。j结果计算:UI峰面积为纵坐标,校正多糖的浓度为横坐标制备校正曲-。线,得出回归方程将样品的峰面积代入到回归方程中,计算得到酵母P葡聚糖及甘露聚糖的含量。2.1.1.7.4有机酸的测定’C烘发酵料经55干后粉碎过60目筛,称取5g样品于研体中,加入lOmLSO%的乙醇,充分研磨5min,转进50mL离也管中,经3000r/min离也lOmin,再用80%的己醇清洗残渣H次,,将上清液转入50mL容量瓶中合并上清液,用80%的乙醇定容至50mL。充分混匀后,取5mL放于蒸发经’皿中70C烘干后,用H蒸水清洗残留物后转入lOmL容量瓶中,加入,0.2mL,1111〇1化的磯酸,用三蒸水定容至刻度后混匀。液体经0.31111的滤^膜过滤后进液相色谱分析有机酸的含量。分析条件为,色谱柱:C18柱;:NHP0C巧0H:温度:室温;流动相(4)24:5(98:2);总流速;紫外检测器…".0.8mL/in20aL。.m;进样量|2.1.1.7.5氨基酸的测定 内蒙古巧业大学硕±学位论文^称取lOOmg固态发酵料于长颈玻璃试管中,加入15mL,6mol/L的盐曰’llOC22h,过滤后50mL定容。量取l.OOmL过滤酸,抽真空封,水解0一.02mol化的盐液,减压蒸干,用酸定容至定体积,最后用全自动氨基’酸分析仪(日立k8900型)测定样品中氨基酸的含量。分析条件为柱温57C;‘C#反应柱温为135;4.6x60nm分析柱;2622树脂;茹H厕溶液作为湿色液;"1"缓冲液是巧樣酸纳、梓樣酸。2.1.1.7.6酵母细胞壁中多化的测定in标准曲线的制备:取6只试管如表1分别加入试剂,混匀后静置5m,于紫外-可见分光光度计595nm处测定其吸光度。A595的吸光度为纵坐标,牛血清白蛋白的含量为横坐标来绘制标准曲线。表1标准曲线的制备(mL)Table1Fabricationofstandardcurveofoligopeptide(mL)Ml123456lOOmg/L标准蛋白溶液00.20.40.60.81.0008060S蒸水1....40.20G-2505考马斯亮蓝.05.05.05.05.05.0.多肤的提取:称取lOOg固态发酵料于50mL的离也管中,加入10mU75%的乙醇和5mL、pH4.8的巧樣酸,充分混匀后用4000巧m/血in离也lOmin,取上清液。多肤的测定:取3支试管,各吸取样品提取液ImL,加入考马斯亮蓝〇250溶液5.〇1111^,充分振荡混匀后静置5111}11,测00595值,代入标准’11"曲线中求出样品中多狀的含量。2.1.1.8数据处理与分析数据统计方式利用Excel软件处理基础数据并制作图表,用SAS软件中的GLM过程进行方差分析,多重比较采用Duncan法。2.1.2结果2.1.2.1固态发薛料发酷温度测定结果由图2可W看出,随着发酵时间的延长,试验1组与试验2组的料温’C和’均逐渐上升,到15h时2组均达到最高分别为4644C,之后试验1组 翻料工芝及不同菌种组合对复合菌固态发薛活性物质含量的影响^‘C左保持在45右没有显著变化;而试验2沮在发酵进行到15h时进行翻料处理,随后料温出现显著下降(P<0.05)3,约个小时后即发酵过程进行°到18h时,料温回升到43C,其后,分别在18h和2化迪行了两次翻料,’24h时进入厌氧发酵,42C。试驗2组经过翻料媪保持在料处理后,料温显著低于试验1组(P<0.05)。50r^>-3〇|一一试验1T组J; ̄ ̄*"*-*"*--一*试验2组^ ̄ ̄ ̄ ̄ ̄*—-*——^20蛮湖I-10036912131517182124262830时间(h)图2翻料工芝对固态发轉料溫度的影响rnec-aedF.i2巨ffectsofmaterialtudtehnoloontemperatureinsolidstefermenaionfeggyttt2.1.2.2固态发醇料中轉母活菌数測定结果由表2和图3可W看出,随着发酵时间的延长,酵母活菌数不断上升;7试验1组在15h时,酵母活菌数达到最大值为2.52xl〇c化/,随后逐渐下g7降,到3化时达到最低值为0.44xl〇cfu/。试验2组在15h时开始翻料,g7酵母活菌数继续增长,到18h时达到最大值为2.68x1〇c化/g,么后逐渐下7降,到3化时达到最低值为0.72xl〇cfu/g。试验2组经过3次翻料处理后,除24h外其他各时间点的酵母活菌数显著高于试验1组(P<0.05)。发薛结束,试验2组酵母活菌数比试验1组提高了63.64%。>表2翻料工芝对固态发爵料中活菌数的影响(X1〇cfu/g)Tab-le2EffectsoftechnotmaterialturnedlogyonviablecountinsolidstatefermenationX^feed1Ocfu/)(g活菌数‘试验2组1组试验'^*^?.±0.04±0002212.2.08AeAf30.55±0.040.51±0.1l 内蒙古农业大学硕±学位论文^^^Ade60.88±0.190±.810.09*=^"91.28±0.481.31±〇.irAeAc12.1.1±.1142±0.n504Aa^":t2152.520.09.56±0.06BaAa182.36±0.1〇2±00.68.3BabAa212.±.23±0092.530.08AbAb242.02±0.172.05:±0.1〇Bc^'261.28±0.171.41±0.13Bde280.72±0.091.18±0.1产BfAef300.44±0.1〇0.72±0.2l注一一:问行数据扁标大写字巧表示巧时间不问组间的比较同列数据扁标小写字巧表示岡组;不同时间的比较>。肩注含有相同字母表示差异不显著(/>0.05),含有不同字母巧示差异湿著<.(f005),下表同。3.0「:::I:霞。.5^IIIIII1IQII[IQ03692181152124262830发酵时间(h)’图3翻料工畫对固态发爵料中活菌数的影响F.i3Effectsofmarialturnedtechnolooncotg化gyrUentofviablecoun-insolidsaefermenaonfttttieed2-.1.2.3固态发醇料中3葡聚糖、甘露聚糖的测定结果?由表3和图4图5可W看出-,随着发酵时间的延长,固态发酵料中P?葡聚糖和甘露聚糖含量不断增加0-15h;时,试验1组的P葡聚糖和甘露聚糖含量与试验2组相比无显著差异(P>0.05),试验2组在15h经过翻料处理后3-,除28h外其它各时间点的葡聚糖和甘露聚糖含量均显著高于(试验1组(尸<0。.05)发酵结束时与发酵前相比,试验1组和试验2姐的 2翻料工艺及不同窗种组合对复合菌固态巧薛活性物质含g的影响£-.30P葡聚糖含量分别提高了60.08%和76%,甘露聚糖含量分别提高了47-.63%和54.20%试验2组葡聚糖、甘露聚糖含量分别较试验1组提;且P高了8.46%和1.48%。表3巧料工芭对固态发度料中多巧含量的巧响(mg/IOOmg)Table3Effectsofmaterialturnedtechnolooncontentofeastolsaccharidesgyypy-minsolidsta化fermen化Honfeed/lOOm【gg)-葡聚糖甘露聚糖p时间(h)试验1沮试验2组试验1組试验2組AdAf^"紅084.00±3.5〇82.73±1.4744.93±1.6043.65±0.70^^^Ad^*""38L48±1.6580.96±].2848.32±].0643.22±1.44^'^Ad*"687.79±9.768523±65153.79±1.6产6034±082....^°^*^'**'^"9116.3±2.181082±18362.96±0.836±1.4.3.570.91Abc^"*乂’6^?12120.65±0.34117.92±1.6265.84±4.6766.93±3.84Aab^""**。6*。15125.79±3.7〇121.84±1.3563.34±0.5961.45±0.35Bab^"=?*'^^?18123.63±3.47129.52±2.2464.72±5.1966.10±1.72?*"*^**"?*"'*321127.53il.55131.87±25962.88±0.6366.05±0.01.?""乂6?"'*'**24124.90±9.6613744±2.1563.37±1.6565.42±0.44.Bab^'"'=8>^"26128.45±1.49130.83±0.8860.化±0.1〇64.92±2.25Aab^**"^^'***28128.70±2.3l132.72±0.5165.21±0.6265.24±2.01?*AaBab^?30134.47±0.84145.85±1.9〇66.33±0.1667.31±0.40160「Ino试验'組I一.夺试验2姐50巧m40-P-20C1I,CL111IItIIq03691215182124262830发脖时间(h)4翻料工艺对固态发持料中-困目巧巧裙含量的彩响F--ig.4Effectsofmaterialturnedtechnologyoncontentoflucaninsolidstatepg 内蒙古农业大学硕±学位论文^fermentationfeed抓「-^试验!1組,。f40?一一-试验2组紙雲20■随?J—IIIIIIIII1IfQ03691215182124262830发醇时间(h)图5葡料工艺对固态发巧輯中甘涅巧搪含fi的影响F-i.5Effectsofmaterialturned化chnolooncontentofmannaninsolids化tefermentatonggyifeed2.1.2.4固态发醇料中有机酸含量测定结果?表?由表46和图6图10可W看出,随着发酵时间的延长,4种有机酸的含量均出现不同程度的增加;试验1组和试验2组的酒石酸含量在?化时呈现递增趋势?0,315h缓慢上升,在15h时试验2组经翻料处理后各时间点酒石酸含量显著高于试验1组(戶<0.05)。试验1组和试验2?组的朽樣酸和苹果酸含量在015h时均呈现缓慢上升趋势,15h时试验2组经过翻料处理后除在24h略有下降外其它各时间点均呈现不同程度的増加。號巧酸含虽没出现明显的规律性变化。?015h时,试验1组的总有机酸含量与试验2组相比无显著差异(户>0.05),经过3化的发酵,试验1组和试验2组的总有机酸含量与发酵前相比分别提高了137.06%和147.55%,酒石酸含量分别提高了255.29%和266.28%156.08,巧樣酸含量分别提高了%和171.05%,苹果酸含量分别%和〇提高了114.79123.12%,璃巧酸含量分别提高了58.78%和62.92/〇;且试验2组总有机酸含量较试验1姐提离了3.72%。 w翻料工泛及不同菌种组合对复合菌固态发醇活性物质含置的影响表4捆料工芭对固态巧巧料中酒石酸和巧巧巧含量的巧响(fig/nl)T^able4EffectsofmaterialturnedtechnologyoncoiUentof化itaricacidandcitricacidin-soHdstatefermeiUationfeedi/m(jg〇酒石酸枝樣酸时间(h)试验1狙试验2姐试验1姐试验2組"Ah**^^++'*?049.30±2.7551.071.65225.5512.61218.75+8.06Ag+^***帥+^^?379.26+1.6368.530.81246..0228.93±61467.24*^'1*^?8+*+''^?*682+6259+.770.3679.841.1.367.83247.589.13'^^^'*+*+"?80276984.68±0.74.450.63.2317.91264.65+6.55AfgAd^?+*483.47±1.6〇78.87±2.4l307.95+8.062.518129816.^'*^'*^?+^*85.88+0.9183.69+0.51317.58+13.663.49.4615091?*AC?***=18100.16+1.85115.65+8.64363.15+13.70417.20+5.32?"'**6+?+*6++40821114.201.49142.575.73.266.05437.635.22?"^*?''*624150.72+4.80161.10+5.64468.23+7.89457.81+14.56*Bb*6?*^*+''++16826164.411.75.82±0.40493.194.87548.3211.44?***?*^°+28175.511.44175.97+1.83560.81+9.68591.39+9.93?*乂。+?"乂’30175.16+2.08187.06±2.25577.598.56592.92±0.58表5翻料工艺对固态发度料中苹果酸和巧巧巧含量的巧喃(ig/ml)jTable5EffectsofmaterialUirnedtechnologyoncontentofmalicacidandsuccinicacidin-solids^tefermeiUationfeed(^g/ml)苹果酸規巧酸时间(h)试验1组试验2组试验1组试验2组"'^'^*'"±^0277.28±12.39275.83±10.4150.371.3452.81±2.17±Ah^''^"*'^^3272245.27268.45±67565.52±5.8463.75±1.82..Ag^?±*4?^**6306.29±7.56296.37±8.8163.463.0762.82±2.7Af^^?^*^?^'*?s±9327.83±10.73319.65±11.9461.14±1.0060.861.21AfAf*扣*<**.34212331.91±152〇.76±12.4〇63.67±2.3265.78±2.55Ae^?^*^".±..26±.315.±.0256.±1.271538017172〇39115953183i?**±^"?**?±18414.66l7.19471.8313.7063.41±1.4864.661?"^=?"*^"±*21492.73±8.15518.95±13.5369.040.8675.87±0.38?=*。?"*'^'"24531.60±1.76506.50±6.8969.22±2.0284.08±1.64 内蒙古农业大学硕±学位论文^化*>?*"^"±±26549.76±2.66573.906.7274.721.6873.98±1.89?"^*'?^"'"''28574.48±9.72589.22±8.4476.03±2.2583.83±1.25化*。?-^"3059558±5.61615.44±2.2979.98±186±222..56.04.表6巧料工^对固态发爵料中总有机酸含査的影响(ng/ml)Effectsofmater-Table6ialturned化chnolooncoiUentoftotaloranilidgygicacidnsostatefermentationfeedi/ml)(jg总有机酸'—机司(h)试验1姐试验2组^''^^0602.51±20.92598.46±14.42Ak^'3663.94±15.58629.19±4.65^乂**J±6711.87±2.43686613..55^'^?9749.87±5.44725.61±6.71^'Ah±*t12786.99i23.97785.9215.36*6*。15843.16±3.65841.1化2.84?^Ad‘■±0.18941.37161069.33i0.8l?*乂。211084.21±0.241175.01±2.95Bd*=241219.76±8.9l1209.4化25.458。*>26128207±76〇1±..365.0120.46Bb^"281386.82±23.091440.40±18.96°"^°301428.30±17.811481.46^6.18200「〇150一"试验地或00.^--.一澄t-4-试验娩這50IIIII1IIIIIIQ03691215182124262830I发脖时间(h)圍6翻輯工芝对固态发强料中酒石巧含量的影晌-Flig.6Effectsofmateriaturnedtechnologyoncontentoftartaricacidinsolidstatefermentationfeed 翻料工芝及不同菌种组合对复合菌固态发醇活性物质含量的影响些卵0「60-0-=#3_*:=::董试验视I^1_i^M2^留3卵泌一^忠I10369121518212426巧如发择时间a)图7巧料工芝对固态发度輯中持巧巧含量的影响F-i.7Effectsofmaterialturnedtechnolooncontentofcitricacidinsolidsateggytfementationfeed800r-==600-=*^:?=gjrj,y*试賴I400-^^试验鄉治—■Iwiyg200-03691215182!24262830发蘇时间(h)图8涵料工芭对固巧发爵料中苹果酸含量的巧响F-i8Effectaterialrned化chnolo化ntofmaHcaidiljg.sofmtugyonconcnsods化化fermentationfeedi20「扣?-4—-一试掛组^*试巧烟iw?巧03691215IS2124262830发巧巧间(h)围9涵料工艺对固恣发搏料中巧巧巧含最的巧响-Fiig.9Effectsofmaterialturnedtechnologyoncontentofsuccnicacidinsolidstateferme打tationfeed 内蒙古农业大学硕±学位论文巧側0「J麵-5尝--?測含佛"^""*--"800=>==*^=*+;三公朋i规^<^I一4-巧00巧IIi1III1IQ283003691215182]2426发睹时间(h)圍10翻料工芝对固态发薛料中总有机酸含量的影晌^-tonconttidinsolidsatetentofoaloicactilturnedtechnologamFi.10Effectsofmaera呂ygfermentaifeedton2.5.1.2固态发酵料中氨基酸含量测定结果??,1,试验1由表7表8和图1图14可W看出随着发酵时间的延长?,试验1组和试验2组的总氨基酸含量均呈现不同程度的增加,0パh时姐的总氨基酸含量与试验2姐相比无显著差异(尸>0.05),试验2沮在经1显著高于试过翻料处理后,除18h和2h外其它各时间点总氨基酸含量均<053验1组(P.0);种限制性氨基酸的含量均随着发酵时间的延长有着不同程度的增加,但试验2组经翻料处理后3种限制性氨基酸含量与试验(戶>0050h1组和试验2组1。经过3的发酵,试验组相比无显著差异.)913.36%且试验2组总的总氨基酸含量与发酵前相比分别提高了.27%和;氨基酸含量较试验1组提高了0.46%。m/100m表7翻料工艺对固态发醇料中3种限制性氨基酸含量的影响(g巨)nttinoacidsittentofhreelimiinamEffecilrnedechnoloonconTabtsofmateratugle7gy-t/solOOmlidsta化fermenationfeedmgg)(酸精氨酸蛋氨酸赖氨司(h>I2沮试验2组试验姐试验1组试验1组试验1组试验2bAb^^'^^'^^'A±5±0.0±±0.21±0.010.0.0产0.5.2.5800.710.4803000.68±0.69〇bAb4。AcdAbcAabAaa±0±0l..0±.±.0l.0〇0.58l.±0.0230〇59311±.'03日220〇.80.0〇〇20AabAAbAabAbe扁aba〇±〇〇2〇〇〇〇.±.〇6〇.2±.〇.19±.59〇〇〇±0.1±l300〇6.00180.01.16AbAab〇〇AbAabAaba0':t'0l0〇.1±0.620〇.010.24±0.0]6l.l.23±91.7±0.0l.20±001 M翻料工苦及不同菌种组合对复合菌固态发酵活牲物质含s的影响AabAabAabAab121.03±0.08l.〇8±〇.〇30.24±0.0l〇.26±〇.〇〇〇.60±0.0]0.61±0.00AaAaac^='*Abe151.41±0.371.37±0.14〇.22±0.0〇0.23±0.0I0.5化0.0〇0.60±0.00AabAabAaAbe181.16±0.081.19±0.0l〇.23±0.010.25±O.Ol0.60±0.020.57±0.07AabBab^**BdeAbe211.20±0.0〇L16±0.0〇〇.25±0.010.22±0.0〇0.59±0.0〇0.56±0.00AabAabAbcAabAbc241.20±0.041.19±0.0l〇.23±0.0〇0.23±0.0l〇.60±0.(n〇.59±〇.〇〇AabAab^""AabBbe261.18±0.0l1.19±0.0l〇.24±0.000.25±0.0l〇.59±〇.〇l0.63±0.01AabAab^"'*AcdAbc281.18±0.0l1.18±〇.〇l0.23±0.000.22±0.0l0.60±0.0l0.63±0.07AabAab^"^?30:t:±1.18〇.0〇1.18t0.020.23±0.010.20±0.010.66±0.000.650.028mg/100m表巧料工芭对固态发爵料中总&基酸含量的影响(g)Tab-le8Effectsofmaterialrnettentoftotalaminoacidstatetudechnologyonconidsinsolfermentationfeedmg/lOOmg()总氨基酸h时间()试验1组试验2沮AfAs0n:fc.91〇.0613.47±0.03Af乂81i014.033.95.08.06±08AefAfs614:t.12〇.ll14.14±0.0lAdeAfs914.17±0.1514.02±0.06Ad*^^?12±14.21±0.0314.170.0lAcdAef1514.25±02314.24±0.03.Aed^**?1814.28±0.0214.36±0.26AbcAcd21±14.58±0.1614.530.47?""Acd24146±03514.68±00〇.1..?""Abc2614.71±0.0914.91±0.09Bab。>2814.78±0.0215.19±0.22?*Aa3015.20±0.0915.27±0.13, 内蒙古农业大学硕±学位论文^0-5「-..0.4I_0.3-一说抢1组>一^片直。试验2组I0.2I0-.103691215142621822830发碌时间(h)图11翻料工芝对固态发醇料中蛋氨酸含fi的影晌-F.ig11EffectsofmaterialturnedtechnologyoncoiUentofM巨Tinsolidsta化fermen化tionfeed0.70r0-.651夺細组0-I.60本少亡*?试验2组备/、鬟0.55|''>''I'■'1110.5003691215182124262830发挣时间化)图12颗料工蓉对固态发酷料中赖备酸含》的影响ma-Fig.12巨ffectsofterial化rnedtechnologyoncontentofLYSinsoHdsta化ferme打化donfeed1.5广马产一卢毒:勺.I,,少一?一试验言^1纽_.I广惠一-试验2组。■.5丽03691124283012518226发巧时间Ch〉围13翻料工2对固态发辩料中巧氨酸含《的影响F-i.13EffectsofmaterialturnedtechnolooncontentofA民Ginsolidsta化ggyfermentationfeed ^翻料工咨及不同菌种组合对复合菌固态发酷活性物质含量的影响15.5「。。.I之^-八f14.5巧验地"■*一==*<六i==^14.0:试誠,_5|^./费巧135I'>'*1>■'*>'13.003691215182124262830发酪时间(h)图14捆輯工S对固态发辞料中总氮基酸含量的影响-Fi.g14Effectsofmaterial化rned化chnologyoncontentoftotalaminoacidsinsolidstatefermentationfeed2.1.2.6固态发醇树中多化含量的测定结果由表9和图15可W看出,随着发酵时间的延长,试验1组和试验20?组的多肋含量略有升鳥5h;1时,试验1组的多狀含量与试验2组相比>〇?无显著差异(P.〇5)1830h2组经翻26h,期间,试验料处理后,除外其它各时间点的多肤含量均显著高于试验1組(P<0.05)。经过30h的1.%和发酵,试验组和试验2组的多化含量与发酵前相比分别提高了101722.02%.。;且试验2组多狀含量较试验1组提高了231%表9巧巧工3对固态发巧料中多巧含量的巧响(mg/g)TE^able9ffectsofmateiilid-tial化rnedtechnologyoncontentofoletidesnsos化epyppfermentationfeed(m/)gg多肤时间(h)试验1组试验2姐AbAd01.18±0.051.09±0.03AabAcd31.25±0.07L33:fc〇.02A*bAbc61.31±0.09L28±0.05^*Ab?91.35±0.101.36±0.04*,Abc211.33±0.041.30±0.02Aab^'>*r115IJlfcO.Og.34±0.01?±"±Aab181.350.091.390.n 内蒙古农业大学硕±学位论文^?"Aab211.34±0.021.44:t〇.08Bab*。241.31±0.061.36±0.02AabAa26IJSiO.Og1.34±0.03BabAa281.24:fc〇.l〇1.30±0.04BabAa30].30±0.071.33±0.02.r15-.13*|繼.J12械./11,II1Ill11IIIJQ03691215182124262830发酵时间(h)图15巧輯工艺对固态发巧料中多化含量的巧响I.-Fig.15EffectsofmaterialturnedtechnologyoncoiUentofoletidesinsolidstatepyppferme打化Honfeed2.1.3讨论固态料在堆积发酵过程中,物料的厚度与氧气的扩散及其通透性密切相关。在前期好氧发酵阶段,当好氧微生物繁殖起来W后,导致物料温度的上升和氧气的减少,对微生物的生长繁殖及产酶产生不利影响,从而直接影响到固态发酵稱的品质,因此固态发酵过程中需要通过通风降温或翻料等方式促使热量及时散发。’目前,,固态发酵的机械化程度还很低即使在发达国家也是如此,而向发酵器内持续的强制通风常常会加速水分的挥发,导致基质含水量的降低,最终影响微生物生长和代谢;即使是通入含有饱和水的空气,当气体通过物料层时会带走部分代谢热,也会增加气体携带水分的能力,结果加23’"13速了物料层基质水分的挥发,且此种降温方式会加大固态发酵工艺的生产成本此通常采用最常用而有效的降温方法一-;因翻料。本试验主要进行了固态发酵条件下翻料与不翻料的实验研究,虽然研巧内容不是很深,但问题的提出来源于生产实践,研究结果表明试验2组的活茵数及营养物质含量均化于试验1组,这是因为当固态发酵料温度达到最 翻料工艺及不同菌种纪合对复合菌固态发薛活性物质含s的影响^一,试验2组进行了翻料处理高时,是进入了部分空气,增加发酵料中的氧气,使酵母菌更快的生长繁殖;二是释放掉发酵过程中产生的热量,发酵料经过翻料处理起到了散热溶氧的作用效果,有利于酵母菌的代谢,从而提高了饲料的营养价值,因此翻料工艺是影响酵母类固态发酵产品质量的重要因素。此外,所,由于在生产实践过程中,固态发酵料生产规模较大一W建议在生产过程中进行次翻料即可。2.1.4小结本试验条件下,复合培养物经过翻料处理后可显著提高饲料中的营养3-活性物质.64%,其中醇母活菌数较不翻料组提高了6;P葡聚糖和甘露聚糖分别提高了8.46%和1.48%;多肤含量提高了2.3%;总氨基酸含量提高了0.46%.。;总有机酸含量提高了372%2.2不同菌种姐合对固态发醉料中营养活性物质含量及体外消化率的影响2.2.1材料与方法2.2.1.1试验菌株来源于内蒙古农业大学兽医学院反当动物微生态制剂项目组菌种库的??^^m一2株酿酒酵母菌iSflccAarocescerev!wae,*SC:BC和XR4及株髙产淀(ッ)粉酶的枯草芽拖杆菌A。1521.2..2培养基:酵母菌斜面活化培养基:麦芽汁培养基;酵母菌液体扩培培养基麦芽汁琼脂培养基:;枯草活化培养基营养肉汤培养基(均购自广东环凯微生物科技有限公司)。、固态发酵培养基:W获皮、玉米粉、玉米皮、豆牠、棉化、米慷无机盐为原料按试验设计的要求混合固态发酵培养基。2.2.1.3主要巧剂氯化钢、硫酸镑、碳酸纳、磯酸氨二钟、磯酸二氨巧、氯化铁、氯化钻、水、硫酸待、氯化铺、氯化镶、氯化铜、硫酸亚铁、亚硝基铁氯化钢杨酸納、巧樣酸H钢、次氯酸钢、硫酸倭、乙二胺四乙酸、硫化钢均购于上海国药集团化学试剂有限公司。2.2.1.4主要仪器设备 内蒙古农业大学硕±学位论女^ran气-50Vai相色谱仪GC4:原产地德国Sartorius精密电子分析天平:德国赛多利斯公司生产T6系列紫外可见分光光度计:产家为北京普析通用仪器有限责任公司ThermoScientific生物安全柜:原产地德国-HPS160恒温生化培养箱:哈尔滨市东联电子技术开发有限公司生产S-、igma216pk高速低温冷冻离屯机:SIGMA公司生产2.2.15.试剂的配制-.S还原剂溶液;称取125gNa29H2〇后溶于蒸馈水中,定容至50mL’容量瓶。持续通入C化约20mm后,盖严瓶口,放置4C冰箱中备用。*微量元素溶液:准确称取ZnS〇4^H2〇20mg、H3B〇360mg、CoCh6町〇*?40mg、F巧〇47H2〇400mg、NaMo〇46mg、EDTAlOOOmg、MnCb4H20*?400mg,CuCl22H2〇2mg、NiCl26H2〇4mg用蒸傭水溶解后,定容至’2000mL。持续通入C化约20mm后,盖严瓶口,放置4C冰箱中备用。常量元素溶液:称取KH2P〇4584mg、NaCMOOmg、(NH4)2S〇4960mg、?Na2C〇38000mg、K2HP〇4765.02mg和MgS〇47H20200mg充分漏合力日入2b〇OmL一。于蒸溜水溶解,定容至试验的前天配制此溶液备用。缓冲液.00mL的80.8mL:将16微量元素溶液加入到15的常量元素溶液中,充分混和并持续通入(:化1811,3.2mL还原剂溶液于培养前Ih加入,20mLin充分混合后于每个培养瓶中分装并通入C化气体lOm,密封好后’置于恒温水浴摇床中预热至39C待用。2.2.1.6试验设计将活化的酿酒醇母菌(BC、XR4)和枯草芽抱杆菌(A15)按不同茜中:。其中,试验1组11比种比例接种到固态发酵培养基1^^例接种BC和XR42组Wl:、基:l0.5比例接种BCX民4和A15,试验,W不接种的培养"1"’C为对照组。各组接种量为8%,含水量为45%,30恒温培养48h。各、3化和48h四-组分别于Oh、24h个时间点取样,测定样品的目葡聚糖、一甘露聚糖、有机酸等营养活性物质的含量,并通过体外级离体消化试验测定3组的干物质、粗蛋白、中性洗涂纤维和酸性洗洛纤维消化率。2..21.7测定指标及方法2-.2.1.7.1P葡聚糖、甘露累糖含量的测定同2.1.2.3。 u翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发轉活性物质含量的影响2.2.1.7.2有机酸含量的测定同2..。.1242.2.1.7.3氨基酸含量的测定同2.1.2.5。24.2.1.7.多化含呈的测定同2.1.2.6。2.2.1.7.5物料体外消化率的测定"tii一963采用级离体消化试验法,人工瘤胃培养液参照Tilley等(1)的方法配制。选取3只体重相近且安装永久性瘤胃瘦管的内蒙古绵羊,用于瘤胃内容物的采集。基础日粮由精料和青干草组成:,精粗比3070,单笼饲养,自由饮水。晨饲前2h通过瘤胃瘦管采集瘤胃内容物,混合后装入保媪瓶内,迅速返回实验室,在缓慢通入C〇2的条件下,用四层纱布过滤收集瘤胃液,滤’液收集到预热达39C并通有C化的烧杯中。采用生理盐水瓶(250mL)作为发酵瓶,准确称取风干样品2.0000g放入培养瓶中,每个样品H个重复,同时设空白对照组,,即不添加发酵底物‘仅有瘤胃液和培养液,用于校正。在39C恒温水浴摇床中预热。然后向每个培养瓶中加240mL培养液(瘤胃液和人工瘤胃培养液的混合物,体积比:2)。为1;向溶液中持续通入C化,使溶液和瓶内空间充满C〇然后盖上2‘C恒温带有放气阀口的橡皮塞,密闭。放入39水浴摇床中培养24后,用尼’巧袋(尺寸为110mmX80mm,孔径为400目)过滤残渣,用水洗净,105C烘干,称量和计算样品干物质消化率,然后测定消化后样品中的CP、NDFU2"和ADF含量,测定方法参照张丽英(2007)的方法,并计算各自的消化率。X-样品重()样品中某巧葬成分含量(%)残渣重)XS(g残渣中《营养成分含量(%)[][],…甘?沁化*。^^XIOO某昔养物质体外冶化率(%)样品直(g)诚fp結S減分含遺(的)2.21.8.数据处理与分析N2.L1.8。 内蒙古农业大学硕±学位论义^2.2.2结果2.2.2.1多肤含量测定结果由表6Oh(尸.10和图1可y?看出,在时,各组的多肋含量差异不显著>0.05)24h和36h时,试验2组显著高于试验1组和对照组(尸<0.05),;但试验1组与对照组之间差异不显著(P>〇.〇5),在48h时试验2组显著高于对照组,但与试验1组之间差异不显著(尸>0.05)随着发酵时间的;延长,各姐的多化含量均出现不同程度的增加,3组多狀含量均在36h后.28m/、1.31m/和1.34m/。8h的发酵趋于稳定分别达到1gggggg经过4,对照组、试验1组和试验2组的多化含量与发酵前相比分别提高了17.43%、〇〇22.43/〇和27.62/〇。表10不同菌种巧合对多化含量的影响(mg/g)Tabtrennat()le10Theeffecofdiffetstraincombiiononcontentofolyeptidesm/ppgg组别指标时间(h)对照组试验1组试验2组*6^**^"=‘+01.0901.+1+.01070.03.050.0686BC^"241.12+0.02I.I3+O.O41.22+0.03多狀?"刖^*+++1.361.240.03.270.01l.SlOOl83^°481.28+0.041.31+0.0严1.34+0.021.6AB「^BB_曲麻◎賴<1;画国■试捡组□试检迎I;|fP团_I_II_Li…Oh2曲3啸4就发齒巧间化)图16不同菌种组合对多肋含量的影响Fi.fecfdiffebini16Theeftorentstraincomatononcontentofoletidesgpypp2.2.2.23种限制性氨基酸及总氯基酸含量测定结果?由表11和图19图20可W看出,随着发酵时间的延长,3组的赖氨 ^翻料工芝及不同菌种组合对复合菌固态发薛活性物质含g的影响酸含量呈现不同程度的増加(戶>0.05),精氨酸和蛋氨酸无显著变化(P>0.05);经过48h的发酵,各组的限制性氨基酸均无显著差异(P>0.05)。3组总氨基酸含量在Oh和24h时基本接近36h8h时,试验1;和4组和试验2组均显著高于对照组(戶<0.05);随着发酵时间的延长,各组总氨基酸含量呈上升趋势。经过48h的发酵,对照组、试验1组和试验2组的总氨基酸含量与发酵前相比分别提高了6.69%、7.41%和9.01%。表11不同菌种巧合对3种限制性急基巧及总复基酸含量的彩响(mg/100ng)Table11Theeffectofdifferentstrainscombinationofthreekindsoflimitinaminoacidsandgtotalaminoacidscontentsm/lOOm(gg)_组别氨基酸时间(h)对照组试验1组试验2组AaAaAa01.04±0.031.04±0.0〇1.00±0.04Aa+^*+'^"241.01±0.020.980.061.030.02精氨酸Aa+*。^"3612.01±0.0〇1.020.031.04+0.0A^aAa+"481.01±0.021.03±0.0〇1.050.01——ASAa*300+0020.13+002.12.0.15±0.0l.caas+?"240....00.12±00〇016±0.0〇0140蛋氨酸+?"Aa^?"3600.000.14+0.01.130.15±0.0〇AaAa^"0.15+0.0l0.15+0.0〇0.15+0.00^AbAb+^''000.70±0.0l.68±0.020.690.03Aab+*6+^"240.75±0.050.680.020.770.00赖氨酸+ABab+??+*3360.770.0〇0.760.010.790.01+A?^"+^"480-80O.Oi0.77+0.010.790.01Ab+^**+*6013.90±0.2l14.170.2113.990.42+Aab^^+^"2414.490.5614.11+0.3414.880.12总氨基酸?""^"^*3614.65+0.0315.11+0.0715.17+0.21°^^°^=*^14.83+0.1915.22+0.3315.25+0.20 内蒙古农业大学硕±学位论文^■1.4A1.AAAAA-2貪令AAA令令.因誦I;;:也曲曲曲。職班jIi11—麗IA图I,L圍I,L圍I.S;加2袖3如4Sh发辭巧间(k)图17不同菌种组合对精氯酸含里的影响Fi.heffecfdiffeiitig17TetorentstrancombnaononcontentofA氏G"0.20IF=°'。8诚池曲濟。试验:结?:j国国;国画"IIJ.I.,..ijJIJ.il她24h3化4化发靡时间(10图18不同菌种组合对蛋氨酸含》的影响Fi.htiffiiigI8TeeffecofderentstrancombnatononcontentofMET1.0rAAAAABB争辛回識;c齡跑曲曲■Ir謂国s.權h画试扯巧T.齡績tlWI1IIjI__iI0rI00丘2地3化4化发辭巧间(h)图19不同菌种沮合对赖氨酸含量的影响Fi.9Theeffectofdifferensticombinationoncon1trantentofLYSgI 翻料工艺及不同菌种姐爸对复合菌固态发醇活性物质含量的影响^16r.^曲AAAA累AJbXJ_召丄.,.!5!AA心A曲沁?-4.!iii^TI?懲贿組片涵T國'圓圍?13獲国国圍IbHII)^9I12-她24i3化4化恭爵巧间(右)图2日不同菌种组合巧总氮基酸含呈的影响F.tig20Theeffectofdifferentstraincombinationonconentoftotalaminoacids2.2.2.3有机酸含量测定结果?由表112和图21图25可[^?看出,各组的有机酸含量均随着发酵时间的延长而逐渐上升,酒石酸含量在36h和48h时试验2组显著高于试验1组和对照组(戶<0.05);且试验1组显著高于对照组(P<0.05)。在24h和48h时,试验2组的苹果酸含量梓樣酸含量均显著高于试验1组和对照<0組(P.05)。號巧酸含量在24h、36h和48h时试验2组显著优于试验1组和对照组(尸<0.05)。8h的发酵1经过4,对照组、试验组和试验2组的总有机酸含量与发酵前相比分别提高了318.92%、420.15%和474.99%;且试验2组较试验1组提高了12.14%。除Oh外个试验组的总有机酸含量均,其它各时间点两显著高于对照组(P<0.05),并且试验2组也显著高于试验1组(P<0.05)。表12不同菌种组合对有机酸含垣的影响(/ml)ngTable12Theeffectofdifferentstraincombinationoncontentoforganicacids^i/ml(g)组别有机酸时间(h)对照组试验1组试验2組—*4+^'*+^*'20.451.69200.78019.38+0.08.40?*。^+'=++'=2441.351.6055.081.1658.111.24酒石酸Cb+刖+*63655.78±0.6663.811.0769.140.54。+°"+^"4863.22+0.0585.770.85119.381.03—^*。*。+**++094.83.08993.712.0695.721.65。?'=*。+.168苹果酸24143.21±1.20155330.74.10±0.37+?''+^'*+^**36192.564.36230.484.44236.761.82 内蒙古农业大学硕±学位论文^+。+?^+^"483615.2.4.954422.4085563.578.95+Ad^'*^"++1054.5.17.7305?55.611.2969.1。?=^'=2491.15+1.3199.80+1.25127.54+1.68巧樣酸刖?'*636285.27+7.95303.95+5.24374.71±8.617*^^+°^^^480354±9392.014.93".了12.10j^_弓主—£—5—+AC+*4Ad0I6.O8I.3316.701.066.86±0.571Cb?*=^=2421.00±0.7543.75+2.0053.50+1.21規巧酸。刖^**71+1.6362+76+3643.34229631....14+^^++^"S46.291.3269.741.189.691.32_—J_—Ad^^^'*0185.02±0.%186.47+1.98189.17+086.。?'=^"24296.71+4.86343.95±0.33407.25+3.76总有机酸[6?*'^'^36577.31±10.02660.57+10.91917.24+12.13*°°^^°+^+4775.0910.96969.9213.761087.7+231.40^401A「?■:120古-1抑言.?因对晤組^阴.fAACt■试捡1组J的-慶tiT哺。试按翊1|1片r2-識.L画.iJ.圍.^Oh2地36h4化发酵时间(h)图21不同菌种组合对酒石酸含量的影响F.tig21Theeffectofdifferentstraincombinationoncontenoftartaricacid 翻料工芝及不同菌种组爸对复合菌固态发辭活性物质含量的影响^600-1ABAAA.l◎目C对照组还cJif]了了届91-j4-■ry话栓视丄三。。.;口離翊I…心醒圓,赫^M,,01I謹IOh2地3化4化发醇巧间化)图22不同菌种组合对梓樣酸含量的影响F.ig22Theeffectofdifferentstraincombinationoncontentofcitricacid6■00?B500:j柳'嘿1组.3。。■试检独B?rBA心国峭授翊SiffIILsigMHIII■0Oi2化-3化4站l发齡巧间(h)图23不同菌种组合对苹果酸含量的影响Fi.23Theeffectofdifferentstraincombinationoncontentofmalicacidgr120A二90.AgI◎湘强IA章厂h三-60-BTCUcm?没捡翊|-3D籌1Ua[1IW,翊I,LII,HII‘。化2化3化4化菌巧间化),发图24不同窗种组合对規巧酸含量的影响F.reig24Theeffectofdiffentstraincombinationoncontentofsuccinicacid 内蒙古农业大学硕女学位论文^15脚「屢-l!AJj.B9〇GB对照巧:rfM]S■试验I组農600-AWm□试捡:组崔.也■圓,L01团丄I■I,I纖J,Oh24h36h4Sh发酵时间化)图25不同菌种组合对总有机酸含量的影响Fig.25Theeffectofdifferentstraincombinationoncontentoftotalorganicacid-2.2.2.4目葡聚糖及甘露聚糖的含量测定结果?267可W看出-由表13和图图2,对照组、试验1组和试验2组的P葡聚糖和甘露聚糖含量均随着发酵时间的延长呈现不同程度的增加;在整-个试验期,试验组的P葡聚糖和甘露聚糖含量盈著高于对照组(户<0.05);36h和48h时-5,试验2缉的葡聚糖含量显著高于试验1组(P<0.0)P;48h时试验2组的甘露聚糖含量显著高于试验1组(尸<0.05);经过48h-的发醇,对照组、试验23葡聚糖含量较发酵前分别提高1组和试验组的(了19.2688,甘露聚糖含量分别提高了11%、22.%和27.69%.38%、27.62%-和44.72%;且试验2组的P葡聚糖、甘露聚糖含量较试验1组分别提高了〇9.46/〇和20.11%。表-13不同菌种沮合对日、甘露聚糖含量的影响/100m葡緊糖(mgg)abefffe-Tti/l13Theeectofdifrenstraincombinationonpghcanandmannan(inglOOmg)巧别—多糖时间(h)试验’訊2对照妍'试验纽.■扫*^*^"±^'^2720±8.79151,±147915.41101.33.92.23Bbc^"*624137.30±4.4716314.1.±14.5.67±9380840-葡聚糖P(ah'^'*扣36U4.47±31....686966±1209195'57±877'[3?"*348151.70±3.77185.96±18.95203.56±3.37Bc*8:&^170057.9±14.24.60±2.2974.78±].7581’Ae版1..75.±i8.'424608±77]30.35103±21甘露聚糖B^'a^3663.66±2.0〇82.30±1.9989.27±8.91。1Ba^"4863.±4.±.7化0.1790.1006108.22434 ^翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发醇活性物质含量的影响2巧'fifiifli,化WOhh巧h;友酵时间UiJ图26不同菌种巧合巧P-葡累糖含量的影日向F.The-i呂26effectofdifferentstratononcontincombinaientofpglucan130r争?f.100.AAt。对照巧Iii'^妨■觀店目'40;提謂'■!画堪。巧检:进r:UiiUillUii她24h36h4化复爵帥巧h()图27不同菌种组合对甘露聚糖含量的影响F.rig27Theeffectofdifferentstaincombinationonconentofmannant2.2.2.5固态发睹料体外消化率测定结果由表14和图28可W看出,试验2组的干物质体外消化率(IVDMD)、粗蛋白质体外消化率(IVCPD)、中性洗緣纤维体外消化率(IVNDFD)和酸性洗涂纤维体外消化率(IVADFD)均显著高于对照组和试验1组(尸<05)VCPD、IVNDFD.0除IVDMD,1VADFD;外和I试验1组均湿著高于对照组(P〉0.05);试验2组的IVDMD、IVCPD、IVNDFDIVADFD和〇分别比试验1组提高了4.28%、1.10%、11.45%和7407〇。./ 4内蒙古农业大学硕±学位论文^表14固态发酵料体外消化率测定结果(%)Table14Theresultsofinvitrodiestibilitofsolidstatefermentationfeed(%)gy组别DMCPNDFADF"。"b++77.27+.4417.24.12+3.87661.080.202对照組.0334^*^b+''++485.66114.1.1.72.2832093.43试验.3±.2798091组。。+。。20.69.9754.331.6155.86+3.27统.9±18±0试验.686.53''—‘>*':'^|;〇楚异^巧(P..〇5)小1词小^7巧巧]注:岡列府巧含将相|]小与字巧表非差异不扣省(尸;<0.05)。1奶「b-W-r1-SS4。-f|^a心sII国''-'"s2。?国、画1tf!'..11圍I画11圍.II誦I,0DMCPNDFADF琶界粒時圍28不同菌种组合对固态发薛料体外消化率的影响-ednv引airoFtatononSolidtefermentationfeitig.28Theeffecofdifferentstraincombmidtigesibility2.2.3讨论2.2.3.1不同菌种组合对固态发酵料中营养活性物质含量的影响酵母菌细胞除含有丰富氨基酸、蛋白质及微量元素外,其细胞壁还含有多种营养活性物质,被机体消化吸收,具有增强动物机体免疫反应的作レ可,减轻环用,不仅ッ提高瘤胃微生物活性。酵母菌添加剂饲喂反与动物…还可改善瘤胃的发酵形式f,促进槪巧发酵境应激对家畜造成的危害,""。然而酵母菌在发酵过程中缺乏产生足量淀粉酶和纤维索鹏的能力,不能将鼓皮,因此加入商产淀粉酶巧性的枯、玉米粉等高淀粉物质充分降解草芽抱杆菌,不仪为赔巧巧的,可W将淀粉大分子物质降解为小分子物质充分发酵提供营养底物,也可提高发酵产物的消化率。混合閒种发鹏姐利用了不巧菌种间的互补作用,它们相瓦竞争化巧巧间,可W提高对底物巧 翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发酵活性物质含量的影响^?12"著提高饲料的营养价值。本试验结果表明试验2组的各营养活性物质含量显著高于试验I组。这是因为利用高产淀粉酶活性的枯草芽抱杆菌辅助酿酒酵母菌进行复合发醇,不仅为酵母菌的充分发薛提供了更丰富的营养底物,且枯草芽抱杆菌为好氧菌,在发酵过程中消耗氧气为酵母菌创造厌氧环境,使酵母菌代谢能力加强。2.2.2.3固态发酵料中植物细胞壁多糖与酵母菌细胎壁多糖的营养作用谷物细胞壁的主要组成成分为非淀粉多糖(NSP),是植物组织中除>淀粉1^1外所有碳水化合物的总称,包括果胶多糖、纤维素和非纤维多糖等。款皮中含有较多的碳水化合物,其质量分数在50%左右,主要为细胞壁多-----l4糖,3D,有时又称非淀粉多糖它主要由戊聚糖、P0,)葡聚糖组成1IW。另外,还含有少量的葡萄甘露糖、纤维糖等大量的研究表明,谷物等植物性原料中的非淀粉多糖难W被动物降解利用,并且NSP能使消化道食糜粘度增加,降低胃肠道运动,影响消化酶与底物的有效接触,导致--日粮养分消化率和饲养效果降低而来源于酵母细胞壁中的e13,(-16葡聚糖和甘露聚糖的营养作用不同于植物细胞壁中的非淀粉多糖)甘露聚糖能增加动物体液免疫和细胞免疫能力,改善动物消化道的菌群结构,也能起到维护动物肠道微生态平衡的作用,改善多种消化系统疾病。-e葡聚糖则具有良好的免疫调节活性,具有增强动物机体对病毒、细菌及寄生虫的感染与肿瘤的抵抗力,同时还具有降低血液中的胆固醇、抗肿瘤和抗氧化等功效对照组中葡聚糖和甘露聚糖含量均来自于鼓皮、玉米皮等谷物细胞壁,h时-本试验在0,2个试验组的目葡聚糖和甘露聚糖含量均显著高于对照组,是由于起始时2个试验组添加了酿酒酵母菌,而酵母菌细胞壁中含有-葡聚糖和甘露聚糖丰富的目。随着发酵时间的延长,酿酒酵母菌大量繁殖,从而导致固态发酵料中多糖含量不断上升。而对照组多糖的增加主要与款皮等谷物中天然带有酵母菌有关,随着发酵过程进行送些天然酵母菌的数量也会增加,从而导致对照组的多糖也出现不同程度的增多。2.2.3.3不同菌种组合对固态发轉料营养物质体外消化率的影响从本试验结果可,试验1组的营养物质消化率高于对照组,这1^看出是由于试验1姐加入的酵母菌中含有多种酶和激素等活性物质,能够增强消化道微生物的消化能力,促进动物机体对营养物质的吸收、消化和利用,?2提高生产率,可使得饲料的利用价值提高15%而试验组 内蒙古衣业大学硕±学位论文^的营养物质消化率又显著高于试验1姐,这是因为试验2组添加的巧草芽,使发酵环境温度上升抱杆菌会消耗氧气而产生热量,饲料的组织细胞就""1会因为温度的升高而发生破裂,从而降低饲料的硬度。同时枯草芽抱杆茵可W自身合成蛋白酶、纤维素酶等酶类,使发醇饲料的组织软化,饲料中可溶性部分含量増加,大分子物质被分解为小分子物质,提高I瘤胃微生物对发酵饲料的分解速度。2.2.4结论①W酿酒酵母茵和枯草芽拖杆菌A15进行3菌株固态发酵,其产物中、总有机酸-、多狀、总氨基酸、e葡聚糖甘露聚糖5种营养活性物质含量均高于2株酵母菌(BC、X民4)的发酵。②在固恣发薛中添加枯草芽抱杆菌协同酿酒酵母菌进行发酵,可显著提高饲料营养物质的体外消化率。2.3复合菌培养物作用效果与日粮结构间的关联性2.3.1材料与芳法I2.3.1.1复合菌培养物’lt"根据课题姐前期试验结果确定的固态发酵培养基配方,将活化的酿酒酵母菌(BC、XR4),按1:1比例,8%的添加量接种到固态发酵培养基’C中,含水量为45%,30恒温培养48h。2.3.1.2主要试剂同2.1.3。.22.3.1.3主要仪器设备ThermoScientific生物安全柜;原产地德国Sartorius精密电子分析天平:德国赛多利斯公司生产-450Varian气相色谱仪GC:原产地德国T6系列紫外可见分光光度计:产家为北京普析通用仪器有限责任公司HPS-160恒温生化培养箱!哈尔滨市东联电子技术开发有限公司生产S-、igma216pk高速低温冷冻离屯机:SIGMA公司生产2.3.1.4试验设计x一本试验采用体外批次26试验设计,第因素为培养底物的精粗比, ^翻料工老及不同菌种组合对复合菌固态发酵活性物质含it的影响设5:5和6:4两个水平,试验日粮参照中国奶牛饲养标准(2004)进巧配。二因0%、制,其组成及营养水平见表15第素为酵母培养物的的添加量,设10%、15%、20%、25%和30%6个水平并分别等量代替两个培养底物中的。精料部分,且发酵底物保持0.2000g不变,粉碎过40目筛各用对照组只一組不加培养底物的空白对照组3添加基础日粮,同时设置,每个水平个重复。进行Oh、3h、6h、9h、12h和24h的体外批次培养,测定pH值、-N浓度氨态氮(NHs、挥发性脂肪酸(VFA)含量和菌体蛋白质巧CP含量。))表15试验日粮组成及营养水平(风干基础)Tab-)le15Compositionandnutrientlevelsoftheexperimentaldiets(airdrybasis精粗比原料5564::首清干草(%)50.0040.00玉米(%)29.4929.49款皮(%)4.9714.90〇豆化(/〇)6.195.09棉化%7.909.26()46040雜酸氧巧(%)0..〇食盐/〇0.460.46()-0预混料添加剂(%).530.40合计100.00100.00言S而DM(%)87.5087.70CP%16.1016.30()NEL(Mcal化1.381.42g)NDF%36.853529().ADF%26.7026.57()Ca(%)0.860.98P%0.580.57()注:每千克预混料包括:维生素A240000lU/kgi维生素D60000lU/kg,维生素E1200lU/kg,—铺2.OOg/kg,巧118g/kg,待2.85g/kg,碟20g/kg,倭20.5g/kg,钢203g/kg,铁2.OOgAg,硫2.00g/kg,铜1.20g/kg,钻llg/kg,涵lOg/kg巧抗氧化剂1.20g/kg,2.3.1.5体外培养操作(1)体外批次培养装置 内蒙古衣业大学硕dr学位论义47_体外批次培养装置澳大利亚生产的恒温水浴摇床为主,其振荡频率和水浴温度均可调节。培养瓶为lOOmL的医用玻璃注射器,针头上端安装有橡胶管,橡胶管连接塑料H通阀,三通阀在试验过程中处于关用状态,从而保证严格的厌氧环境。注射器在每次使用之前均需洗净凉干塞,在活筒的四周涂抹少量液体石蜡防漏气,还可减少气体产生时活塞向上移动的阻力。(2)缓冲液配制.nChaCl.4H.微量元素液:称取C22札〇13.2g,M20lOOg,CoCl26HOl?2.OFCl6HO8.0g,es2g用蒸溜水溶解,定容至lOOmL。缓冲溶液:称取NaHC〇335.0,NH4HC〇34.0用蒸饱水溶解gg,冷却,并定容至lOOOmL。?常量元素溶液:称取Na2HP〇45.7g,KH2P〇46.2g,MgS〇47H2〇〇.6g■用蒸馈水溶解并定容至lOOOmL。刃天青溶液:用蒸溜水溶解lOOm刃天青g,冷却,并定容至lOOmL。还原液;在培养的当天配制。(3)瘤胃液的采集与体外培养选择3头体况良好/体重相近,安装有永久性瘤胃瘦管的荷斯坦奶牛,用于瘤胃液的采集。晨饲前2h,通过瘤胃瘦管采集瘤胃内容物,混合后装入保温瓶内,迅速带回实验室,在缓慢通入C化条件下,用四层纱布过滤收集瘤胃液,滤’CC液收集到预热达39并通有化的烧杯中。准确称取饲料样品0.2000g,置于玻璃注射器的前端。每个样品称取3个平行样3。,,每批培养有个空白(没有饲料样品)称完所有的样品后用凡±林涂抹注射器孩杆,用来减少摩擦和防止漏气。通过塑料H通阀将30mL培养液(瘤胃液与人工瘤胃培养液的混合物,体巧比为1:2)分装到注射器中,将气泡推出,关闭H通阀口。记录初始刻度后,把注射器放入’39C的恒温水浴摇床中培养。2.3.1.6体外培养操作-N测定在不同培养时间点的产气量、培养液中pH值、氨态氮(NH3)、挥发性脂肪酸。(VFA)浓度和菌体蛋白(BCP)含量2.3.1.7栓测指标及测定方法2.3.1.7.1样品预处理 ^翻稱工3及不同菌种组合对复合菌固态发醇活性物质含里的影响培养结束后,用4层纱布过滤培养液并直接测定pH值,然后将滤液4〇0(kpm,离也lOmin,取4mL上清液加入装有lmL25%偏磯酸的西林瓶中用于测定VFA-,取2mL上清液加入西林瓶中用于测定NH3N浓度,剩’BCP-20C。。30余培养液用于测定含量,保存备用样品预处理流程见图<培养液,4层纱布过滤4000rpm?lOminLJ*25%偏磯酸r1上清液^^^古i112000-irpn],lOminHNHNp值3浓度,,VFAIurnII0.85%生理盐水洗緣2次,12000irpm,lOmin,T细菌物质考马斯亮蓝法IwBCP浓度困29祥品预处理Fi.29Theretreatmentofsamlesgpp2.3.1.7.2产气量的测定由于前期产气较多一,需每隔半小时左右记录次注射器的产气量,记录一完成后要放气使注射器回到起始刻度,等下次记录完毕后,还需返回到一3起始刻度点。后期记录的时间间隔稍长些,可减少试验误差。分别把、6、9、12和24h内的产气量累加起来,即分别为各时间点的产气量。2.3.1.73H.p值采用Hs-3c型高精度酸度计测定各发酵时间点的培养液pHp。2.3.1.7.4VFA的测定 内蒙古巧业大学硕±学位论女^本试验使用内标法测定发酵液VFA含量,内标物为己豆酸,测定方法-参照秦为琳等(1982)的方法进行,使用日本岛津GC2014气相色谱仪测定古酸、丙酸、T酸及TVFA含量。W"(1)所用试剂及标准曲线的制作方法参照赵培厅(2011),乙酸标2==准曲线如图30,回归方程为y14.346x+0.3141(R0.9999);丙酸标准曲2==3-线如图1,回归方程为y13.615x0.6326(民0.9980);了酿标准曲线如2==图32-,回归方程为726.077乂1.2862(110.9976)。100广=+y14.346X0.3141-280=r0.99996。-i140-'^III,Q0I[f01234567浓度(mgtol)图30。巧标准曲线?.Fiheta打darrvefordeitnofacetcacg.30Tsdcu化rmnaioiidconcentration50「-=-40y13.615X0乂3262民=9980.30.一^2。-I10-^IIIII*Q10.511.522.5343.510浓度mgto^(图31丙巧标准曲线Fi.3】Thes化ndardcurvefordeterminationofroionicacidconcen化adongpp ^翻料工蓉及不同菌种纪合对复合菌固态发酷活性物质含是的影响100广-二-80..y26077X128622民=0.997660---I2。Q_L———I.P—^―—――J?—Ji—^―—■—^―—.—J0.51225.1.5,335_2〇4浓度(m@^m〇!围32下酸标准曲线Fi.32TheS化ndardcurveforde化rmginationofbutyricacidconcentration(2)样品前处理取发酵液4mL加入含有ImL25%偏麟酸的西林瓶中,混匀;准确称取2=g酸性吸附剂(无水Na2S〇4:50%H2S〇4:活藻±[W/V]30:1:20)加入lOmL离也管中,然后分别加入ImL混合好的发酵液和4mL己豆酸溶液'(3L25l化、mi凸mmo,溶剂为CH3CI3),充分震荡摇匀,400(kpm离Il10,liL上清液上机测定。色谱条件吸取1:色谱柱为2m不诱钢填充柱,内填|10%FFAP+mosorbGAWDMCS60-1%磯酸涂于chro80目担体上;汽化室温‘’230CCC度为,柱箱温度为150240,,25,检测器温度为载气为氮气mL/min,检测器为氨火焰离子化检测器FID。2-.3.1.7.5NH3N测定4""-N浓(采用比色法测定N化度,测定方法参照冯宗慈1993)的方法进行。(1)试剂的配制①0.2l8mL浓HCmo化盐酸溶液:将11用蒸溜水稀释后定容到lOOOmL。②14%水杨酸钢溶液:称取140g水杨酸钢,用蒸馈水溶解,定容到lOOOmLo⑤0.3mol化氨氧化钢溶液:12g氨氧化钢用蒸饱水溶解并定容到lOOOmLoA:液称取0.8g亚硝基铁氯化巧溶解于1000mL14%水杨酸钢溶液中。—B液;量取20mL次氯酸钢溶液混于lOOOmL0.3mol化氨氧化纳溶液中。(2)标准曲线的制作①称量0.3820g氯化钱,用0.2mol化盐酸溶解后定容到lOOmL,作为保护液。 内蒙古农业大学硕±学位论女^②取保护液lOmL,用蒸饱水稀释后定容至lOOmL,为工作液,含氮量为lOmgnOOmL。③取5个50mL容量瓶,按表16添加量进行添加,然后用0.2mol/L盐酸溶液定容至刻度,制作标准液。表-16NH3N标准巧的配制Tabf-le16PrearationoNHNstandardsolutionp312345工作液mL0.01.02.04.06.0蒸溜水mL10.09.08.06.04.0含氮量(mg^OOmL)0.00001.2^^^2==33归方程为-④标准曲线如图,回y1.1738x0.0096(r0.9981)。1.4厂=38x?0.00%l.HyJ22良=0.9981少A-〇0.80-I.6巧0.2-0.0.40.6..24020.8112ODfi图33结态巧标准曲线-Fi.33ThestandardcurvefordeterminatNHconcenigionof3Ntraton(3)样品测定量取0.8mL待测液置于lOmL试管内,依次加入A液4mL和B液4mL,摇匀,静置lOmin后,用721型分光光度计在700nm处进行比色,用不含氮的1-N含量号管液作空白对照,然后根据回归方程,求出发酵液中的NH3。2.3.1.7.6BCP的测定采用考马斯亮蓝比色法测定BCP浓度。(1)溶液的配制 K翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发薛活性物质含量的影响--①O.lg/L考马斯亮蓝G250试剂;取lOmg考马斯亮藍G250溶于5mL浓度为95%的己醇中,溶解后加10mL85%的磯酸溶液,再用H蒸水定容至lOOmL。②标准蛋白溶液:将lOmg牛血清白蛋白(BSA)溶lOOmL,0.15mol/LNaCl中,配成O.lmg/mL的标准蛋白溶液。⑤2m〇yLNaOH;准确称取SgNaOH溶解于80mL蒸饱水中,定容至lOOmL。0。④.833mol化的盐酸:吸取8.35mL盐酸加入到91.65蒸馈水中(U5l;取8.775NaCr溶于50mL去离子⑤m〇yLNaCg水中,定容至lOOmLo(2)标淮曲线的制作①取11支1.5mL无菌离也管按表17添加量进行添加,然后各管中加ImL考马斯亮蓝试剂,静置15min后,用紫外可见分光光度计于595nm处进行比色。表17BCP标准巧的配制Tabidaliole17PreparatonofBCPs化nrdsoutn1234567891011标准虽白溶液(il)0102030405060708090100f'O.lSmol化NaCl(^1)10090807060504030201002==?-。②标准曲线如图34,回归方程为y884.S6x3.741(r〇.9928)■120=-884.96X3.741y■2100氏-0.992880-I60-I20-S^1111011...2040.020.040060.08010.12OD值困34菌体蛋白标准曲线Fi34ThestandardcurvefordeterminationofBCPcontentg. 内蒙古农业大学硕±学位论文^(3)样品测定°①将备用的上清液解冻后,取lOmL于4C12000巧m离也lOmin,’弃去上清液后,用0.85%的生理盐水冲洗沉淀,再4C12000rpm离也lOmin,重复两次。②加2mL蒸溜水使其与沉淀混匀,取1ml放入1.5mL离如管中,加°0.5mL2mol/LNaOH,95C水浴lOmin,1OOOOr/mi打离也5min。③取离也上清液0.5mL与O.^mL0.833mol/L的HCl溶液混合后摇-Km匀,然后再取O.lmL与ImL考马斯亮蓝G250试剂混匀,静置in,用紫外可见分光光度计于595nm处进行比色,然后根据回归方程,求出BCP含量。2.3.1.8数据处理与分析。同2.1.1.82.3.2结果2.3.2.1不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对产气量的影响由表18可W看出,随培养时间的延长,两种日粮的产气量均逐渐巧离。5:5日粮在化时,添加量为25%和30%组的产气量显著高于0%沮(尸<0.05),6h时,添加量为20%、25%和30%组的产气量显著高于0%组(戶<0.05),9h、12h和24h时,添加量为20%、25%和30%组的产气量显著离于0%、10%和15%组(戶<0.05)。6:4日粮在化和化时,不同复合菌培养物添加量对产气量没有显著影响,9h时,添加量为15%组的产气量显著高于0%组(戶<0.05),12h和24h时,添加量为10%、15%、25%和30%组的产气量显著高于0%组(F<0.05)。6.:4组的6个添加量及不同时间点的整体产气量平均值为3397,5:5组为31.48,且6:4组显著高于5:5组(戶<0.05)。就各添加量的不同时间点的产气量平均值么间进行比较,在日粮为5:5条件下,添加量为25%组的产气量最高;在日粮为6:4条件下,添加量为15%组的产气量最高。 M翻料工芭及不同菌种组合对复合菌固态发酵活性物质含量的影响表18日巧巧粗比及复爸菌巧养物巧加水平对产气量的影响(ml)Tab--le18Theeffectofdietarconcentrate化foraratiosandthelevelsofcomoundbacteriaygepcultureonasroduction(ml)gp项目添加量SEM戶值〇时间(h)精粗化0/〇10%15%20%25%30%BbABa*83AB3**^"1920607415:517.0〇19.0〇.6619.661.0020.33.5.03Aaa。^****,^*'6:422.0〇20.0〇21.6620.0019.8320.500.380.172:8a*化*83*3*,*,5:523.6725.8325.1728.222728.170.770.049:.83*,as*3*>*,^?0‘6:427.6726.5〇28.8327.3327.1727.50.310.624C3BCaBCa434aAa5:527.6730.673〇.i733.3434.3434.〇〇!〇?〇.〇i〇:9BaABaA*A化*83*836:432.5〇34.8435.8433.6735.1734.84〇49〇.247:cabc,BCb*。^"**5:530.0〇34.5〇32.5〇37.3437.17巧.001.230.014:12BaAa^"^?**。乂》016:434.5〇39.0〇39.1737.1738.8438.84.750.056CaBb?"*3*3^*5:540.3444.0〇42.6747.8447.8447.501.300.006:24?"a,*,*83*3Aa4-6444..51.50.109〇.〇〇8:50505〇50.347.845i〇〇8aABaABa^*A’Aa3〇i5:527.73.8〇30〇3332833.6333.4〇0.97o.oil平均*,*3*’***’*30i6:432.2334.1735.1733.2034.5034.53.440.271一一注;同行肩注大写字母表示同巧粗比不同添加量间的比较添加量i同列肩注小写字母表示同不同精粗比间的比较。肩注含有相同字母表巧差异不显著<P>0.05),含有不同字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。2.3.2.2不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对培养液pH值的影响由表19可W看出,随着培养时间的延长,pH值逐渐下降。5:5日粮在Oh和3h时,添加量为25%和30%组的pH值显著低于其他各组,6h时,添加量为15%的pH值略低于其他各组,9h时,添加量为10%的pH值显<0.05)著低于其他各沮(戶,^%和20%组的pH值湿著窩于其他各组<(戶0.05),1化和24h时,不同复合菌培养物添加量对pH值没有湿著影响。6:4日粮在Oh、9h和12h时,不同复合茜培养物添加量对H值没有p显著影响,3h时,添加量为10%组的H值远著高于其他各组(戶<0.05),p’6h时,添加量为0%和10%组的pH值显著低于其他各组(P<0.05),24h时,添加量为30%组的pH值显著低于其他各组(P<0.05)。曰粮精粗比及复合菌培养物添加量对各时间点的平均pH值没有显著 内蒙古农业大学硕±学位论文5^影响。表19日巧巧粗比及复合菌巧养物添加水平对pH值的巧响Tab--le19TheeffectofdietaryconcentratetoforageratiosandthelevelsofcompoundbacteriacultureonHp项目添加量SEM戶值才间(h)精粗比0%10%15%20%25%30%?**83^"^"。仁。5:56.826.846.866.866.786.780.02<0.00010^?Aa^=^"、,^?66.846.8〇6.816.866.79:46.870.010.43818aAbAB3?**^?*?^5:56.746.8〇6.776.746.696.690.020.004738a*3BC3〔。^?*^*6:46.776.866.756.706.696.690.030.0005*3*83Ba^"***65:56.736.725gy6.766.756.75〇.〇i0.0570B。GbAa*3*36:46.696.676.7l6.726.75^〇〇!0.0419??Ca*,^"?"?*5:56.606.556.696.686.616.630.02<0.00019AaA3乂>^**a?^?6:46.576.576.616.626.巧6.600.000.3620^*43A3^?^?^"5:56.476.436.456.436.456.460.010.486912AaAaASAaAa*36:46.436."6.446.426.456.440010.5341*81Bb*:*83*8:*。56l^36634-:56.33.3.6356.36〇.〇l0.111624*,,Aa***。*。刖6:46.396.46.386.386.356.270.020.0301Aa*3*3**^**35:56.6l6.616.636.636.606.61〇0.4376平均AaA3^"^?^*^*6:46.626.626.626.626.606.610.000.64382.3.2.3不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对培养液VFA浓度的影响(1)不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对培养液TVFA浓度的影响由表20可W看出,随培养时间的延长,两种日粮的TVFA浓度均逐渐升高。5:5日Oh、3h和24h粮在时,不同复合菌培养物添加量对TVFA浓度没有显著影响(戶<0.05),化时,添加量为30%组的TVFA浓度显著高于15%和20%组(尸<0.05),9h时,添加量为30%组的TVFA浓度显著高于20%组(P<0.05),12h时,添加量为25%组的TVFA浓度显著高于0%、〇<10/〇、15%和20%组(f0.05)。6:4日粮在Oh、3h、化和9h时,不同复合茜培养物添加量对TVFA浓度没有显著影响,5%30%,12h时添加量为10%、2和姐的TVFA浓度显0%和15%组(P<0.05)24h著高于,时,添加量为20%组的TVFA浓度显 ^翻料工s及不同菌种组合对复合菌固态发醉活性物质含蛋的影响<0。著高于其他各组(F.05)6:4组的6个添加量及不同时间点的整体TVFA浓度平均值为25.55,5:5纽为24.00,且6:4姐显著高于5:5組(P<0.05)。就各添加量的不同时间点的TVFA浓度平均值么间进行比较,在日粮为5:5条件下,添加量为25%组的TVFA浓度最高:在日粮为6:4条件下,添加量为25%组的TVFA浓度最高。表20日巧巧粗比及复合菌培养物添加水平对TVFA浓度的巧响(mmol/L)Tabo-o-le20TheeffectfdietaryconcentratetforaeratiosandthelevelsofcomoundbacteriagpcultureonTVFAconcentration(mmoI/L)项目添加量TVFASEMf值时间(h)精粗比0%10%15%20%25%30%Aa*3*3^"*。^"5:52.482.322.292.302.592.530.050.994*3A3^"^?*?^?63.322.923.032.532.672.0772:478.110.*。乂。*。^**。*。5:518.0812.7818.9312.2813.0818.781.280.1593*3*3乂3*。*。*36:415.8914.56!6.1113.6414.0217.120.550.856*83*83?"?*^?***5524.8423.1321.5121.8122.5232231650199:...*3Aa*,^?*。*。6:421.2918.9〇20.5622.5120.4922.170.530.723ABa*83ABa?**8,*。..625:526.3〇30.6326.2〇22.2935736.64.330.1639*3Aa*,*,*。*,6:425.2827.3〇25.1227.4132.9232.631.430.4528a8a?*?*^?^?*.25:532.82352232.5430.64480337.08.560.06512^3ABa*a803A3^b^86:429.0235gg30.42319539gg5361.6400023.*3Aa*3^?*3*35:541.2943.Ol"4844.8752.4344.591.570.56024(3Ba?**。刖?"6:435.6842.4〇42.6648.7244.8442.931.750.002ABa*83*83?****。5:524.3〇24.5224.3321.4729.0628.631.090.034平均?"*83*83*8,*,*?6:421.7423.6622.9924.4725.8025.460.630.078(2)不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对培养液乙、丙、T酸巧度及乙丙比的影响?由表21^Oh、3h、9h表24可1^1看出,5:5日粮在、124和24h时,不>同复合菌培养物添加量对乙酸浓度没有显著影响(f0.05)。6:4日粮在Oh、3h巧9h时,不同复合菌培养物添加量对乙酸浓度没有显著影响(戶>0.05)。6::4组的6个添加量及不同时间点的整体芭酸浓度平均值为14.05,55 内蒙古农业大学硕±学位:论文Sl_"组为11.61,且6:4组显著高于5:5组(i<0.05)。就各添加量的不同时间点的乙酸浓度平均值之间进行比较,在日粮为5:5条件下,添加量为30%姐的乙酸浓度最高:45%;在日粮为6条件下,添加量为2组的己酸浓度最局。5:5h、3h和化时日粮在O,不同复合茜培养物添加量对丙酸浓度没有>0显著影响(尸.05)。9h和12h时,添加量为25%组的丙酸浓度显著高于其他各组(尸<0.05),24h时,添加量为25%和30%组的丙酸浓度显著高于其他各组(戶<0.05)。6:4日粮在Oh、3h、6h、州和12h时,不同复合菌培养物添加量对丙酸浓度没有蟲著影响(P>0.05)。6:4组的6个添加量及不同时间点的整体丙酸浓度平均值为9.22,5:5组为7.95,且6:4组显著高于5:5组(尸<0.05)。就各添加量的不同时间点的丙酸浓度平均值之间进行比较,在日粮为5:5条件下,添加量为25%姐的丙酸浓度最髙;在日粮为6:4条件下,添加量为20%组的丙酸浓度最。局.两种精粗比在化时,不同复合菌培养物添加量对下酸浓度没有显著影响(户>0.05)。6:4组在不同复合菌培养物添加量及不同时间点的整体T酸'<浓度平均值为3.19,5:5组为2.94,且6:4沮显著高于5:5组(P0.05)。就各添加量的不同时间点的了酸浓度平均值之间进行比较,在日粮为5:5条件下,添加量为25%组的下酸浓度最高;在日粮为6:4条件下,添加量为20%组的了酸浓度最髙。6:4组的6个添加量及不同时间点的整体乙丙比平均值为2.11,5:5组为1.39,且6:4组显著高于5:5姐(f<0.05)。就各添加量的不同时间点,在日粮为5:5条件下5%组的的己丙比平均值之间进行比较,添加量为2艺丙比最低,添加量为15%姐的乙丙比最低。;在日粮为6:4条件下表21日浪巧粗比及星爸苗巧养物添加水平对乙酸巧度的巧响(mmol/L)-ffect-foTab化化ioslfcombacle21Theetofdieryconcenra化raeratandthelevesooundteriagpcuicidionltureonacetacconcentrat(mmol/L)项目添加量SEMP值〇时间(h)精粗比0/〇10%15%20%25%30%*。*3Aa*3*。*35:51.731.591"124125143〇〇g0.91040*3Aa*3Aa*3*36:41.32149144i.n1231.11〇.〇?0.9238*。*3*3*3^"*。5511.557.4611.397.3066412.041.020.1158:3A*3^^^3""?^?6:48.467.837.318.858.378.540.230.9897 M翻料工3及不同菌种组合对复合菌固态发酵活性物质含童的影响ABaABa?"?"?**。5:516.5〇i5.8212.9110.3114.0322.611.710.025(*86ABaAB38aAa々>'6:410.94n.os1029915i2.2l12.330.490.152*。^"*。*****。5517.3820.3914.6911.4317.9520.651.440.414!:9^"*3^***3*。*>6:411.4212.8411.7811.8115.6115.400.770.749<*。*3^^*。*。*。-^5:519.9720.4917.6816.0724.7619.161.210.57812?"*3刖?"*6*。61':412.5118.8512.3912.20203017.14.490.000,Aa*3^"^?*3''"52.:525.5〇23.8123.437.8525.5621.880.850824<248b*。ABbABb*6^*6:415.5722.1419.77i9.8623.7521.691.150.021:*3Aa4a*3*3^"5:515.44i4.9313.5911.7215.0316.290.570.327f平均^ABS?*^**?*^"*^"^*'6:410.0312.3610.5010.5013.5812.700.590.01表22日巧巧粗比及复合菌培养物添加水平对丙酸巧度的巧响(mmol/L)Tab--le22Theeffectofdietaryconcentratetoforaeratiosandthelevelsofcomoundbacteriagpcultureonroionaidconcentratio(mmol/L)ppteacn项目添加量SEM'值时间(h)精粗比0%10%15%20%25%30%*3Ab43^*^"^*5:50.68o.sg0.730,590.580.750.030.98560乂。*3AaAaAaA,6:41.521.2812i!〇gLog1270.070.8925***。*。乂,^?**4.45:54.123.725.35.45509.350.250.39363-^"AaAa^"^*^^6:45.85S.Oj7.043.475.001.110.630.1525ASAa^?*6*3^?5:55.495.6〇6.007.246.436.820.280.6768、‘*3*3*3^**,6:4IJl5.847.811〇.636.568.530.680.1862°**CDbCDb(6*。?*<e]5:56.04.Sg7.287.9414.3412.881.420.0009^?Aa*3^*^*^?6:410.2811.459.8512.3113.9413.600.690.2560〇,Ca^[,**?*5:58.2310.1210.551〇.6317.1514.501.35<0.0001*3*3Aa^**,*。6:411.59u76i2.8〇14.1715.1914.130.590.3927ca?"?*^**^"5:510.8〇14.3616.6411.1418.9019.041.49<0.000124Ba8a8ba,?'*化6:412.6l12.6415.1720.7〇15.5214.471.210.0024?*Db^'*""*〇>^?<5:55.896.887.767.0110.429.720.720.000]平均?"8a^?*^"^?**^"6:48.268.178.9810.409.559.960.390.0215 内蒙古农业大学硕±学位论义^表23日粮巧粗比及复合茵培养物添加水平对T巧巧度的巧响(mmol/L)Tab--le23Theeffectofdie化ryconcerUratetoforageratiosandthelevelsofcompoundbacteriacultureonbutyricacidconcentration(mmol/L)项目添加量SEMF值时间(h)精粗比0%10%15%20%25%30%CbCa。?"*3835:50.07O.H0.150.370.760.35〇j〇<〇.〇〇〇i*,?"*。*83AbAa6:4080.150.38033ojgg.4.〇i〇〇斗〇〇47〇Aaa。A,Aa*3*35:52.4l1.6〇2.I91.1l1.352.39〇.230.42133ABaABa*:*8*刖A化6:4l.Sg1.7〇1.761.32〇.65〇.8i0.190.1324*8。BaABa*3*8’*8,5:52.85l.7l2.6〇4.262.062.80〇jg〇.2713*。AB。*8,*68^36:42.642.O32.462.731,72〇23〇.〇〇79AS*3*。*。*。*。5:52.883.354232.923.383.11〇.200.89849Aa*3Aa^?*36:43.583.013.4g3.293.370〇q0,9774*83ABa*化刖*3^^5:54.624.6l4.313.946.123,420.37〇.i34612*83*。乂。*。?*^'"〔。6:44.925.255.235.584.374.090.230.0094刖8a?*'*83*,刖5:54.994.844.415.887.973.670.610.020224ABaABa*。*。?*"^?*6:47.5〇6.6^7.728.16S-S?6.770.3800998.*83?"^?"ABb^"?"5:52.972.712.98S.Og3.612.620.140.1337平均*3ABa*3*3刖?^6:43.453.i33513.572.672.800.1500085. 翻料工s及不同菌种组合对复合菌固态发醇活性物质含g的影响^表24日賴巧粗比及复备菌巧养物添加水平对乙酸/丙酸的影响-Tab-le24Theeffectofdietaryconcentratetoforaeratiosandthelevelsofcomoundbacteriagpcultureonaceticacid/roionicacidpp项目添加量SEMP值时间(h)精粗比0%10%15%20%25%30%*3*a*,*,*。*。5:52.942932.042.232.232520.160.9294..0Aaa,*。*,*6*。.06:41361.2〇1.391.531.15.950.080.9825*3*83*83*8*?"*。5:52.812.042.12j621.362.760.240.08513Aa*,^***。^"6:42.0〇1.791.072.801.690.260.4247*3*83ABa?""^?"*。5:53.022.832.2〇1.432.183.710.320.0563ABa*3ABaBaAaABb6:41.7l1.931.4〇〇ggJ9gl_4g〇Q.yjyjAaA。ABa8a88Ba552.9〇2.952.061.431.2316〇]〇〇,〇125:〇9Ab川Ab*。*3^36:4l.M1.19i.2〇0.971141.17〇.〇30.9811Aa*,*。*3*3^"5:52.452.051.681.521451.320.170.276712ABaAa8>?"ABS*836:4l.ni.64〇.97〇.901.341.24oil0.0934Aa?*?**,?*化5:52.4l1.641.412.491.361.150.230.004624*ASABa刖^?*。刖"6:41.251.861.3〇0.981.531.50〇.120.0883AABa3a3?,BCC[?^5:52.752.4l1.92i.791.642.180.170.0036平均A*Ab*6AaAaAb6:4I.441.6〇1.22I341471240060.49992-.32.4NHN巧度的影响.不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对s?由表25可W看出-N浓度均在0,各试验组NH3化有所下降,而后浓度逐渐升高,于发酵12h泣到最大值,后迅速下降。-5:5日粮在体外培养的化和化时,不同YC添加量对培养液的NHsN浓度无显著影响-N浓,6h、9h和12h时,添加量为25%和30%组的NH3<〇0-度思著高于其他各沮(戶.05),2仙时,添加量为25%和30/〇组的NHjN浓度显著髙于0%、15%和20%组(户<0.05)。6:4日粮在体外培养的Oh、3h、化和24h时,不同复合菌培养物添加-N浓度无显著影响量对培养液的NH3,9h时,添加量为25%和30%狙的-<-NHN浓度显(戶0.05),12h时,添加量20%组的NHNj著窩于其他各组为3浓度显著髙于0%、10%和30%组(P<0.05)。64组6NH-N浓2090:的个添加量及不同时间点的整体3度平均值为.,5:5组为20.58,且6:4组显著高于5:5组(尸<0.05)。就各添加量的不同-N浓度平均值之间进行比较时间点的NH3,在日粮为5:5条件下添加量为 内蒙古农业大学硕±学位论文^-%组NH-N浓在日粮为625:4条件下,添加量为15%组NH3N浓3度较高;度较商。-m表25日粮巧粗比及复合菌培养物添加水平对NHiN巧巧的巧响(g/IOOmL)-TThe-able25effectofdietaryconcentratetoforaeratiosandthelevelsofcomoundbacteriagpcuu-reonNHNconcentration(m/1OL)lt3gOm项目添加量SEM户值间(h)精粗比0%10%15%20%25%30%Aa*3^?*343*。5:518.2218.7819.0718.6419.3518.93〇.i60.88390AS*3^?^"^"^?6:419.7719.4920.2019.0720.0619.070.200.9988*,*3*3乂。*。*。5:517.2317.6617.94!8.3618.2217.94〇.l70.69343*3*3*。*。^"**6:417.6616.9519.6318.7818.2216.100.520.8674°"CDaBCa^?'^?^?5:519.2919.7〇20.0520.2020.5220.630.210.0002*3AaAa'^*'*3^*6:419.25i9.|g20.0520.3321.9621.350.460.4264Ea°"?*?"^"^*5:520.2l20.8821.4121.9924.2624.370.72<0.00019。8。BCa^^"*66:420.4421.4521.4620.7122.5022.95〇.400.0092^"°"。?*'*。*,5:524.0725.1525.9326.8728.6928.830.78<0.0001128a8a*83*3*86?**6:424.5724.8525.7126.4525.5325.100.280.0320°?^?°"^??*?"5:517.7322.4417.9019.7520.6320.490.73<0.000124A,*6*。*。*6乂>6:4I8.5318.9220.0219.3417.5317.73〇.390.6133DSBCS^"?***^"5:519.4620.7720.3820.9721.9421.860.38<0.0001平均^"*3*?^"*6*66:420.0420.1421.1820.7820.9620.38〇巧〇39252.3.2.5不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对BCP浓度的影响?由表26可W看出,各试验组和对照组BCP含量除3化有所下降外,24h时BCP。其他时间点均呈现増加的趋势,在的含量达到最大值两种日粮ff粗比条件下,不同复合菌培养物添加量对培养液的BCP含量无显著影响(尸>0.05)。6:4细的6个添加量及不同时间点的整体BCP.<含量平均值为14.01,5:5组为1300,且6:4纽显著高于5:5组(戶0.05)。BCP含量平均值之间进行比较,5就各添加量的不同时间点的在日粮为:5条件下W20%和30%组较高;在日粮为6:4条件下,添加量为10%组较高。 w巧料工艺及不同菌种纽合对复合菌固态发醇活性物质含呈的影响表26日巧请粗比及复合菌培养物添加水平对BCP巧度的巧响(mg/100mL)--Table26TheeffecfillscomoundbacteriatofdietaryconcentratetoorageratosandtheeveofpcultureonBCPconcentration(m/lOOmL)g项目添加量^SEM戶值时间(h)精粗比0%10%15%20%25%30%A,乂。^**。*,*。*5:58.858.558.269.147.968.850.180.979110*3AaA3*3AaAa6:48.559449739739^3_550220.9926Aa*,*3*。*。*3.105:511.8〇10.3210.03123911.21.910.330.6344'3Aa*,*3*3*。6:410.9l13.2712.3913.2712.390.410.6781^"Ab*3*3店‘^>5:510.039.149.449731."9.73〇.3g0.89176Aa^**3*3AaAa6:48.8512.988.26944]〇.〇39^068〇.2483Aa*。*3*3*3Aa5:5U.Og13.5714.4512.9815.3413gg〇450.76019*3Aa^"^?**^"12.6:414.4517.4〇.0912.3912.0912.980.8504697*,Aa*343Aa*。5:514.1617.7〇16.5214.45174〇17.99〇.680.575412*3AaAa*3Aa*36:416.52185g174〇16.22197g20.65〇730.4483AaAS^"^**3*85:516.5218.2918.8821.8318.581947〇?〇〇599524*3Aa*3^"*,*。120.6.6231.2422.4221.83〇.500.9880:48.8851.52*,*,^"*。*。*,5:512.2412.9312.9313.4213.0313.470.180.6206平均AA*aA**3a3*。6:413.03I5.391玉.57i3,3714.4514260.350.53412.2..35不同复合菌培养物添加里对体外发酵指杨影响的综合评定依据W上试验结果使用DPS.10Tosis法对数据进行多试14软件进行p验、多指标综合分析,得出结论如表27和表28所示,其中在日粮精粗比为5:5条件下,复合菌培养物添加量W30%为最佳;在6:4条件下,复合菌培养物添加量W25%为最佳。表275:5日巧条件下体外发爵各指栋Topsis综合分析结果Table27TheresuheniveanaliseachiiltsofcompresysofndcatorandTosisof5:5substratesinvitrop+D-统计量C添加量Dl名次0%0.12410.02930.1909610%0.08600.06130.416543515%0.09510.05060.34720%0.10680.08600.44613 闲蒙古农业大学硕±学位论文^25%0.01380.14070.9107230%0.00750.13690.94821286is表:4日粮条件下体外发酵各指标Tops综合分祈结果Table28TheresultsofcomrehensiveanalsisofeachindicatorandTosisof6:4substratesinpypvitro+D-统计量C添加量Dl名次0%0.10580.00120.0115610%0.04590.07830.63043540.049401%0.40915.07120%0.4.06780.05070278425%0.02890.08670.7502130%0.03770.07840.675522.3.3巧论2.3.3.1不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对产气量的影响一饲解体外发酵产气6^底物主要是碳水化合物,定时间内的产气量反映了底物被瘤胃微生物利用的程度,表现瘤胃中微生物活动的总体趋势,1WI反映饲料营养价值的高低程度。体外产气量的大小反映了饲料的可消化。性的大小,与饲斜中有机物的降解程度高度相关本试验中,精粗比为6:4组的产气量显著高于5:5组,这是因为高精料组的半纤维含量按低,可溶::。性碳水化合物含量较高,从而导致64组的产气量高于55狙刘丽英等"4"200一(1)的研巧也证实了沒现象。在体外培养的相同时间点,随着复合菌培养物添加量的增加,产气量呈上升趋势,这是因为在日粮中添加复合菌培养物可W使日粮中的可溶性部分含量増加,而且可W促进瘤胃微生I""物的生长繁殖,从而提高了饲料的产气量。2.3.3.2不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对pH值的影响H一项综合指标瘤胃液p值是反映瘤胃内部环境与发酵水平的,它受日"f"粮类型、唾液分泌、瘤胃代谢产物的吸收与外排等诸多因素的影响。瘤?5.57.5胃液pH值的正常变化范围为,当pH值低于下限时,瘤胃内的微生W"。物活力降低、数量减少甚至消失,对机体生理机能有很大的影响本试验中,随着培养时间的延长,pH值持续降低,这是由于发酵过程中产生大量的VFA和乳酸,从,而这些产物不能被瘤胃壁吸收而导致培养液pH值的 M翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发薛活性物质含量的影响降低。2.3.3.3不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对VFA含量的影响VFA是反当动物能量的主要来源,可为反与动物提供总能量需要量的15111?70%80%,也是瘤胃微生物增殖的主要碳架来源。VFA浓度的高化不"1"仅说明了碳水化合物在瘤胃中消化率的高低,同时,其含量及组成比例一是反映瘤胃消化代谢活动的重要指标之。乙酸、丙酸和下酸约占挥发性1""脂肪酸总产量的95%左右,并且对能量转化效率的影响较大。乙酸是反当动物乳脂合成的主要前体I"",,丙酸则是反当动物重要的葡萄糖前体因此丙酸型发酵能为机体提供生长和生产所需的能量从而可一步提tU进高动物的生产水平和饲料利用率。本试验中,精粗比为5:5组在体外培养的TVFA含量显著高于6:4组,说明5:5组添加复合菌培养物后,可W刺激瘤胃微生物产生更多的VFA。随着复合菌培养物添加量的增加,降低了己酸/丙酸的比例,说明日粮中添加复合菌培养物可W提高瘤胃发酵的能量利用效率,。而且TVFA浓度随着复合菌培养物添加量的增加而显著上升说明日粮中添加复合菌培养物可W提高瘤胃微生物的活性。2-.3.3.4NHN巧度的影响不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对3-瘤胃液中NH3N是瘤胃微生物分解含氮物质的终产物,同时也是瘤胃t""一微生物合成微生物蛋白的主要原料-。NH3N浓度是衡量瘤胃氮代谢的个重要指标-,能够间接反映出瘤胃微生物利用NH3N合成BCP和微生物分NH-N的平衡情况-解饲料蛋白生成3。瘤胃液中NH3N浓度过高或过低都不利于微生物的生长繁殖-,因此保持瘤胃液中最适NH3N浓度是保证微生-N?物蛋白合成的首要条件。研究表明.,瘤胃液NHs浓度最佳范围为6.3273""?。?-1mg/lOOm。本试验中,在03h与824h培养液中NH3N浓度出现下降,这种减少并不是因为蛋白质降解或脱氨作用降低,而是由于复合菌培养物刺激瘤胃微生物菌群摄取NH-N3并合成蛋白质引起的。而6:4组的NH3浓度低于5:5组,这是因为日粮中精料比例提高,瘤胃微生物可发辭有机物增加,为瘤胃微生物生长提供能量增加-N浓,瘤胃微生物氮合成效率提高,NH3一度降低。这结果与唐海翠等(2006)和朱素华(2010)的研究结一果致-N浓。随着复合菌培养物添加量的増加,NH3度逐渐上升,说明日粮中添加复合菌培养物可为BCP合成提高充足的底物。2.3.3.5不同日粮精粗比及复合菌培养物添加水平对BCP爸量的影响 内蒙古农业大学硕±学位论文^BCP是反当动物最主要的氮源供应者,能为反当动物提供蛋白质需要""1?80%-的40%。BCP浓度的大小反映了瘤胃微生物利用NH3N的能为,BCP浓度也间接地反应了培养体系中微生物种群的数量t""。当瘤胃中氨和1"1能量不同步释放BCP合成量减少1。,可导致可发酵底物利用率下降和--6h培BCP含量下降NHN浓本试验中,在3养液中的,同时各组3度上升,说明此阶段瘤胃微生物降解氮源的速率远远超过微生物利用NH3合成蛋白-质的速度-、。618h,各组的BCPNH3N的浓度不断升高,表明复合菌培养物利于瘤胃微生物分解发酵底物。6:4组的BCP浓度高于5:5组,说明6:4组添加复合茜培养物可提高能量、碳架和氮源释放的同步性,提离了瘤胃一-真菌利用NH3N合成BCP的能力,或提高了瘤胃真菌的数量。这结果一-N浓。与NH3度降低的趋势相致随着复合菌培养物添加量的増加,BCP-N浓度较离有含量逐渐上升,这与NH3关。2.3.4小结①体外发酵试验表明日粮中添加复合菌培养物可W湿著提高TVFA浓度和BCP浓度(PC0.05),显著降低己酸/两酸比值(P<0.05),对pH值无显著影响。5:5②根据体外发酵指标的综合评定,在日粮精粗比为条件下,复合30%>茜培养物添加量^为最佳:4,25%;在6条件下复合茜培养物添加量(^1为最佳。2.4复合菌培养物对小尾寒羊育胆性能的影响2.4.1材料与方法2.4.1.1复合菌培养物由内蒙古正正生物科技有限公司提供,主要成分为酵母菌、枯草芽抱杆菌及其代谢产物和促生长因子。2.4.1.2试验动物与试強设计试验地点为己彦掉尔市临河区先锋桥南中央财政友邦养殖场。从饲养到3月龄左右的小尾寒羊中,选择体重、体质相近,生长发育正常的健康黑羊80只,随机分为对照组和试验组,每组40只,分别打上耳号,分圈饲养。对照姐饲喂全混合日粮,试验沮每天每只羊用200g复合菌培养物代。替等质量的全混合日粮,但试验组每天饲喂总量与对照姐相等各组饲粮组成及营养水平见表29。试验饲养时间为2014年8月7日至2014年10 竺翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发巧活性物质含jt的影响月15日,预试期10天,正试期68天。每天早晚各饲喂1次,日粮的给料量遵从不浪费的原则,由少到多,观察其剩料情况再确定是否增减饲料自由采食和饮水,其他日常管理按常规程序进行。表29各沮词巧组成及昔养水平(饲巧基础)Tab-le29Comosiionandnurientlevelsofdietsinallrousasfedbasispttgp()原料对照组试验姐4667谷草(%).40.65玉米〇(/〇)40.0034.84浓缩料(%)13.3311.61生物饲料(%)0.0012.90合计(%)100.00100.00--------DM(%)72.3368.12MEMJ/k9.779.78(g)CP(%)10.2111.31Ca(%)0.390.43P(%)0.210.252.4.1.3测定指标及方法2.4.1.3.1采含量。每天记录每组日粮采食量,计算试验期每组羊平均日采食量2.4.1.3.2体重变化试验开始和结束当天于清晨空腹称重,计算平均日增重和斜重比。2.4.1.3.3经济效益、、采食量根据饲料价格、绵羊销售价格等指标计算。2.4.1.4数据处理与分析同2.1.1.8。2.4.2结果2.4.2.1复合菌培养物对蕉羊采食量和日増重的影响 内蒙古农业大学硕壬学位论女^"f。。?T^40J某図别賤巧^HbiSh*’■巧授巧2.0圓圓_J___LI_,__LI__,郁始悚堇结束化重图3日复合菌培养物对绵羊体重的影晌Fig.35Theeffectofcompoundbacteriacultureonsheepweight2.4.2.2复合菌培养物对经济效益的影响由表31可看出,试验组每天的饲料成本登著高于对照组,但平均円<增重收益也显著高于对照组(P〇.〇5)。试验结束时试验组比对照组每只可增加收益8.16元。表31试验羊经济效益(元/只/d)Table31Economicbenefitsofthesheep(兄/只/d)组别巧料成本增重效益日收益bb'U'73±0.034.34±0.26..对照组3.06007"。44±0.147±0.42.02试验组.0.70.73±0(1)注0.05):村列数据府标含有相同字母表示差异不著CA。(2)增蛋效益:按市场I.活挂羊肉价格18化Ag巧右'■-■口巧照巧g?■*繼1^a■田b1LI.—」_画…,抽.:词料成本谓重额益曰收益图36复合菌培养物对经巧效益的影晌Fi.36Theeffectofcomoundbacteriacultureoneconomicbenefitgp 翻料工艺及不同菌种组合对复合菌固态发薛活性物质含量的影响2.4.3讨论赵华等(2004)试验结果表明,饲喂氨基酸发酵剂发酵饲料可提。髙奶牛的产奶量,増加经济效益张乃锋等(2004)用苹果发酵饲料饲喂肉羊后发现,苹果发醇饲料能提离肉羊的生长性能,増加机体对疾病的"f"抵抗力。马双青等(1999)在育肥牛日粮中添加50%的EM发酵饲料,试验组日增重比对照组提高17.4%,每头牛比对照组多增收36.64元。彭"忠利等0I"(213)用发酵饲料替代基础精料饲喂肉牛,结果发现饲喂发酵饲料可W提高肉牛对粗饲料的采食量,提高粗纤维消化率,有改善肉品质><0的趋势。本试验中.35%/.05,,试验组平均采食量比对照组提高4()日9.%%<0。增重提高(戶.05)本试验结果表明,日粮中用复合菌培养物等量代替全海合日粮可W显著提高绵羊体増重,增加经济收入,试验期间试验组比对照纽每只可增加收益8.16元。2.4.4小结使用了由内蒙古正正生物科技有限公司提供复合茜培养物饲喂小尾寒羊,可显著提高绵羊体增重,蜂低料肉比,表明在日粮中添加复合菌培养物能够增加小尾寒羊对饲料的利用效率,促进育肥羊生长发育,提高养殖效益,具有较大的推广价值。3结论(0固态发酵料经过翻料处理,可显著提高饲料中的营养活性物质,-其中酵母活菌数、P葡聚糖含量、甘露聚糖含量、多狀含量、总氨基酸含量和总有机酸含量分别较不翻料组提高了63.64%、8.46%、1.48%、2.3%、〇〇0.46/〇和3.72/〇。(2)W酿酒酵母菌BC、XR4和枯草芽抱巧菌A15进行3菌株固态发-葡聚糖酷,发醇产物中多化、总有机酸、总氨基酸、P、甘露聚糖5种营养活性物质含量均高于2巧酵母菌的发酵;并显著提高饲料营养物质的体外消化率。(3)在円粮中添加复合菌培养物可W提高BCP浓度和VFA浓度,降低pH值和乙酸/丙酸比值。在R粮精粗比为5:5条件下,复合菌培养物添加量W30%为嚴佳;在6:4条件下,复合茵培养物添加量W25%为最佳。(4)円粮中用复合茜培养物等量代替全混合円粮可显著提商绵羊体增重,,降低料重比因此饲喂复合菌培养物有利于促进巧肥羊生长发巧,提高养殖效益,具有较大的推广价值。 内蒙古农业大学硕±学位论女^物能够増加小尾寒羊对饲料的利用效率,促进育肥羊生长发育,提离养殖。效益,具有较大的推广价值3结论(1)固态发酵料经过翻料处理,可显著提高饲料中的营养活性物质,其中酵母活茜数-、P葡聚糖含量、甘露聚糖含量、多肋含量、总氨基酸含量和总有机酸含量分别较不翻料组提高了63.64%、8.46%、1.48%、2.3%、〇0.46%和3.72/〇。(2)^>1酿酒酵母BC、XR4和5进行3(茜枯草芽抱杆菌A1菌株固态发-酵,发酵产物中多化、总有机酸、总氨基酸、目葡聚糖、甘露聚糖5种营养活性物质含量均高于2株酵母菌的发酵;并思著提高饲料营养物质的体外消化率。(3)在日粮中添加复合菌培养物可提高BCP浓度和VFA浓度,降低pH值和乙酸/丙酸比值。在日粮精粗比为5:5条件下,复合菌培养物添加量30%为最佳在6:4条件下,复合菌培养物添加量W25%为最佳。;(4)日粮中用复合菌培养物等量代替全混合日粮可湿著提高绵羊体増重,降低料重比,因此诗喂复合茜培养物有利于促进育肥羊生长发育,提高养殖效益。,具有较大的推广价值 TO翻料工泛及不同茜种组合对复合菌固态发酵活性物质含g的影响致谢本论文是在思师刘大程老师的悉指导下完成的,这互年的学习经历使我受益终身,恩师渊博的知识、实事求是的科研态度和孜孜不倦的学习精神给予我板大的鼓舞和帮助。本论文从选题、材料搜集、实验设计及撰写阶段思师都倾注了板大的,I。血和关怀,不厌其烦的悉批改,并提出许多宝贵而中肯的意见。同时在思想上、生活上也同样给予我无微不至的关怀和照顾一。在此向恩师道声您辛苦了!本论文的完成期间得到了内蒙古农业大学的张燕军、捨日勒图、韩润林、郝永清、周雨霞、索兰弟、索培芬、张爱荣及内蒙古农牧业科学院的薛树媛、冯宗慈、张海鹰、赵秀英等老师无私的指导及帮助,在此表示诚擎的感谢。感谢我的师兄邸宇航、黄海碧,师姐刘国巧、卢春芳、杨化,W及舍友冯陈晨、刘省段、孙化琳、史紅蕾、袁丽佳等在我的试验、学习和生活上给予的帮助。尤其感谢我的同学李满双、王勇及我的师弟师妹张立明、张政、张琪讳和郭鹏的帮助,正是由于你化无私的帮助使我不断克服困难顺利完成课题的全部内么,大家是我,在完成学业的同时所收获巧最宝贵的财富,由衷的惠谢你们。最房要感谢含辛巧苦养育我长大的父母和家人,你们给予我的鼓励、开导和安慰,是我不断克服困难努力向前的巧泉,你们永远是我坚强的忘盾,谨W此论文作为最好的礼物来表达我深深的爱意。最后,诚擎感谢所有参与我论文评审与答辩的老师们,是你们让我的研究生生涯更加圆满。祝福所有的人幸福、安康! 内蒙古衣业大学硕±学位论女7J_参考文献1NewboCJWllRJ,ChenXBetal.Dinld,aace,fferetstrainsofSaccharomycescerevisiaedifferintheireffectsonruminalbacterialnumbersinvitroandinsheep[J],JournalofAnimalScience,1995,736-18181118():2孔海英.J.,孟宪梅动物微生态制剂的研究进展及发展应用前景[]吉林粮食高2006211-(:47等专科学校学报,,)3CarroMD,Lebzie打P,RohrK.Influe打ceofyeastcultureontheinvitrofermentation(Rusitec)ofdietscontai打i打呂variableportionsof-concentrates[J].AnimalFeedScienceandTechnology,1992,37(3):2092204MutsvangwaT,EdwardsIE,ToppsJH,etal.Theeffectofdietary-tSac打rns;nclusionofyeastculure(Yeac)opa11eofrume打fermentatio打,foodintakeandgrowthofintensivelyfedbul1s[J].AnimalProduction,-199255(1:3540,)5孟庆鄭.奶牛饲料添加剂的应用现状和发展趋势[J】.饲料广角,200-121):510(6李声永,王加后,粪胜等.踩母培养物在反当动物日粮中的作用研究进展[J].-中国音牧与兽医,2002,29(5):18227WilliamsPEV,TaitCAG,InnesGM,etal.EffectsoftheinclusionofstcultureSaccharomycescerevisiaelusrthmediuminthyea(pgow)edietofdairycowso打miIkyieIda打dforagedegradatio打a打dfer扭e打tatio打patternsintherumenofsteersJ.JournalofAnimalScience,1991,[]-697:30163026()8ErasmusLJ,BothaPM,KistnerA.Effectofyeastculturesupplement0打roductio打rume打ferrae打tatio打,andduode打aInitnf1owi打dip,rogearyn-cowsJ,JouralofDairyScience,1992,75(11):30563065[]91.肆母类饲料的分类和品质J].,200:86曾虹[中国水产(5)10董家武,李雪松.国内活性干酵母生产的现状与发展U].食品科技,2003,97-9:11FontyG,GouetP,Joua打yJP,etal.Establish扭entofthemicrofloraandanaerobicfungiintherumenoflambs[J].Jour打a1ofGe打eralMicrobiology,-1987,133(7):1835184312J巨PCoAlGalv呂0KN,Santos,scioni,etal.Effectoffeedingiveyeastproductstocalveswithfailureofpassivetransfero打perform ri翻料工蓉及不同菌种绝合对复合菌固态发縣活性物质含S的影晌anceandpatternsofantibioticresistanceinfecalEscherichミacoliJ-.ReiNtritionDlt,2005,454427[]productonueveopmen():440-13FontyG,ChaucheyrasDura打dF.Effectsandmodesofactionofliveyeastshe-intrumen[J,Bioloia,2006,61(6):741750]g一14彭凡,f氏玉国.酵母培养物及其在养殖业中的应用J.,2008,[]饲料工业29-10:3033()15黄青云.畜牧微生物学【M].北京;中国农业出版社.2003-16刘紅芝,王强,周素梅,等.踩母目荀聚糖的功能活性及其分离提取研究进展品科学-J?,2007,27(11):552556[]食hn-17OJA,BeMilleJrN.(13)lucanasbioloicalresifiers:a,ggponsemodrev1iewofstructuref打etionaactivityrelatio打ships[J】.CarbohydartePolmer-ys,1995,28:314-18陈昌福,陈营,陈超然等.p葡聚搪的特性及其对动物免疫功能的调节U.]华业大-2003,221:95100中农学学报,()19李军,邢建罕,李德发,等.啤酒舜母葡聚糖对断奶仔猪生产姓能及淋弦细胞J1-转化率的影响.,200642:1721[,()]中国書牧杂志20Ru—izHerreraJ.Fungalcel1wal1:structure,synthesis,andassemblyM.[]CRCpress,199121刘红芝,王强,周素搗?酵J.母甘露聚糖分萬提取及功能活性研究进展[]食品科-学,200829(5):46546,22J-朱春森春犀..酵母培养物的研究与应用湖南饲料2006(5):1921.,徐【],23刘学剑.酵母和酵母培养物在养殖生产中的庇用[J.9985:]饲料与京牧,1,014.24NewboldCJ,WallaceRJ,McIntoshFM,ModeofactionoftheyeastSaccharomycescerevisiaeasafeedadditiveforrumi打ants[J].BritishJN-ournalofutrition1996,76(02):249261,25,单安山.不同酵母培养物对奶牛瘤胥发酵产今的影响J.乔国华[]饲料博览,’20-05(8):4626CallawayTR,Marti打SA.Effeetsofcellobioseandmonensinoni打vitroferme打tatio打oforganicacidsbymixedruminalbacteria[J,Journalof]d-airyscience,1997,80(6):1126113527NisbetDJMarti打SA.EffectofaSaccharomycescereviilt,saecuureo打lactateut玉1i之ationbytheruminalJ.JournalofAnimalscience,1991,[]-463369;4628 内蒙古农业大学硕±学位论文73_28EnalbertFGarrettJE,Mo打coulo打Reta1.Efftsofeatcltj,,ecysuure-Saccharomi^ruminaldistioilttii(ycescerevsae)ongenn打onaca打呂daryAn-cowsJ.imalFeedScienceandTechnolo,1999,76(3):195206[]gy29LynchHA,Marti打SA.EffectsofSaccharomycescerevisiaecultureandSaccharomycescerevisiaelivecellsoninvitromixedruminalmic-85roorga打ismfermentatio打[J].Journalofdairy5〇重6〇〇6,2002,(10):-2603260830RobinsonPH.Effectofyeastculture(Saccharomycescerevisiae)onadaptationofcowstodietsostpartumJ,Journalofdairyscience,p[]1-1997806:1191125,()31NewboldCJ,BrockR,WallaceRJ.InfluenceofautoclavedorirradiatedAspergillusory之aefermentationextractonfermentationintherumensi边ltitieRusitec[J].TheJour打lofAriculturalScience,Ilaonechnqu()ag-1991116(01):159162,32GirardIDJoDawsonKA.Lacticacidutilizatiortiltin,nesCR,numensmuagculturesreceivingyeastculturesupplement[J],JournalofAnimalscience,1993,71(Suppl1):288-Wrfor33Kor打egayET,Rhei打elkerD,Lindema打打MD,etal.Pemanceandnutrientdigestibilityi打weanlingpigsasinfluencedbyyeastcultureadditionstostarterdiets〇〇11【3乏曰1打gdriedwheyoroneoftwofiber-sourcesJ.Journalofanimalscience,1995,73(5):13811389[]""34张瑞文,杨斌.仔褚饲唯益康XP饲料添加剂生长效果试验[J].贵州香牧110兽医,2002,26():35周淑芹,孙文志.踩母培养物与抗生素对巧仔鸿生产性能及免疫机能影咱的研2004-究J..,36(11):911[】言牧与兽医36金植.活性酵母饲料对迪卡鸡育成期的饲艰效果研究U].饲料工业,2003,3:3237赵林果,王书輪,叶汉玲,等.农林废弃物制备的巧母培养物养鱼应用研究[J].-饲料研究,2000,5:111338刘哲,魏时来.酵母培养物对建經生长性能影咱的研究[J].饲料工业,2003,-5324(4):5239胡迪先..1995(4):,王定昌饲料酵母替代鱼粉作巧料的研究U]中国饲料,-1920.40程光平,黄钓,夏中生,等.酵母蛋白替代鱼粉饲养胡子給试验[J].广西农业 T翻料工芝及不同菌种组含对复含茜固态发酪活性物质含量的影响±—1科学,2001,20(1):4.4441吴新民,杨金晓,范葵红.酵母菌在对押钟料中的应用J.,1998,[]饲料研究-(10);4542甄玉国.饲用微生态制剂酵母培养物及其在反当动物中的应用[J?饲料工业,]-2005,26(1):59''43MeGeoughEJ,OKielyPOBrie打M,etal.Anevaluatio打ofthemethane,—outputassociatedwithhighmoisturegrainsandsilagesusingtheinvitrototalgasproductiontechnique[J].AnimalProductionScience,-2011,517):627634(44HuckoB,Ba曲pidisVAKodeSA,etal.Rume打fermentatio打chteristics,arac—inpreweaningcalvesreceivingyeastculturesupplements[J].Czech-JournalofAnimalScience,2009,54(10):43544245HaddadSG,GoussousSN,Effectofyeastculturesupplementaliononnutrientintakediestibilitya打dgrowthperformanceofAwassi1ambsJ].[,g200-AnimalFeedScienceandTechnology,5,118(3):343348--46KawasJRGarciaCi1loR,GazaCazaresF,etal.Effectsofsod,astriumbicarbonateandyeasto打productiveperformanceandcarcasschar—-acleristicsoflightweightlambsfedfinishingdiets[J.SmallRum]--Rinantesearch,2007,67(2):15716347Moha-medMI,MaaxeckYA,AbdelMagidSS,etal.Feedintake,digestibility,rumenferme打tationa打dgrowthperfor扣a打ceofca田e1sfeddietssupplementedwithayeastcultureorzincbacitracin.Animal[J]f-eedscienceandtechnology,2009,149(3):34134548LeeSS,ParkNH,Ju打gJK.Effectsofyeastculturesuppleme打tso打growthandcarcasstraitsi打Korea打ca11leJ.Korea打Jour打a1ofAnima1Scie打ce【],-199739(4:391400,)49HissaK,Huhta打e打P.Thei打flue打ceof田classesa打dyeastcultureo打the-erformanceofrowingbullso打grasssilaebaseddiet.Journalofpgg[J]-AnimalandFeedSciences19965(3):201214,,50Spi打gPWenkC.Chaninrumenactivitwithsuplemtsofthe,gesypeny—ea—stcultureyessaccl026inacontinuousrumensimulationsystem--J.ndwirschaftSchweLaiz,1993,6(4):245247[]51WallaceRJ.Ruminalmicrobiology,biotechnologyandruminantnutritrolion:gressandprobems.JournalofAnimalScience,994,72:p[J]1 内蒙古农业大学硕±学位论文^2992-300352WilliamsPEV,NewboldCJ,HaresignW,etal.Rumenprobiosis;theeffectsofnovelmicroorganismsonrumenfermentationandruminantoduc-prtiv玉tyC/RecentadvancesI打animalnutrition1990.Butterwor[]/--2ths,1990:2112753DoreauM,JouanyJP.EffectofaSaccharoraycescerevisiaecultureo打nutrie打tdiestioni打lactati打gdairycowsJ.JournalofDairie,g[]yScnce-19988112:32143221,()54MathieuF,JouanyJP,Se打audJ,etal.TheeffectofSaccharomycescerev^siaeandAspergillusory之aeo打fermentationsintherumenoffau打ateda打ddefau打atedsheep;protozoala打dprobiotici打teractio打sJ.[]N-ReproductionutritionDevelopment,1996,36(3):27128755MartinSA,NisbetDJ,DeanRG.Influe打ceofaco虹证ericalyeastsupplement0打thei打Vitroruminal.ferrae打tatio打[J].Nutritio打reportsinternational,-1989,40:39540456王庆巧,田兰英,赵仁义等.影响奶牛瘤WpH值的因素U].河南音牧兽医,200829-(10:3637,)57刘长胜,王建钦,宋伟伟.影喻奶牛瘤胃pH值的因素[J].河南畜牧兽医,2007,2875:58KumarU,Saree打VK,SinghS.EffectofSaccharomycescerevisiaeyeastculturesuplementonruminal曲etabolis扭i打buffalocalvesgive打ahighp59-concentratedietJ].AnimalProduction,1994,(2:209215[)59E打jalbertF,GarrettJE,Mo打coulo打R,etal.Effectsofyeastcultureha—(Saccromycescerevisiae)o打ruminaldigestioni打打o打lactati打gdairy-cowsJ].AnimalFeedScienceandTechnology,1999,76(3):195206[60SullivanHM,Marti打SA.EffectsofaSaccharomycescerevisiaecultureoninvitromixedruminalmicroorganismfermentationJ.Journalof[]-20dairyscience,1999,82(9):20111661.,,高民踩母培养物对内蒙舌白绒山羊瘤胃发酵的影喻J.张爱忠卢德肋[]-,200642(17):3639中国言牧杂志,62SalterDNSmithRH.Diibilitiesofnitrogencompoundsinrumen,gestbacteriaandinothercomponentsofdigestainthesmallintestineof-theyoungsteerJ],BritishJournalofNutrition,1977,38(02):207216[63EmmanuelDG,JafariA,Beauche扭i打KAetal.Feedinlivecultures,g Tb翻料工S及不同菌种组合对复合菌固态发巧活性物质含g的影响ofEnterococcusfaeciumandSaccharomycescerevisiaeinducesaninf1-ammatoryresponseinfeedlotsteers.Journalofanimalscience,[J]2007-,85(1:233239)64HristovAN,RoppJK,HuntCW.Effectofbarleyanditsamylopectin-contentonruminalfermentationandbacterialuti1izationofammoniaN-invitroJ.Animalfeedscienceandtechnology,200299(1):2536l],65谭支良,ShahMA,MurphyMR.日粮精粗比、能量和巧毋培养物添补对体外J-.,2004,163:2632干物质降解率的影响[()]动物营养学报66Dole乏alJDole乏alPDistibilitoricttoftotalmixed,.geyofganmaerrationswiththesupplementationofyeastcultureusingtheinvitromethodJ,ActaUniversitatisAiculturaeetSiIviculluraeMendelianae[]grBrunen-sis,2014,55(5):596467WohltJE,FinkelsteinAD,ChungCH.Yeastculturetoimproveintake,nutrientdigestibility,andperformancebydairycattleduringearly-lactationJ.Journalofdairscience,1991,74(4):13951400[]y-fed68YoonIK,SternMD.Influenceofdirectmicrobialsonruminalmicrobialfermentationanderformanceofruminants;AreviewJ.p[]-JournalofAnimalscience,1995,8:53355569.J.黄庆生添加不同酥母培养物对痛胃巧维分解菌群和汁维素酶活的影响[]-音牧兽医学报2005,362:144148,()70陈贵才,栽德慧,黄光荣,等.多菌种发酵餐饮废弃物生产蛋白饲料研究[J].-434浙江大学学报,2007,33(4:429)71余伯良.发巧饲料生产与应用新捉术[M].北京:中国农业出化社,199872刘娜,安晓萍,齐景伟,等.复合菌发酵生产生物饲料工艺条件的研究[J].粮王业-食与饲料,2014,5:4750-73.酒糟发酵生产蛋白饲料的研究J.001(3):3031蔡傻啤[]粮食与饲料王业,274刘源.饲用微生物添加剂的研究与应用(综迷J.验动物学杂志)[]中国实,-1997,73:184188()75.J.002111);李桂杰,张钓利动物微生态制剂的研究进展】饲料王业,20,([-161876王-.J.20046:46桂《,刘燕益生素的研究及应用进展[]饲料博览,()77J赵端香,李元瑞,郭样.嗜酸乳杆菌抑菌特性的研究.[】中国微生态学杂2001-志,13(6:318319,)-78MarutaK,MiyazakiH,TadanoY,etal.EffectsofBaci1lussubti1isC3102 内蒙古农业大学硕±学位论文11_intake0打fecalfloraofsowsa打dondiarrheaandmortalityrateoftheir-igletsJ,AnimalScienceandTechnologyJapan),996675:403p1,()409[](79蔡访勤,薛乐勘,罗捧,等.口服乳酸种菌对实验动物免疲功能及肠道正常菌-J.,1989,1(1):2529群的影咐[]中国微生态学杂志80张机,王建华,刘立恒.饲用嗜酸乳奸菌括抗特性研究U].中国饲料,2004229-11():8on-JMTShahS1Kami.Deficienciesi打microboi1tMi1ler,iolgcalqualitya打dlabellin呂ofprobioticsuppleme打ts[J],Internationaljournaloffood-microbiolo,2002,72(1):175176gy-MPC82MattilaSandholmT,yllSrinen,rittendenR,etal.Technologicalchallengesforfutureprobioticfoods[J,InternationalDairJournal]y,-2002122:173182,()83Maia0B,DuarteR,SilvaAM,etal.Evaluationofthecomponentsofacommercialprobioticingnotobiotic曲iceexperimentallychalle打gedwthSamonellae打tericasubsp.e打tericaser.Typhi曲uriumJ.Veil[]te--183rinarymicrobiology,2001,79(2):18984潘木水,付畅国,周风珍.断奶仔猪日粮中发巧豆柏替代乳粉的研究J].[广东-31饲料,2005(4):30一生态宝在蛋鸡日粮J85苏志勇,王桥林.新型微生态制剂中的添加效果[].饲料-王业,199920(4):3536,86陈丽艳.乳酸杆菌制剂对肉仔鸡肠道菌群、血清球蛋白及生产性能的影响[J].6-1416中国饲料,2006():87..朱万宝,常志州,等复合益生菌饲喂断奶仔褚的效果U]饲料研究,W99-(4):7888徐建雄,叶陈梁.产酶微生物制剂对肥育猪生产性能和胸体组成的影响J].[富-牧与兽医,2005,37(3):262789LilaZA,MohammedN,YasuiT,etal?巨ffectsofatwinStrainoflivecells0打mixedruminal田icroor呂a打ismfermentationinvitroJ.Journal[]-ofanimalscience,2004,82(6):1847185490邓露芳,王加居,姜艳美,等.纳豆芽拖杆菌对瘤胃微生物发酵的影响[J].畜-,2008398):10621068软兽医学报,(KLBukAOl-91Swrs,HartsockTG,eta.Effectsofdirtfedmicrobialye,recsuppleme打tation0打digesIibiIitya打dfer扣e打tat主〇打e打dproductsinhorses——fedlowandhighstarchco打centrales[J.JournalofAnimalScience,] 78翻料工芭及不同菌种巧合对复合菌固态发薛活性物质含量的巧响-2008:,862596260892陈琼,杨汝德,邱祁平.鸡源益生嗜酸邦杆菌分离及生物特性初探U.]湖北农业2006-45336036科学,,():193余东游,毛翔飞,秦艳,等.枯草芽抱杆菌对肉鸡生长性能和肠独膜抗氣化及免疫功能的影响46-[J.杂志,2010,(3):2225]中国富牧94张克梅,李豫江.应用活菌制剂增奶的效果观察[J].黑龙江畜牧兽医,2002,-17(8):1695-,.微生态制剂的安全性探讨J.2004131820许毅赵亚军[]广东饲料,,(1):96,王加后,.纳豆芽抱杆菌对泌化期奶牛产巧量染广春,h登攀等、牛奶品质J200839958-6.东北农业大学学报的影咱,,():1[]97.刘彩巧,孙满吉,孙金将,等饲粮中添加复合益生菌对奶牛瘤胃发酵及巧维J0-素酶活的影响[.,211,23(5):821827]动物营养学化-98.J1998l卢德财试论中国乳牛的饲养模式[].内蒙古畜牧科学,,W():1799张庆才.瘤胃生态系统的特点及日粮对其影响[J].国外《牧科技,1998,-25(1):1215100WiedmeierRD,ArambelMJ,WaltersJL.EffectofyeastcultureandAspergillusoryzaefermentationextractonruminalcharacteristicsandnutrientdigestibilityJ.JournalofDairienceW87,70(10):[]ySc,-20682063101EdwardsIE,ToppsJH,ElSheikhM,eta1.TheresponseofLimousineXFriesiansteersfedsilageandconcentratestotheadditionof-supplementalyeastculture(YeaSacc)andoranantibioticadditive(Avotan)J.Anim.Prod,199151:588[],102FallonRJ,HarteFJ.Theeffectofyeastcultureinclusioninthetrllconcenatedietoncaferformance.JournaofDairyScience,1987,p[J]70(Suppl1):143-103张明峰.酵母培养物的作用研究[J].饲料工业,W97,18(8):3638.104.巧母培养物对反当家香营养作用的研究J郑晓中.,1996,[]饲料研究2-5(11):105详支良.绵羊曰粮中不同碳水化合物和氣源比例对纤维物质消化动力学的影响及其组合效应评估模型[D].硕壬学位论文.呼和浩特:内蒙古农业大学,1998106孙占章,毛胜勇,姚文,等.不同精粗化底物下瘤胥真菌和巧维降解细菌共培-养发酵特性及菌群变化U.微生物学报,2006,460):422426]107DehorityBA,OrpinCG.Developmentof,andnaturalfluctuationsin, 内蒙古农化大学硕±学位论文rumenmicrobialpopulations[M]//Therumenmicrobialecosystem.SpringerNed-therlans,1997:196245108司振书,江成.瘤胥微生物对纤维的降解及其应用[".微生物学杂志,2003,236-64(6):1109王梦芝,喻礼怀,王洪荣,等.日粮结构对羊瘤冒原虫种群及吞唾速率的影响-J1.,2009,45(3):2732[]中国富牧杂志110王照华,侯先志.持续瘤冒模拟法研究不同日粮精粗比对瘤冒真菌生长和发韓参2-0059719数的影咱U.中国饲料,():1]111王海荣.不同日粮精粗比及氮源对綿羊瘤育纤维降解群和巧锥物质降解的影响[D..呼和浩特:内蒙古农业大学,2006]博去学位论文112刘国娟,刘大程,卢春芳,等.复合菌固态发巧培养基及发韓工艺的优化[J].动-:9027物营养学报,2014,26(4)1011-113SN/T18002006食品和动物饲料微生物学菌落计数方法[S]114DaliN,FlsJ,aquetV.Anewmethodforqutミtativdetelesra打coPa打erminationofpolysaccharidesintheyeastcellwa11.Applicatio打totheceltitatsofSsreiJ.Ytlwalldefecvemunaccharomycecevisae[]eas,-13061998,14(14):1297115孙海朔,尹卓容,马美范.高压均质破碎啤酒靜母细胞壁的研究[J]?食品工业-科技,2002,23(2):6667116了明玉,陈培格,罗国安.食品中有机酸的高效液相色谱分析法[J].色72-21512谱,199,15(3):117DeterminationofAminoAcidsinFeeds(饲料中氨基酸的测定)?GB/T-1824620002001,118BoyerRF.Modernexperimentalbiochemistry[M.SanFrancisco,CA:]BenjaminCum虹i打gs,2000119OscarF,LuizFL,Lu之J,etaI.Controlstrategiesforintermittently-mixedforcefullyaeratedsolidstatefermentationbioreactorsbasedon,theanalysisofadistributedparametermodeI[J].ChemicalEngineering—Science20045921:44934504,(),120BarstowLM,DaleBE,TengerdyRP.EvaporativemoistureandtemperatureroldsubstratefeentationJBiIT1988contlinsoirm[].otechnoech,,2—(4):237242121TilleyJMA,TerryRA.Atwostagetech打iquefortheinvitrodigestionJ-1offoragecrops.Grassforascience,963820411and1,1():1[]ge M翻料工芝及不同菌种组合对复合菌固态发酷活性物质含量的影响1222007.饲料分析及饲料席量检测技术.北京:,张丽英[M]中国农业大学出版社123苑文珠,刘建新,吴月明.日粮中直接添加微生物制剂(DFM)对反当动物的影响-J?2002:13[]饲料研究,1()124SchingoetheDJ,LinkeKN,KalscheurKF,etal.Feedefficiencyof-fem.Jidlactationdairycowsdyeastcultureduri打gsummer[J]ournalofda-4iryscience,2004,87(12):4178181125胡奎娟,吴克,潘仁瑞,等.固态混合发酵提高木聚糖酶和纤维素酶活力的研J-究[L菌物学报2007,26(2):273278,126胡瑞,陈艳,王之盛,等.复合益生菌发骑互柏生产工艺参数的优化及酶菌联20-19[J]?动物营养学报1325(8):189603合发靜对豆柏品质的影咐,,127姚勇芳,赵祥杰,廖延智,等.陈香茶菌及枯草芽抱杆菌复合发韓豆柏的研究J-.,2014,26):35373544[]动物营养学报(11128刘晓艳,杨国力,国立东,等.混菌固态发酵法生产大豆多化饲料的研究J].饲[-1料王业,2012,33(6):556129VinkxCJA,De1courJA.Rye(SecalecerealeL.)ArabinoxyIans:ACritical-ReviewJ.JolofCelScience1996,24(1):114[]urnarea,130Saul打ierL,SadoPE,Bra打lardG,etal.Wheatarabi打oxylans:exploitingvariationinamountandcompositiontodevelopenhancedvarietiesJ].[C-JournaloferealScience,2007,46(3):261281131HollmannJ,ElbegzayaN,PaweIzikE,etal.Isolationa打dcharacterizationofglucuxonoarabinoxyla打sfromwheatbra打obtainedbyclasslealand-uliiJ.itAtrasoundassstedextractonmethods[]QualyssuranceandSafetyo-239fCrops&Foods2009,1(4):231,132黄燕华.不同来源纤维素酶在肉鶴高纤维日粮中的应用及其作用机理的研究[D]业大学4博去学位论文.广州:华南农?200133王永花,高峰,周宏光.非淀輪多搪酶制剂在畜禽厥道的作用模式[J].書牧与-兽医?2006,9:5255-—-134Ma打nersDJ,MassonAJ,PattersonJC.StructureofP(1,;3)Dgluca打-fromyeastcellwallsJ.BiochemicalJournal1973,135:30[],(l)19135PrestaMLealiDStabileHetal.Heparinderivativesaiis,,sa打oge打es,g-inhibitorsJ.Currentpharmaceuticaldesign,200397,(:553566[])136LipkePN,OvalleR.Cellwallarchitectureinyeast:newstructureand-newchallengesJ.Journalofbacteriolo,1998,180(15):37353740[]gy137王.J.,传槐,卞带提高踩母饲料质量与作用效率的巧究[]饲料研究,1995 内蒙古农业大学硕±学位论文^5-():69138伏绍蜂.J慧明,华,杜建中等生物饲料添加剂的开发与应用[】.饲料研究,200357-,(5);59139潘宝海,李德发,礁仕度.益生菌,益生素及合生剂的作用机理和相互关系-J.200015:1214[]中国饲料,,140王巧娟,孙满吉.饲料酵母及培养物的作用激励机制研究进展J.粮食与饲料[]工业54-112114,200,:141邱雪,骆宏机,刘文聪.芽拖杆菌在动物营养与饲料中的应用J.兴[]中国言牧-W兽医文摘,2014,30(5):W45142秦为淋.店用命相色谱法测定挥发性脂肪酸的改迸.1982[J]南京农学陵学报,,-4:110116143赵培厅.日粮不同NFC/NDF比对奶山羊瘤宵发酵功能和微生物区系变化的影响D.;2011].硕去内蒙古农业大学,[学位论文呼和法特144冯宗慈,高民.通过比色法测定瘤冒液氨氮含量方法的改进[J.]内蒙古京牧科99340-4学,1,:41145BradfordM.M.ArapidandsensitivemethodforthequantitationofA.ro一micgramqua打titiesofprotei打uti1izi打gthepri打cipleofprotei打dye-bindi打gJAnalyticalBiochemistry,]^976,72(l):248254[h146黄雅莉,邹彩霞,韦升菊,等.体外产气法研究半化胺对水牛瘤育发酵参数和-J1甲坑产量的影响.,2014,261:25133[]动物营养学报()147刘丽英,贾玉山.绵羊全混日粮体外培养产气量的动态研究[J].内蒙古草业,-201022(4):6163,148冯伟业.不同品廣粗饲料日粮及添加酵母培养物对绵羊瘤賈内主要纤维分解菌及奸维物质降解的影响[D】.硕去学位论文.呼和法恃:内蒙古农业大学,2008149,.不胡明,卢德狱,牛文艺等同阴阳离子水平日粮对绵羊瘤晉内巧境参数的-12影响U.内蒙古言牧科学,2002(5):9]150王洁.体外条件下葡萄糖处理欠豆柏对瘤潍波,赵国诗,郭耀胃内巧境参数的-J17.饲料工业,200930()3437影响,:[]151SPEARSJW,SCHLEGELP,SEALMC,etal.Bioavailabilityofzincfromzincsulfatea打ddiffere打torganic之i打csourcesandtheireffectsonrumi打alVOlati1efattyacidproportions[J].LivestookProductio打Science,2004,-90(2):211217152呂永艳,张杰杰,孙国强.不同化例的青赔玉米祐和花生蔓与精料的组合对奶J-牛体外瘤胃发踩参数的影响.中国,2013,49(21):4447[]畜牧杂志 ^翻料工艺及不同菌种巧合对复爸菌固态发酵活性物质含g的巧响153管红娟.EAAD.硕构成与碳水化合物类型对混合瘤胥微生物体外发酵的影响[]去学位论文.泰安:山东农业大学2010154了健.不同结构日粮对肉用山羊瘤胥内巧境参数义细巧氧态氮利用的影响[D].硕去学位论文.江苏:扬州大学,2003155陈宁,尹若亮,李周权,等.曰粮因素对反当动物瘤胃消化代谢影响的研究现-状-U.2006,273):106108]家畜生态学报,(156沈美英.曰粮内不同粗饲料品质对绵羊瘤胃发酵功能和微生物区系的影响[D].硕去学位论文.呼和浩特;内蒙古农业大学,2005157王加后.反当动物营养学研究方法.北:现,2011[M]京代教育出化社158ALLISONMN,SMITHRH.Biosynthesisofaminoacidsbyruminalmicroor--ganisms[J].JournalofAnimalScience,1969,29(5):797807159唐海翠,庞学东,王惊,等.高精料条件下酵母培养物对混合瘤胃微生物休外-发酵的影响.,2006,27(4):3337[J]家音生态学报160朱.日粮碳水化合物结构对山羊瘤胃发巧和氮代谢的影喻D.素华[]硕壬学位论文-.扬州大学,2010:3541:扬州161李袁飞,郝建祥,马艳艳,等.体外瘤育发巧法评定不同类型饲料的营养价值-J].,201325(10):24032413[动物营养学报,162马慧,苗树若,刘爱,等.反当动物日粮正组合效应的调控及优化配制J].[黄-牛杂志,2005,31(6)4750:163DIAZA,AVENDANOM,ESCOBARA.EvaluationofSapindussaponariaasadefau凸atingagentanditseffectsondifferentrumendigestionparam-e-tersJ].LivestockResearchforRuralDevelopment,19935:16[,(2)164赵华,张玲,张娜.利用氧基酸发酵剂发酵饲料饲嘴泌乳牛试验J.中国奶牛,[]-2004,3:2728165张乃锋,习其玉,屠焰,等.J.中国果渣生物发酵和肉羊饲嗔效果的研究[]草-,2004(zl)34l37食动物:1166鸟双青,张成祥,更松旦周,等.EM发韓饲料对育肥牛的增重效果[J】.黑龙江畜牧兽医,W99(12):18?167彭忠利,郭春华,严锦秀,等.发酵饲料对育肥肉牛生产性能、养分消化率和’20-肉质的影响[J.黑,13,23:6770]龙江言牧兽医 内蒙古农业大学硕±学位论文^作者简介张锦球女汉族共党员198925日出生2008,,,中,年月1于河北省石家庄市。年考入河北科技师范学院动物科技学院动物医学专业,四年时间里,曾担任学生会"""团务部部长及自律委员会纪检部副部长一职并多次荣获化《学生干部、社,"""""会实践先进个人、团先进工作者及互好学生等荣誉称号;学业方面,获二一互等奖学金两次等奖学金次。2012得,年7月顺利毕业,获得农学学去学位。2012年9月考入内緊古农业大学兽医学院预防菩医学微生物与免疫专业,攻读硕壬学位,师从刘大程教授,在读期间主要从事反当动物瘤育微生态的研究工作。’攻读硕去学位期间发表的论文有:王勇立明刘大程.不同茜种组合对固态发購料中营养活张锦玲,郭鹏,张,,性物质含量及物料体外消化率的影响.中国畜牧兽医[J].(已录巧)
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