透明质酸修饰的阳离子类脂质体作为眼底基因递送载体的研究

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1、学校代码：10259学号：156061422密级：公开上海应用技术大学硕士学位论文题目：透明质酸修饰的阳离子类脂质体作为眼底基因递送载体的研究英文题目：InvestigationofHyaluronicAcidModifiedCationicNiosomesforOcularGeneDeliverySystem专业：制药工程学院：化学与环境工程学院研究方向：眼用纳米载体设计姓名：秦艳梅指导教师：甘莉副研究员2018年5月23日透明质酸修饰的阳离子类脂质体作为眼底基因递送载体的研究摘要近年来，采用基因治疗手段对眼底疾病进行根本性的治疗，受到越来越多科研学者的重

2、视。然而，基因治疗遇到的瓶颈在于高效的递送载体。因此，寻求能够紧密结合基因，实现定位靶组织、定时释放基因和定点自我降解的目标的理想载体成为目前基因治疗领域研究的重中之重。本课题从三个部分进行研究。首先，研究考察了Niosomes的制备条件与理化性质。经HA修饰后的阳离子类脂质体，粒径为175~184nm，电位为-29~-33mV。其次，采用视网膜色素上皮（ARPE-19）细胞，对载体进行细胞摄取水平的研究。结果显示，各组载体细胞摄取能力随着HA的修饰量增加而不断增加，且20%HA-C-niosomes组的摄取能力显著高于无HA修饰组。最后，采用了增强型绿色荧

3、光蛋白（pEGFP），将其作为质粒包载入阳离子类脂质体后，并修饰以透明质酸，得到HA-C-niosomes/DNA。体外细胞学实验结果表明，20%HA-C-niosomes组的转染效率，相比裸质粒组，增加了2倍。而通过在SD大鼠体内开展的体内转染学评价，视网膜冷冻切片，发现RPE层有明显绿色荧光蛋白的表达；且20%HA-C-niosomes组体内转染效率是裸质粒组的6.5倍。综上，该HA修饰的阳离子类脂质体（HA-C-niosomes）具有良好的稳定性以及基因保护作用，能够主动靶向到RPE细胞，并实现良好的基因转染效果。关键词：类脂质体；透明质酸；CD44；

4、RPE；靶向InvestigationofHyaluronicAcidModifiedCationicNiosomesforOcularGeneDeliverySystemAbstractInrecentyears,takinggenetherapytotreatretinaldiseasesfundamentallyhasarousedmoreandmoreattentionbyresearchscholars.However,thebottleneckingenetherapyistheefficientdeliveringvectors.Therefo

5、re,searchingforanidealvectorthatcantightlybindgenesandachievethegoaloflocatingtargettissues,releasinggenesontimeandperformingsite-specificself-degradationbecomesthemostimportantissueatpresent.Thistopicisstudiedfromthreeparts.Firstly,thestudyinvestigatedthepreparationconditionsandph

6、ysicalandchemicalpropertiesofNiosomes.AfterthemodificationofHA,HA-C-niosomes’sizewereabout175~184nm,withanegativepotentialof-29~-33mV.Secondly,ARPE-19cellswereusedtostudythelevelofcellularuptake.TheresultsshowedthatthecellularuptakecapacityofeachgroupincreasedwiththeincreaseofHA,an

7、dtheuptakecapacityof20%HA-C-niosomesgroupwassignificantlyhigherthanthatoftheHA-freegroup.Finally,enhancedgreenfluorescentprotein(pEGFP)wasusedasplasmidtoloadcationicliposomes,andmodifiedwithhyaluronicacidtoobtainha-c-niosomes/DNA.Theinternaltransfectionefficiencywasevaluated.Invitr

8、ocytologicalresultsshowedt