阳离子脂质体为载体的基因体内递送效果研究

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1、阳离子脂质体为载体的基因体内递送效果研究计：学位论文：43页表格：8个插图：14幅丁超指导教师：甄宇红教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：药理学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所

2、做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：—_二￡鼹}一签字日期：翌&年皇月4Et关于学位论文使用授权的说明《阳离子脂质体为载体的基因体内递送效果研究》系本人在大连医科大学攻读(博士、硕士)学位期间在导师指导下完成的学位论文。本人及指导教师完全了解大连医科大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅，同意学校将本论文加入：1．中国学术期刊(光盘版)电子杂志社——《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》及CNKI相关数据库。

3、2．中国科学技术信息研究所——《中国学位论文全文数据库》3．国家图书馆本人授权大连医科大学，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文，可以公布论文的全部或部分内容。论文作者签名：指导教师签名：签字日期：]砭哟k翌I!年』月1日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯Oo·oODO00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯4(一)日!』舌⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’4(二)实验部分．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6第一章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6第二章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13(三)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29(四)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯39四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43阳离子脂质体为载体的基因体内递送效果研究硕士生姓名：专旨导教师：专业名称：丁超甄宇红教授药理学摘要目的：考察自制的阳离子脂质体作为载体，在小鼠体内递送DNA及RNA的效果及其体内安全性。方法：(1)以荧光素酶为目的基因，分别以自制的8种阳离子脂质体为载体，对携带荧光素酶基因的质粒pGFP-N2在小鼠体内进行转染。通过WesternBlotting检测转染后小鼠肺和肝脏中荧光素酶的表达，评价阳离子脂质体在小鼠体内

6、递送DNA的效果。(2)以自制的4种阳离子脂质体为载体转染小鼠，对载脂蛋白B(ApoplipoproteinB，ApoB)进行体内RNA干扰。RT．PCR检Nd,鼠肝脏中ApoBmRNA的表达，ELISA、WesternBlotting检N4,鼠肝脏及血浆中ApoB蛋白的表达，评价阳离子脂质体在小鼠体内递送siRNA的效果。(3)在进行体内转染的同时通过考察小鼠的体重变化、内脏变化、死亡率等指标评价所用阳离子脂质体的体内安全性。结果：(1)以自制的8种阳离子脂质体9、10、17、19、20、21、22、CD01为载体进行体内DNA转染，通过We

7、sternBlotting检测到转染组小鼠肝脏和肺中有荧光素酶蛋白的表达，表明所考察的阳离子脂质体均有体内递送DNA的作用，且自制的阳离子脂质体和商品脂质体Lipofectamine2000效果相近。壳聚糖作为促进剂可以帮助脂质体在体内将质粒运送至靶器官和靶细胞。(2)分别以自制脂质体9、21、CTA、CPA为载体进行体内RNA干扰，通过WesternBlotting及RT—PCR的方法检测到CTA及CPA干扰组的小鼠ApoB在mRNA及蛋白水平的表达明显低于对照组，表明这两种阳离子脂质体可在体内将siRNA递送至靶部位并使其发挥基因沉默作用。

8、壳聚糖对RNA干扰效果有促进作用。(3)所考察的阳离子脂质体一基因复合物尾静脉注射会对小鼠的健康状态产生影响，与Lipofectamine2000市目