不同功能肽修饰的聚乙烯亚胺衍生物作为基因载体的研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M120208448上海海洋大学硕士学位论文不同功能肽修饰的聚乙烯亚胺衍生题目：物作为基因载体的研究Polyethyleniminederivatemodified英文题目：bydifferentfunctionalpeptidesasnovelgenevectors专业：食品科学与工程研究方向：海洋生物制药姓名：赵文芳指导教师：陈舜胜刘克海二O一五年四月十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作

2、所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文

3、。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注陈舜胜上海海洋大学教授主席陶妍上海海洋大学教授委员杨靖亚上海海洋大学副教授委员中国科学院王勇教授委员植物生理生态研究所上海沈李科工贸沈彦萍研究员委员有限公司曲映红上海海洋大学副教授秘书上海海洋大学食品答辩地点答辩日期2015.6.10学院A210上海海洋大学硕士学位论文不同功能肽修饰的聚乙烯亚胺衍生物作为基因载体的研究摘要基因治疗的本质是用基因载体

4、携带目的基因进入靶细胞，通过遗传学或分子生物学技术以纠正或补偿基因缺陷和异常引起的疾病，从而达到治疗各种疾病的目的。基因治疗作为一种新的治疗手段，可以治疗包括癌症、心血管疾病和遗传性疾病等多种疾病，目前的研究主要集中于肿瘤的治疗。寻找安全高效的基因载体是基因治疗的关键之一。基因载体分为病毒型基因载体和非病毒型基因载体两大类。非病毒载体通过理化方法介导基因转移，具有无传染性、化学结构可控、不限制载体容量及容易于大量制备等特点。与病毒载体相比，它还具有低毒性、低免疫性、所携带的目的基因不会整合至宿主细胞基因组等优势。因此，

5、非病毒载体领域近年来被广泛研究。聚乙烯亚胺（polyethylenimine,PEI）因其“质子海绵作用”而成为研究最广泛的一种聚阳离子非病毒基因载体。然而PEI在应用中存在三个突出问题：第一，聚合物的转染效率与细胞毒性不一致：即高分子量PEI转染效率高，细胞毒性大；而细胞毒性小的低分子量PEI，转染效率低。第二，体液稳定性与穿膜能力不一致：为了增加PEI体液稳定性而增加聚合物的亲水性，会导致PEI的穿膜能力降低，从而不利于目的基因的递送。第三，PEI的细胞靶向性差：PEI通过静电相互作用与细胞结合，I上海海洋大学硕士

6、学位论文因此无法识别特定细胞，靶向性欠缺。普朗尼克(Pluronic)是聚氧乙烯—聚氧丙烯—聚氧乙烯(PEO-PPO-PEO)组成的三嵌段共聚物。具有无毒、无刺激、无免疫原性、可溶于体液等优点，是制备聚合物胶束的常用材料之一。普朗尼克内部的PEO链与PPO链的比例可调，随着PEO链比例增高，该化合物疏水性越弱，反之，则疏水性越强。普朗尼克在水溶液中自发形成多分子胶束，所形成的胶束尺寸和病毒相仿，适合在体内传输。整合素是细胞表面受体的主要家族，是一种介导细胞和其外环境之间的跨膜受体。整合素是由α和β两个亚单位形成的异二聚

7、体，由它们相互组合形成的整合素有20余种。其中，整合素αvβ3高效表达在多种肿瘤细胞表面和肿瘤新生血管的内皮细胞中，而在普通细胞中罕有表达，因此，整合素αvβ3已成为抗肿瘤药物的靶点。RGD肽是含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽链，能以一定的亲和力结合整合素αvβ3，为肿瘤治疗的靶向性提供了新的策略。细胞穿膜肽可以在不损坏细胞膜的情况下穿过细胞膜进入细胞质甚至细胞核。同时，它还可以介导DNA、多胺类物质进入细胞内。TAT（transactivator,Tat）是编码HIV复制和基因表达所必须的

8、反式激活蛋白，是常见的三种细胞穿膜肽之一。TAT中49-57位氨基酸残基arg-lys-lys-arg-arg-gln-arg-arg-arg（RKKRRQRRR）组成的线性序列可以完全行使细胞穿膜功能，这是TAT肽既有穿膜特性又无细胞毒性的最小片段。大分子物质通过核孔复合物在细胞浆和细胞核之间II上海海洋大学硕士学位论文转运是一