卵母细胞玻璃化冷冻对卵子特异性基因表达的影响

《卵母细胞玻璃化冷冻对卵子特异性基因表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文卵母细胞玻璃化冷冻对卵子特异性基因表达的影响Impactofoocytevitrificationonexpressionofoocyte-specificgenes研究生郎婧雯学号1127209175指导教师冯云研究方向卵母细胞冷冻学科专业妇产科学学位类型科学型硕士学位培养单位瑞金医院答辩日期2015年4月二〇一五年四月I卵母细胞玻璃化冷冻对卵子特异性基因表达的影响Impactofoocytevitrificationonexpressionofoocyte-specificgenes研究生姓名郎

2、婧雯研究生学号1127209175指导教师冯云教授学科专业妇产科学培养单位上海交通大学医学院附属瑞金医院研究方向卵母细胞玻璃化冷冻安全性申请学位级别科研型硕士学位资助基金项目上海市科委（10JC1410800）II上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到

3、本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年ｒ月５日上海交通大学学位论文版化使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。□。保密，在＿年解密后适用本授权书本学位论文属于不備＂＂（请在Ｗ上方框内打Ｖ）；学位论文作

4、者签名：＾指导教师签名；或厂月０日期：年５月至日日期Ｔ：上海交通大学医学院2012级硕士学位论文卵母细胞玻璃化冷冻对卵子特异基因表达影响摘要近年来辅助生育技术（assistedreproductivetechnology,ART）及其衍生技术迅速发展，从最初的体外受精-胚胎培养（IVF-ET），到逐渐发展成熟的单精子卵泡浆内注射（ICSI）、冷冻胚胎移植（FET），再到近年来不断推广应用的胚胎植入前遗传学诊断/筛查（PGD/PGS）等，生殖相关技术难题逐渐得到攻克，并使越来越多的不孕不育夫妇从中受益。配

5、子和胚胎冷冻技术是生育力保存和辅助生殖领域的重要组成部分，其中胚胎的程序化冷冻和玻璃化冷冻目前已常规应用于世界各地的辅助生育中心，而卵母细胞因其体积大、含水量多、细胞核无核膜包绕保护、膜的渗透性低等特点，被相关领域研究者认为是最难成功冻融的细胞类型。既往多项研究表明，在卵母细胞的冻存和复苏中，玻璃化冷冻技术较程序化慢速冷冻技术更为高效，由此可见，卵母细胞玻璃化冷冻技术的成功应用不仅对人类辅助生育技术的完善和发展有重要意义，对核移植工程和珍稀物种生殖资源的保存亦有重要推进作用。玻璃化冷冻技术是应用高浓度冷冻保护剂

6、置换胞液中的水分，使细胞在超速冷冻降温过程中避免胞内冰晶形成进而导致冷冻损伤的技术。然而，卵母细胞超快速冻融过程和玻璃化冷冻保护剂本身均会对卵母细胞内部超微结构及附属结构（如透明带、纺锤体、细胞骨架I上海交通大学医学院2012级硕士学位论文等）带来一定损伤，进而影响复苏率、体外受精后的受精率及早期胚胎发育潜能。国内外在卵母细胞冷冻技术领域的研究多集中于比较两种冷冻方法（程序化慢速冷冻及玻璃化冷冻）或不同冷冻载体的冷冻效率、冷冻复苏体系的建立和改进等方面，针对冷冻技术对卵母细胞产生影响的具体机制如基因表达、表观遗

7、传修饰等方面则研究较少。卵母细胞特异性发育相关基因是一类卵母细胞内特有的、参与卵泡生成与成熟、受精与早期胚胎发育过程的关键基因。而目前国内外将这类基因表达结合玻璃化冷冻技术的研究很少。本研究将成熟期（MII）卵母细胞分别行冷冻-复苏液处理和玻璃化冷冻-复苏，与新鲜MII卵母细胞比较体外受精后早期胚胎发育情况及卵母细胞特异性发育相关基因H1foo、Bmp15、Gdf9、Sohlh2、Nobox表达水平，探索玻璃化冷冻-复苏液毒性及玻璃化冷冻-复苏技术对小鼠成熟期卵母细胞体外受精后早期胚胎发育潜能及卵母细胞特异性发

8、育相关基因表达的影响，并通过比较H1foo-α基因在新鲜及玻璃化冷冻-复苏后MII期卵母细胞中的甲基化水平差异，初步探索玻璃化冷冻影响卵子特异性组蛋白H1foo表达的机制。本研究首先将C57BL/6小鼠成熟期卵母细胞随机分为新鲜对照组、冷冻复苏液处理组及玻璃化冷冻复苏组，各组分别取40枚进行卵子特异性基因H1foo、Bmp15、Gdf9、Sohlh2、Nobox的mRNA表达水平。发现