小鼠卵母细胞玻璃化冷冻对dna甲基化的影响

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1、分类号：单位代码：密级：学号：学位论文小鼠卵母细胞玻璃化冷冻对甲基化的影响研究生程柯仁指导教师朱士恩教授合作指导教师：申请学位门类级别农学博士专业名动物？遗传育种与繁殖研究方配子与胚胎生物技术所在学动物利技学院二零一五年六月分类号：单位代码：】密级学号：学位论文小鼠卵母细胞玻璃化冷冻对甲基化的影响研究生程柯仁指导教师失士恩教授合作指导教师晶漏申请学位门类级别农学博士专业名动物遗传育种与繁殖研究方配子与胚胎生物技术所在学动救？利技学院二零一五年六月ChinaAgriculturalUniversityPh.DDissertationTheeffectofmouseoocytevi

2、trificationonDNAmethylationCandidate:KerenChengSupervisor:ShienZhuCollegeofAnimalScienceandTechnologyChinaAgriculturalUniversityBeijing100193June,2015项目资助情况本研究由博士点基金项目编号国家自然科学基金项目编号资助独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教

3、育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：时间：年月日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名：时间：年月时间：年月中国农业人学硕上学位论文摘要摘要为探讨

4、玻璃化冷冻保存对卵母细胞甲基化的影响，本实验首先研究了小鼠期卵母细胞玻璃化冷冻解冻后印记基因和差异甲基化区域甲基化状态，同时研究了卵母细胞解冻后与甲基化相关酶的相对表达结果表明，和新鲜卵母细胞相比，小鼠成熟的卵母细胞玻璃化冷冻解冻后其基闪组印记基闪和差异甲基化区域甲基化模式并没有发生改变，—甲基化相关的酶和相对表达莆均显著下降（，甲基化相关的酶相对表达足显荠下降尸。其次，检测了冷冻卵母细胞经体外受精获得的獎胚基闪组中印记基闪差异甲基化区域的甲基化模式，以及甲基化转移酶和二种与甲基化相关的酶（和、的相对表达。结果显示，整体甲基化水平在冷冻组（和新鲜组之间差异不显荠（尸〉，冷冻组平

5、均甲基化水平为显著低丁新鲜组（尸冷冻组平均甲基化水平为显荠低丁新鲜组尸。两组间，和刃相对表达讀差异不显荠（尸冷冻组见相对表达量显著低丁新鲜组尸。冷冻组热的相对表达幫和新鲜组相比差异不显著继而探讨了玻璃化冷冻卵母细胞产生的甲基化模式的改变能否影响到后续植入胚胎原始生殖细胞中的甲基化重编程，由冷冻卵母细胞经体外受精得到的胚胎移枯到受体鼠内，检测了胚胎中原始生殖细胞基闪组中印记基闪和的差异甲基化区域的甲基化模式，以及反转座的逛复序列’和的甲基化状态。结果显示，雌性胚胎原始生殖细胞中差异甲基化区域的甲基化平均水平，其冷冻组显著低丁新鲜组而在雄性胚胎原始生殖细胞中两者无显著性差异，均处丁

6、完全的未甲基化状态；（在冷冻组中，雌性胚胎原始生殖细胞仍冇的甲基化，和新鲜组（相比差异显荠而冷冻绀雄性胚胎原始生殖细胞甲基化水平为显荠高丁新鲜鉬；差异甲基化区域的甲基化状态在时，雌性和雄性胚胎原始生殖细胞中均处丁未甲基化状态；（冷冻组雌性胚胎原始生殖细胞中’位点的甲基化平均值为，和新鲜绀之间无显界性差异。而雄性胚胎原始生殖细胞中，其冷冻组的甲基化水平显荠高丁新鲜绀尸冷冻绗雌性胚胎原始生殖细胞丨位点的甲基化水平（显著低丁新鲜组雌性（而在冷冻组雄性胚胎原始生殖细胞中，此位点的甲基化水平（显为高丁新鲜组（尸。综上所述小鼠期卵母细胞经玻璃化冷冻后不会影响其印记基闪差异甲基化冈域甲基化，

7、但冷冻后卵母细胞会导致和相对含呈卜降；由冷冻卵母细胞得到的囊胚其印记基甲基化水平显方降低，且影响见的表达该。由冷冻卵母细胞得到的胚胎原始生殖细胞尸甲基化投式异常，并导致反转座子的复序列模式异常。关键词：小鼠卵母细胞，玻璃化冷冻，甲基，印记基闪，反转座中因农业人学傅丨学位论文，尸，尸尸，’中国农业大学博士学位论文，中国农业大学博士学位论文目录目录巾觀插图与附表清单棘第一部分文献综述综述一哺乳动物卵母细胞冷冻保存技术研究进展冷冻的基本原则冷冻保存细胞的首次应用慢速冷冻和玻璃化冷冻的发展卵母细胞冷