玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞透明带的影响

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1、巧古学位论义玻璃化冷冻对小鼠卵巧细胞透明带的影响卢俊求爲＾乂聲Ｘ＊ｆ二〇—五年五月■，＂＇ｊ＜Ｋ．＇：＇：．二ｒ．．．？．－．．．‘．．．‘■，，．ｖ＇．－Ｊ．．＇．‘－＇．■＾淀＾１－＇；．分类号Ｓ８１４乂密级公开ＵＤＣ硕击学位论文玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞透明带的影响卢俊求学科专业某础兽医指导教师王晓丽教授论文答辩日期２０１５．５．２２学位授予日期答辩委员会主席潘红平教授广西大

2、学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得。的研究成果除已特别加，论文不包１＾标注和致谢的地方外含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即；学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ将学位论文

3、的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可Ｗ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。ｄｖ保密。＂＂（请在Ｗ上相应方框内打Ｖ）－论文作者签名：号＾曰期；成丈／來指导教师签名；曰期．＞ｆ〔（ｇ穿一作者联系电话：电子邮箱：玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞透明带的影响摘要为了探索玻璃化冷冻对卵母细胞透明带物理特性及生化特性的影响，从中探寻玻璃化冷冻复苏后卵母细胞受精率降低的影响因素，从而为改进玻璃化冷冻方法，提髙玻璃化冷冻复苏后卵母细胞受精率提供研究思路和理论依据。因此

4、本研究选择四组应用最广泛的玻璃化冷冻保护液对小鼠卵母细胞发育进行观察，选取对卵母细胞发育能为损伤最小的玻璃化冷冻方法，观察玻璃化冷冻前后透明带物理特性及生化特性的变化，采用巧光免疫组化观察跨膜蛋白ＣＤ９在玻璃化冷冻后的损伤情况及恢复效果。结果发现：１、四组冷冻保护液对小鼠卵母细胞均有低毒性作用，各组复苏存活率、受精率均虽著低于对照组（户＜０．０５）。此外，３组卵裂率与对照组差异显著＜０．０５），４组寞胜率与对照组差异显著（Ｐ＜〇．〇５）。综合各项指标，选取对卵母细胞发育能力损伤最小的〇？ｉ１ＨＭ＋７．５％（ＤＭＳＯ＋ＥＧ）ＨＭ＋１５ｍｏＩ／组

5、，即配方为：，５／〇（ＤＭＳＯ＋ＥＧ）＋０．ｌＳｕ，作为冷冻保护液来进行下一步的实验研究。２、在显微镜下，通过Ｈｏｆｉｎａｎ系统观察记录冷冻组、暴露组和对照组中卵母细施各观测点透明带厚度数值，并根据公式计算出各组卵母细胞透明带厚度和厚度变量。经统计分析发现（６．０５ｍ）显著高于对照组（５．７７ｍ）（户＜０．０５），冷巧组透明带厚度ｎＭ，其余各组间无显著性差异；透明带厚度变量各组间差异不显著。结果表明，玻璃化冷冻，对卵母细胞透明带厚度变量影响不大对卵母细胞透明带厚度有影响。３、在偏振光显微镜下，通过ＯＣＴＡＸＰｏｌａｒＡＩＤＥ系统得到各組实

6、时显示的双折射分值。经统计分析得知，冷冻组双折射分值（化３）和对照组０．２２）相比差异显著（户＜０．０５）、与暴露组（２．０２）之间差异显著（户＜０．０５），暴露组和对照组无显著差异。结果表明，玻璃化冷冻显著降低了卵母细胞透明带双折射分值。４、对透明带厚度、厚度变量和双折射分值间相关性进行分析，结果表明，透明带厚度和双折射分值间显著相关。因此，在条件不足的情况下，可通过测量透明带厚度体现双折射分值所指示的结果。５、对相同数量冷冻组、暴露组和对照组卵母细胞透明带提取物进行蛋白质浓度－－ｉＢＣＡ－（法）及可溶性糖浓度（硫酸苯龄法）测定。冷冻组蛋白

7、浓度为０．２１８ｍｇｍＬ与．２３９相比、与暴露组（０．２２３相比差异都不显著对照组（０。冷冻组－－’ｉ０００８－ｉ可溶性搪含量为０．０４１ｍｇｍＬ，显著髙于对照组（．ｍｇｍＬ）和暴露组（０．０１８－．ｍＬｉ＜ｍ）（Ｐ０．０５）。结果显示ｇ，玻璃化冷冻对卵母细胞透明带中蛋白质含量影响不大；Ｉ玻璃化冷冻对透明带中可溶性糖含量有虽著影响。６、通过巧光免疫组化，观察冷冻组、暴露组和对照组卵母细胞跨膜蛋白ＣＤ９表达情况。结果发现，冷冻组Ｉ级细胞数明显减少，并且出现ＩＶ级细胞。玻璃化冷冻会显著