冷冻保存对猪卵母细胞凋亡模式与基因表达的影响

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1、分类号Ｓ８１４．８？学号適麵＿兩请泉違义參博壬学位论文冷巧保存对猪卵巧细胞调亡模式与基因表达的影响戴建军指导教师商莱教授专业名称临床兽医学研究方向动物生殖调控—答辩日期二０五年十一月ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＣＲＹＯＰＲＥＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＮＴＨＥＡＰＯＰＴＯＴＩＣＰＡＴＨＷＡＹＳＡＮＤＧＥＮＥＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＳＩＮＰＩＧＯＯＣＹＴＥＳＢｙＤＡＩＪｉａｎｕｎｊＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂＰｒｏｆ．ＲＵＩＲｏｎｐｙ

2、ｇ乂ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙ＊ＩｎＩａｒｔｉａｌＦ山ｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓＦｏｒＴｈｅＤｅｒｅｅｏｆＰｈ．Ｄ．ｏｆＡｒｏｎｏｍｇｇｙＣｏｍｌｅｔｅｄｉｎＳｅｋｍｂｅｒ２０１５ｐｐＣｏｍｍｅｎｃｅｍｅｎｔｉｎＮｏｖｅｍｂｅｒ２０１５原创性声明，本人郑重声明，独立进行研：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下究工作所取得

3、的成果，本论文不包含任何其他。除文中已经注明引用的内容外个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。〇／学位论文作者（需亲笔）签名：年ｎ月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅。本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据巧进行检

4、索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。＂＂（请在Ｗ上方框内打Ｖ）＾２ｉ：｜学位论文作者（需亲笔）签名；年。月１０日导师（需亲笔）签名：０式年月１日＾ｆｊ本研究由国家自然科学基金（项目批准号３１３７２３１５）国家转基因重大专项（２０１３ＺＸ０８００６－００５）上海市农委青年人才成长计划（沪农科青字（２０１４）第１－３２号）提供资助口录目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴ

5、Ｖ符号及缩格语ＸＩ前胃ＸＩＩＩ第一部分文献综述一第章影巧猪巧母细施冷冻保存的因素１１配子冷冻保存的意义１２猪卵母细胞冷冻保存现状及技术瓶颈２３影响卵巧细胞冷冻保存的巧素３３１３．冷冻载体３．２液氮温度４３．３卵母细胞玻璃化冷冻保护剂５３．４卵母细胞发巧阶段６３．５去脂处理８３．６抗性诱导处理９３．７冻卵的核与细胞器移植９参考文献１０第二章巧母细胞冻后的细胞调亡模式１９１细胞调亡模式研究进胆１９１１．外

6、源性细胞调亡途径２０２线粒体介巧的细胞调ｔ途径２０１．１．３Ｃａｓｐａｓｅ级联反应２１２卵母细胞及化胎的发育与细胞调亡２１２１Ｂｃｌ２２．家族与早期化胎发育２２．２热休克蛋白Ｐｓ与早期化胎的发育２２（ＨＳ）３冷冻保存对卵母细胞和化胎调ｔ影响的最新研究进展２３４冷冻保存对胚胎和卵母细胞基因表达的影响２４参考文献２５Ｉ冷冻保存对猪卵母细胞调ｔ模式与基因表达的患巧第二部分试验研究第三章玻璃化巧冻对猪ＭＨ期巧母细胞线粒体功能与调亡的影巧

7、２９１试验材料３０１．１主要试剂３０１３１．２设备与耗材１３２－３试剂的配制２方法３４２．１猪卵巢卵巧细胞收集３４２．２猪卵母细胞体外成熟３４２．３卵母细胞玻璃化冷冻３５２．４卵母细胞解冻与检测３５２．５孤雌激活３７－ｎ３）染色２．６卵母细胞的罗丹明１２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ巧２／７透射电镜观察３７２、－．８卵母细胞ＲＮＡ提取反转录和ＲＴＰＣ民检测２．９数据处理３９３结果３９３．１冷冻对卵母细胞线

8、粒体膜电位的影响３９３．２冷冻对卵母细胞线粒体ＡＴＰ含量和ＲＯＳ水平的影响４０３．３冷冻对卵巧细胞线粒体分布和超微结构的影响４１３．４冷冻对卵母细胞早期调亡和体外发育能力的影响４３３．５冷冻对冻后卵母细胞调亡和线粒体功能相关基因表达的影响４５４龍４５５小Ｓ４７参考文献４９第四章巧ＭＨ巧巧母细化玻巧化冷冻后的巧亡模式５５１试验材料５５１５．１主要试剂５１．２设备与耗材如