白藜芦醇对猪冷冻精子细胞凋亡及凋亡途径的影响

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1、学校代码：10264研究生学号：M120150326上海海洋大学硕士学位论文题目：白藜芦醇对猪冷冻精子细胞凋亡及凋亡途径的影响英文题目：Effectsofresveratrolonapoptosisandapoptoticpathwaysoffrozenboarspermatozoa专业：渔业研究方向：动物胚胎工程姓名：王昕指导教师：张德福二O一五年六月二十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含

2、任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：

3、日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注李家乐上海海洋大学教授主席刘惠莉上海市农业科学院研究员委员易建中上海市农业科学院研究员委员俞菊生上海市农业科学院研究员委员孙晓梅上海市农业科学院助理研究员秘书答辩地点上海市农业科学院答辩日期2015.6.5上海海洋大学硕士学位论文白藜芦醇对猪冷冻精子细胞凋亡及凋亡途径的影响摘要低温冷冻解冻使液氮保存的猪精子细胞发生严重的凋亡，常见的凋亡途径——死亡受体外源性途径和线粒体内源性途径均可能在冻后精子中发生，介导冻融精子发生凋亡而降低精子质量。本实验在实验室之前研究基

4、础上，通过对凋亡途径相关基因的表达情况研究探索凋亡发生的可能相关途径，并探索在冷冻保护剂中添加抗氧化剂白藜芦醇对冷冻解冻后猪精子细胞凋亡和凋亡途径的影响。研究结果：1.冷冻精子TUNEL染色后的凋亡率（80.4%）与新鲜组（9.7%）相比显著升高（P<0.05）；与新鲜组精子内ROS绿色荧光比率相比，冷冻组（58.2%）亦显著高于新鲜组（P<0.05）；与新鲜组0.926μmol/L的ATP浓度相比，冷冻组精子的ATP浓度（0.247μmol/L）则显著下降（P<0.05）；qRT-PCR检测结果显示，冷冻组中TNF-α、Fas、Caspase家

5、族、P53和Bax等基因相对表达量升高，其中Fas、P53、TNF-α、caspase8和caspase9等相对表达量升高显著（P<0.05）；BCL-2、BIRC-5、MnSOD、CuZnSOD和SURVIVN等基因相对表达量降低，其中BIRC-5、MnSOD、SURVIVN降低显著（P<0.05）。2.向冷冻剂中添加白藜芦醇工作液，使其在冷冻剂中的终浓度分别为12.5μM,25μM,50μM和100μM，并设置0μM作为空白对照，比较各组冻融精子活率，顶体和质膜完整情况。结果表明白藜芦醇终浓度为50μM组的精子活力，质膜完整率和顶体完整率均显

6、著高于其余各添加组（P＜0.05），并显著高于0μM组的精子质量。精子各指标随着白藜芦醇浓度增大而升高，呈现浓度依赖性，但当白藜芦醇浓度过高（≥100μM）时精子质量显著下降（P＜0.05）。3.冻融精子经Caspase原位荧光染色后，添加白藜芦醇组的实验组冻融精子凋亡率为29.0%，与未添加白藜芦醇组的对照组（86.3%）相比显著降低（P<0.05）；实验组58.6%的ROS绿色荧光比率亦显著低于对照组（88.4%）（P<0.05）；与对照组精子mRNA各基因相比，caspase-8相对表达量降低，Fas,P53,TNF-α,Bax,caspa

7、se-3，caspase-9相对表达量显著降低（P<0.05）；CuZnSOD相对表达量升高，Bcl-2，MnSOD，SURVIVN等显著升高（P<0.05）。I上海海洋大学硕士学位论文关键词：猪，精液冷冻，凋亡，凋亡通路，白藜芦醇II上海海洋大学硕士学位论文EffectsofresveratrolonapoptosisandapoptoticpathwaysoffrozenboarspermatozoaABSTRACT1.Inordertoinvestigatetheeffectsofcryopreservationonboarspermato

8、zoaapoptosisandapoptoticpathway,theflowcytometrywasusedtodetecttheap