腺苷体外对人肝癌hepg2细胞凋亡的诱导作用及其作用机制

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1、中国药理学与毒理学杂志２００８年６月；２２（３）：２０５－２１１ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００８Ｊｕｎ；２２（３）：２０５－２１１·２０５·腺苷体外对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞凋亡的诱导作用及其作用机制１２１１３吴灵飞，苏剑东，李国平，蒲泽锦，冯家琳（汕头大学医学院第二附属医院１．消化内科，３．信息科，广东汕头５１５０４１；２．遵义医学院第五附属医院消化内科，广东珠海５１９１００）摘要：目的研究腺苷及其代谢途径对人肝癌文章编号：１０００３００２（２００８）０３０２０５０７ＨｅｐＧ２细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将ＤＯＩ：１０．３８６７／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００３０

2、０２．２００８．０３．００９－１腺苷２．０ｍｍｏｌ·Ｌ作用于ＨｅｐＧ２细胞２４和４８ｈ，采用流式细胞术（ＦＣＭ）测定细胞周期及凋亡率；观手术切除是目前治疗早期肝癌惟一有效的方察腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫、腺苷脱氨酶抑制法，但大多数患者就诊时已达病程中晚期，手术疗剂红９（２羟基３壬烷基）腺嘌呤（ＥＨＮＡ）和腺苷效受限，因而寻找新的治疗方法尤为重要。随着对激酶抑制剂５′氨基５′脱氧腺苷（ＡＭＤＡ）对腺苷抑肿瘤发生机制的深入研究，探讨诱导肿瘤细胞凋亡制细胞存活的影响，应用ＭＴＴ法测定细胞存活率；的方法成为提高临床疗效的新思路。核苷类物质的［１］应用Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹法检测Ｐ

3、５３和Ｂｃｌ２蛋白的细胞毒作用是近年的研究热点，腺苷（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）表达。结果腺苷与ＨｅｐＧ２细胞作用２４和４８ｈ，［２］抗癌作用的研究结果更令人鼓舞，但是在不同的ＨｅｐＧ２细胞出现特征性的亚二倍体凋亡峰，细胞凋细胞株中其作用途径不同，有些通过受体途径介亡百分率分别由对照组的（１．２±０．４）％和（４．１±导［３］，有些则转入胞内起作用［２］。ＨｅｐＧ２细胞来源１．６）％增加到（２４．３±４．８）％和（３８．６±７．４）％，细于人肝癌组织，与正常肝细胞在细胞增殖动力学上胞周期阻滞于Ｇ０／Ｇ１期。腺苷与ＨｅｐＧ２细胞作用具有同源性。目前有关腺苷对ＨｅｐＧ２细胞生长抑２４ｈ明显抑制

4、细胞存活，Ｐ５３表达明显增强，Ｂｃｌ２制及凋亡的研究报道甚少。作者以往研究发现，４表达降低。预先分别给予双嘧达莫，ＡＭＤＡ和种腺苷特异性或非特异性受体阻断剂对ＨｅｐＧ２细ＡＭＤＡ＋双嘧达莫处理后，各处理组ＨｅｐＧ２细胞存胞凋亡均无影响，腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫活率较腺苷组升高，细胞凋亡百分率和Ｐ５３表达降（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ，Ｄｉｐ）能明显减少凋亡细胞的数量，表低，Ｂｃｌ２表达无明显变化；ＥＨＮＡ预处理组细胞存明在ＨｅｐＧ２细胞腺苷是通过细胞膜转运体转运到活率、细胞凋亡百分率、Ｐ５３和Ｂｃｌ２表达与腺苷组细胞内发挥作用［４］，但腺苷转运后与凋亡相关的代比较均无明显变化。结

5、论腺苷可诱导ＨｅｐＧ２细谢途径及机制尚不清楚。本研究观察了膜转运体抑胞凋亡，腺苷在胞内可能通过腺苷激酶而不是通过制剂Ｄｉｐ、腺苷脱氨酶抑制剂红９（２羟基３壬烷转氨酶的代谢途径参与诱导细胞凋亡的过程。腺苷基）腺嘌呤〔ｅｒｙｔｈｒｏ９（２ｈｙｄｒｏｘｙｌ３ｎｏｎｙｌ）ａｄｅｎｉｎｅ，对ＨｅｐＧ２细胞凋亡的诱导作用还可能与其增加Ｐ５３ＥＨＮＡ〕和腺苷激酶抑制剂５′氨基５′脱氧腺苷（５′蛋白表达有关。ａｍｉｎｏ５′ｄｅｏｘｙａｄｅｎｏｓｉｎｅ，ＡＭＤＡ）体外预处理对腺关键词：腺苷；细胞凋亡；细胞周期；细胞，ＨｅｐＧ２苷诱导细胞凋亡的影响，以探讨腺苷代谢通路在腺苷诱导

6、细胞凋亡中的作用，以及腺苷诱导细胞凋亡中图分类号：Ｒ９７９．１的作用机制。文献标识码：Ａ收稿日期：２００７１０２９接受日期：２００８０３０６１材料与方法基金项目：广东省自然科学基金（６０３３５０８）１．１药物、试剂及仪器作者简介：吴灵飞（１９６４－），男，湖北省武汉市人，医学硕士，主任医师，主要从事消化道肿瘤研究。ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ公司），９６孔和１２孔细胞培联系作者Ｅｍａｉｌ：Ｌｉｎｇｆｅｉｗｕ＠２１ｃｎ．ｃｏｍＴｅｌ：养板（Ｃｏｓｔａｒ公司），小牛血清（杭州四季青生物工（０７５４）８９１５８１０Ｆａｘ：（０７５４）８３４６５４３程材料有限公司），噻唑蓝（ＭＴ

7、Ｔ）、碘化丙啶（ｐｒｏ·２０６·ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００８Ｊｕｎ；２２（３）－１－１－１ｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）、ＥＨＮＡ、ＡＭＤＡ和腺苷（ＳｉｇｍａＬ，Ｄｉｐ２０μｍｏｌ·Ｌ＋ＡＭＤＡ１００μｍｏｌ·Ｌ预孵育公司），Ｐ５３和Ｂｃｌ２Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹法检测试剂盒３０ｍｉｎ；对照组及腺苷组加入等体积０．１％ＤＭＳＯ。（ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司），硝酸纤维素膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司），另设培养液对照孔，加１