二甲双胍体外诱导人肝癌Huh-7细胞凋亡及其作用机制-论文.pdf

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1、·742·中华肿瘤杂志2013年1O月第35卷第10期ChinJOncol,October2013,Vo1.35,No.10.基础研究.二甲双胍体外诱导人肝癌Huh一7细胞凋亡及其作用机制林芬严威文霆吴国洋【摘要】目的探讨二甲双胍对人肝癌Huh-7细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法二甲双胍干预Huh-7细胞后,四甲基偶氮唑蓝(MTI")法检测其对细胞活力及生长抑制的影响;Westernblot检测凋亡相关蛋白及CD133蛋白的变化;流式细胞术检测细胞凋亡及肝癌干细胞相关标志物CD133的表达;无血清悬浮培养观察二甲双胍对肿瘤干细胞球形成的影响;逆转录聚合酶链反应(RT.P

2、CR)检测其对肿瘤干细胞相关基因CD133、B-catenin、ABCG2mRNA表达的影响。以加入与实验组相同的培养液但未给予药物处理的组为对照组。结果MTr检测结果显示,与对照组比较,随着二甲双胍浓度的增高,肝癌Huh-7细胞的增殖率下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。10mmol/L二甲双胍干预48h后肝癌Huh-'/细胞的早期凋亡率为(22.29±0.80)%,对照组的早期凋亡率为(6.704-0.50)%,差异有统计学意义(P<0.05);10mmol/L二甲双胍干预48h后肝癌Huh-'/细胞的晚期凋亡率为(13.874-1.20)%,对照组的晚期凋亡率为(1.

3、10±0.02)%,差异有统计学意义(P<0.05)。25mmolfL二甲双胍干预48h后细胞的早期凋亡率为(15.28±2.10)%,晚期凋亡率为(25.89±2.30)%,均高于对照组(均P<0.05)。Westernblot检测结果显示,25mmoL/L二甲双胍干预Huh一7细胞48h后,P—Akt、Bcl-2/Bax比值表达下调,PTEN表达上调。随着二甲双胍浓度的增加,CD133蛋白的表达下调。流式细胞仪检测结果显示,25mmoL/L二甲双胍干预Huh-7细胞48h前后,Huh-'/细胞中CD133细胞的表达率分别为(40.7±2.1)%和(14.64-1.85)%(P<

4、0.05)。在低黏附培养皿、无血清培养液的生长环境中,对照组细胞球体积较大,中心厚重,周围清亮,折光度强;1Ommol/L二甲双胍组细胞球体积较小,球体折光度较弱,细胞球数量少于对照组。RT.PCR检测结果显示,肿瘤干细胞相关基因CD133、B—eatenin、ABCG2mRNA表达水平均下调。结论二甲双胍能显著抑制人肝癌Huh-7细胞增殖,促进凋亡。其机制可能与抑制肝癌PI3K/Akt信号通路和CD133肿瘤干细胞的表达有关。【主题词】二甲双胍;肝肿瘤;细胞凋亡;细胞增殖;PI3K/Akt;CD133Meformininducesapoptosisinhepatocellular

5、carcinomaHuh-7cellsinvitroanditsmechanismLINFen,YANWei,WENTing,WUGuo—yang.DepartmentofGeneralSurgeryZhongshanHospital。XiamenUniversity.Xiamen36loo4.ChinaCorrespondingauthor:UGuo—yang,Email:wuguoyangmail@aliyun.com—【Abstract]0bjectivetoinvestigatetheefectsofantidiabeticdrugmetforminonproliferat

6、ionandapoptosisinhumanhepatocellularcarcinomacelllineHuh-7cells.MethodsHuh-7cellsweretreatedwithmetforminatdiferentconcentrations.CellviabilitywasdeterminedbyMT'Fassay.CellapoptosisandCD133expressionrateweredetectedbyflowcytometery(FCM).ExpressionsofPTEN,Akt,P.Akt,Bcl一2,Baxproteinsintheceilswe

7、remeasuredbyWesternblot.TheefectofmetforminontheheDatoslc,hereformationwasobservedintl1eserum.freesuspensionculture.Reversetranscription.polymerasechainreaction(RT—PCR)wasusedtovalidatetheexpressionlevelsofstemnessmarkergenesCD133,B—eat

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