去甲基化机制在腺苷及同型半胱氨酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用-论文.pdf

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1、中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2014Jul；30(7)：973～9。973·网络出版时间：2014—6—2416：35网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．3969／j．issn．1001—1978．2014．07．020．html去甲基化机制在腺苷及同型半胱氨酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用项梦琦，刘丽璇，邓巍，周小涛，陈沛锐，郭益添，叶艳清，蒲泽锦，吴灵飞(汕头大学医学院第二附属医院消化内科，广东汕头515041)doi：10．3969／j．issn

2、．1001—1978．2014．07．020愈，大多数进展期肝癌则因对常规化疗药物耐药而文献标志码：A文章编号：1001—1978(2014)07—0973—07疗效不佳，因而寻找新的治疗方法增加抗癌效果尤中国图书分类号：R329．25；R341．7；R342．4；R735．7为重要。核苷类物质如腺苷(adenosine，ADO)的细摘要：目的探索去甲基化机制在腺苷(ADO)及同型半胱胞毒性作用近年受到关注，它可诱导多种实体与血氨酸(HCY)诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法液肿瘤细胞凋亡，是有前景的抗癌药物⋯。我们前CCK8法检测不同

3、浓度腺苷(1．0、2．0、4．0tool·L)单独期研究证实，ADO通过膜转运体进入细胞内发挥细或者联合同型半胱氨酸作用肝癌HepG2细胞不同时间(6、胞毒性作用，其机制与内质网应激(endoplasmicre—12、24h)后细胞存活率；亦使用DNA甲基化酶抑制剂5-Aza—CdR观察其对细胞生长的影响。AnnexinV—FITC／PI双染法ticulumstress，ERS)凋亡途径有关。但是ADO检测细胞凋亡率，流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位：实触发凋亡的机制仍不清楚。目前，表观遗传学的研时荧光定量PCR及Western免疫印迹法分别

4、检测caspase-3、究表明，去甲基化作用可活化抑癌基因如p53而诱caspase一8caspase-9MDM一2、p53CytochromeCDNMT1DN—导癌细胞凋亡J。生理条件下，ADO可与同型半胱M33a、DNMT3b等因子的表达量。结果ADO联合HCY明氨酸(homocysteine，HCY)合成s一腺苷同型半胱氨酸显抑制HepG2细胞增殖，呈剂量和时间依赖性；不同浓度(s-adenosyIhomocystejne，SAH)而降低细胞内的甲基ADO联合HCY(1．0、2．0、4．0tool·L)作用HepG2细胞24化水平J。有

5、文献证实，体外联合使用ADO及h，细胞凋亡率分别为(18．63±1．25)％，(29．42±2．37)％，HCY可导致细胞内SAH水平增高，且比单独使用(42．47±3．09)％，均明显高于阴性对照组(1．30±0．82)％，ADO更为明显J。为了探讨细胞内甲基化代谢是P<0．01；联合用药组线粒体膜电位明显下降，分别从空白对否参与了ADO细胞毒性作用，我们采用ADO联合照组(674．15±82．8)％下降为(428．38±54．5)％、(297．78-4-30．5)％、(74．45±5．73)％，P<0．01；ADO联合HCY导HCY作用肝

6、癌HepG2细胞，另外，给予DNA甲基化致caspase一3、caspase一8、caspase-9、p53、CytochromeC表达上酶(DNAmethyltransferases，DNMTs)特异性抑制剂调，MDM-2表达下调。ADO联合HCY或5一Aza—CdR处理5一氮杂一2一脱氧胞苷(5-aza-2deoxycytidine，5-Aza—HepG2细胞均可抑制DNA(甲基化酶DNMT1、DNMT3a、DN—CdR)作为对照，观察对肝癌HepG2细胞生长的影MT3b)mRNA表达量。结论ADO与HCY联合作用引起响并探讨其作用机制。

7、了细胞内甲基化改变，低甲基化作用激活了p53及线粒体等1材料与方法凋亡通路，最终导致肝癌HepG2细胞凋亡。1．1药物和试剂5一氮杂-2．脱氧胞苷、同型半胱氨酸购自美国Sigma；腺苷购自美国Amerco；DMEM关键词：腺苷；同型半胱氨酸；5一氮杂一2．脱氧胞苷；甲基化；培养基及胎牛血清(Gibco，美国)；兔抗人B肌动蛋细胞凋亡；DNA甲基化酶；线粒体膜电位白、caspase一3、MDM一2、p53抗体、山羊抗兔多克隆二抗(SantaCruz，美国)；caspase-8、caspase-9抗体原发性肝癌是临床常见的恶性肿瘤，其特点是(Ce

8、llSignaling＼CST，美国)；CytochromeC(Abcam，恶性程度高，易复发转移，致死率在肿瘤中排名第3英国)；CCK8试剂盒购自El本同仁化工；