细胞色素c在氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡中的作用

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1、第１６卷第１１期２００７年１１月中国普通外科杂志ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙＶｏｌ．１６　Ｎｏ．１１Ｎｏｖ．　２００７　　文章编号：１００５－６９４７（２００７）１１－１０８１－０４·基础研究·细胞色素Ｃ在氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡中的作用杨建青（广西柳州市人民医院外科，广西柳州５４５００１）　　摘要：目的　检测细胞色素Ｃ在氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用，分析细胞色素Ｃ在 线粒体和胞浆中的分布及其与ｃａｓｐａｓｅ９活化的关系。方法　用１×１０－２ｍｏｌ／Ｌ的５ＦＵ处理ＨｅｐＧ２细 胞，分别作用２，４，８，１

2、６，２４ｈ，用荧光检测试剂盒检测ＨｅｐＧ２细胞凋亡过程中细胞色素Ｃ分布变化； Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｃａｓｐａｓｅ９的活化和细胞色素Ｃ在胞浆及线粒体中的分布。结果　氟尿嘧啶处理肝癌 细胞４ｈ后，ｃａｓｐａｓｅ９活性开始升高，于１６ｈ后达到高峰，与对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现ｃａｓｐａｓｅ９被蛋白酶水解切断后形成１０ｋＤ片段；细胞色素Ｃ在胞浆中的分布从４ ｈ后逐渐增加，１６ｈ最明显，而其在线粒体中的分布却正相反；细胞色素Ｃ的分布改变和ｃａｓｐａｓｅ９的活 化基本同步。结论　在氟尿嘧啶诱导肝

3、癌细胞凋亡过程中ｃａｓｐａｓｅ９被活化，并伴有细胞色素Ｃ自线 粒体中释放到胞浆，提示细胞色素Ｃ可能在Ｃａｓｐａｓｅ９的活化和肝癌细胞凋亡中起重要作用。 ［中国普通外科杂志，２００７，１６（１１）：１０８１－１０８４］关键词：肝肿瘤／病理学；氟尿嘧啶／治疗应用；凋亡；Ｃａｓｐａｓｅ９；细胞色素Ｃ中图分类号：Ｒ７３５．７　　　　文献标识码：ＡＴｈｅｒｏｌｅｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｉｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙ ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌＹＡＮＧＪｉａｎｑｉｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳ

4、ｕｒｇｅｒｙ，Ｐｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＬｉｕｚｈｏｕＣｉｔｙ，Ｌｉｕｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ５４５００１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｉｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙ ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ，ａｎｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｉｎｃｙｔｏｓｏｌａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄＣａｓｐａ

5、ｓｅ９ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｍａＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌａｔ１×１０－２ｍｏｌ／Ｌａｎｄ２，４，８，１６，２４ｈｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｃｈａｎｇｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｉｎ ＨｅｐＧ２ａｐｏｐｔｏｓｉｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＡｓｓａｙＫｉｔ；ａｎｄｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｃｌｅａｖａｇｅｏｆｃａｓｐａｓｅ９ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｉｎｃｙｔｏｓｏｌｏｒｉｎｍｉｔｏｃｈｏｎ

6、ｄｒｉａｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｆｏｕｒｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒｃｅｌｌｓｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ，ｔｈｅｃａｓｐａｓｅ９ａｃｔｉｖｉｔｙｉｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｇｒａｄｕａｌｌｙａｎｄｒｅａｃｈｅｄｔｈｅ ｐｅａｋａｔ１６ｈ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０１）．ＩｎＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ，ｃａｓｐａｓｅ９ｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅｃｌｅａｖｅｄｉｎｔｏ１０ｋ

7、Ｄｆｒａｇｍｅｎｔ，ａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｉｎｃｙｔｏｓｏｌ ｂｅｃａｍｅｍｏｒｅａｎｄｍｏｒｅｏｂｖｉｏｕｓｆｒｏｍ４ｈｏｎａｎｄｒｅａｃｈｅｄａｐｅａｋａｔ１６ｈ，ｂｕｔｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣ ｉｎｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｗａｓｏｐｐｏｓｉｔｅ．ＴｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｃｈａｎｇｅｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆＣａｓｐａｓｅ９ ｗｅｒｅｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｃａｓｐａｓｅ９ｗａｓａｃｔｉｖａｔｅｄｉ

8、ｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙ ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ，ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄｂｙｒｅｌｅａｓｅｏ