细胞色素c信号通路在胆道梗阻大鼠中性粒细胞凋亡调控中的作用.pdf

《细胞色素c信号通路在胆道梗阻大鼠中性粒细胞凋亡调控中的作用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、．2980．查堕堂!!旦笙鲞箜!塑竺竺!!!型!al1．!，5，No．19细胞色素C信号通路在胆道梗阻大鼠中性粒细胞凋亡调控中的作用冰邓通明，邓雪松，倪勇，邓浩源，汪长浩，黄文龙广州医科大学研究生学院(广州510182)；广东省深圳市第二人民医院肝胆外科(518035)【摘要】目的探讨细胞色素C(Cyt—c)信号通路在胆道梗阻大鼠中性粒细胞(PMN)凋亡调控中的作用。方法104只sD大鼠随机分为正常组(NO组)、假手术组(s0组)、胆总管结扎组(BDL组)、Cyt—c干预组(BDL+Cyt—C组

2、)，NO组不作任何操作，BDL组、BDL4-Cyt—c组予胆总管结扎，s0组不予结扎和切断胆总管，BDL十Cyt—c组则在结扎胆总管关腹后行尾静脉注射Cyt—C(20mg／kg)。SO、BDL和BDL+Cyt—C组分别予细分术后l2、24、48、72h等4个时相。检测外周血PMN数量，流式细胞仪测PMN凋亡率，分光光度法检测PMN胞质Caspase一8、Caspase一9及Caspase一3活化程度。结果BDL组各时相PMN凋亡率明显低于NO组和SO组相应时相，差异有统计学意义(P<0．05)；

3、与NO组和s0组各时相比较，BDL组Caspase一9和Caspase一3活性明显下降(P<0．05)；在BDL+Cyt—C组各时相中，Caspase一9、Caspase一3活性和PMN凋亡率均显著高于BDL组；进一步相关性分析表明，Caspase一9、Caspase一3活性与PMN凋亡率均呈正相关(r=0．943，P<0．01；r=0．949，P<0．01)。Caspase一8活性在NO组、SO组、BDL组、BDL4-Cyt—C组中变化不明显。结论胆道梗阻大鼠Cyt—c通路上游信号Caspas

4、e一9及Caspase一3活性的减弱，导致外周血PMN凋亡减少，在梗阻性黄疸诱发过度炎症反应中具有重要意义；经Cyt—C干预后，促进了PMN的凋亡，有利于炎症反应的消退。【关键词】梗阻性黄疸；细胞色素C；半胱天冬酶一3；中性粒细胞；炎症反应中性粒细胞(polymorphonuclearneutrophil，PMN)流式细胞仪；Thermo多功能超微量核酸蛋白分析仪。在炎症反应中扮演重要角色，其数量和功能的变化影1．2分组104只SD大鼠，随机分为4组：正常组响机体炎症反应的进程。我们前期实验证实

5、外周血(NO组，n=8)、假手术组(SO组，=32)、胆总管结扎PMN凋亡的异常是导致梗阻性黄疸(obstructivejaun-组(BDL组，n=32)和Cyt—C干预组(BDL+Cyt—Cdice，OJ)过度炎症反应的重要因素。但是，关于0J患组，n=32)。设定NO组为0时相，s0组、BDL组和者外周血PMN凋亡失控的机制，目前尚未研究清楚。BDL+Cyt—C组分为术后12、24、48、72h等4个时相，近年来，细胞色素C(cytochromeC，Cyt—C)信号通路在每个时相8只。调控细

6、胞凋亡的进程中的作用逐渐得到了认识。关于1．3模型制备BDL组及BDL+Cyt—c组术前禁食Cyt—c信号通路是否参与OJ患者外周血PMN凋亡的12h，自由饮水，采用10％水合氯醛0．4～0．5mL／100g调控，目前鲜有研究报道。为此，2012年7月至2014腹腔注射麻醉，腹正中线进腹，分离胆总管，靠近肝门年1月，本实验通过建立胆总管结扎大鼠模型，给予外部用l号线双重结扎，并于两结扎线之间切断，缝合关源性Cyt—C干预，探讨Cyt—C信号通路对PMN凋亡腹；SO组除不结扎和切断胆总管外，其余同

7、上；BDL+调控的作用。Cyt—c组则在结扎胆总管关腹后行尾静脉注射Cyt—c(20mg／kg)；NO组不行任何操作。术后各组大鼠分笼1材料与方法喂养，自由饮水和进食专用饲料。1．1材料SPF级SD大鼠104只，雌雄不拘，质量1．4外周血PMN的分离与纯化取肝素抗凝的新鲜200～250g，购自广东省医学动物实验中心，在深圳北京全血，采用梯度离心及红细胞裂解法分离得到纯化的大学香港科技大学医学中心实验室进行实验。Cyt—C，PMN，应用台盼蓝染色法检查PMN活力>98％，应Sigma公司；葡聚糖T

8、一500，Pharmacia公司；大鼠淋巴用Gimsa染色法检查PMN纯度>95％。细胞分离液，TBD公司；RPMI1640，Hyclone公司；胎牛1．5外周血PMN凋亡率的测定用无菌的去离子水血清(无噬菌体低内毒素)，杭州四季青公司；Annexin—按1：4稀释结合缓冲液；取1×10。·L的PMN悬液V—FITCKit购自Neobioscience公司；Caspase一8、5OL；用150L结合缓冲液重新悬浮细胞；加入5Caspase一9及Caspase一3分光光度法检测试剂盒，凯基Anne