北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及病毒全基因组序列分析.pdf

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1、分类号：密级：学号：2015201704单位代码：10759石河子大学硕士学位论文北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及病毒全基因组序列分析学位申请人张勋盛金良（副教授）指导教师王衡（副教授）申请学位门类级别农学硕士专业名称基础兽医学研究方向动物疾病分子生物学所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2018年6月分类号：密级：学号：2015201704单位代码：10759石河子大学硕士学位论文北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及病毒全基因组序列分析学位申请人张勋盛金良（副教授）指导教师

2、王衡（副教授）申请学位门类级别农学硕士专业名称基础兽医学研究方向动物疾病分子生物学所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2018年6月Molecularepidemiologysurvey,geneticmutationanalysisofcompletegenomesequencesofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusinthenorthernXinjiangADissertationSubmittedtoShiheziUniversityIn

3、FulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByZhangXun(BasicVeterinaryMedicine)DissertationSupervisor:AssociateProf.ShengJin-liangandWangHengJune,2018石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不

4、包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日学位论文版权授权书本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日中文

5、摘要猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSvirus,PRRSV)引起的一种严重危害全球猪业生产的高度传染病。目前，我国呈现欧洲型和美洲型PRRSV毒株稳定共存，经典毒株、高致病毒株和NADC30-like毒株混合感染的情形，同时PRRSV的易变异和高频率基因重组等特性，共同导致我国PRRS的流行状况尤为复杂。为了解本地区PRRSV遗传变异和分子流行病学情况，从发病猪场采集疑似PRRS病料，通过

6、保守基因ORF7引物进行检测，使用RT-PCR方法扩增病毒nsp2部分基因和ORF5基因进行测序，选取国内外代表毒株进行核苷酸和氨基酸序列对比，采用最大似然法进行系统进化分析。结果显示100份样品中，33份为PRRSV阳性，阳性率为33%；随机抽取的13份阳性病料，使用RT-PCR方法获得8段nsp2部分基因和12段ORF5基因，序列比对和系统进化分析显示，13份样品中，除1株为经典毒株变异株，2株为疫苗毒株，其余均为高致病毒株，虽未检测到NADC30-like毒株存在，但在GP5蛋白分析中发现本试验部分

7、毒株具有NADC30-like毒株部分变异特征。鉴于新疆地区PRRSV毒株较为复杂，为更加准确的掌握本地区PRRSV毒株特征。使用Marc-145和PAM细胞对经典毒株变异株PRRSVXJzx1进行分离，参考HK13毒株设计9对特异性引物，进行全基因组测序，选取国内外代表毒株进行序列一致性比对，构建最大似然法系统进化树进行分析。结果显示，XJzx1株是目前国内外发现的突变频率较高的美洲型毒株，为NA2型美洲型毒株，与HB-2(sh)/2002、QYYZ和HK13遗传进化关系较近；基因重组分析显示，XJzx

8、1为BJ-4和QYYZ重组毒株。鉴于新疆地区PRRSV的感染较为普遍的特点，为建立北疆地区PRRSVRT-PCR鉴别诊断方法，利用本研究中获得的nsp2基因序列，设计特异性PRRSV引物，建立其RT-PCR鉴别诊断方法。结果显示建立的RT-PCR方法对经典/高致病毒株扩增长度分别为484bp/394bp，可较为明显的区分PRRSV致病性，对其他猪常见传染病原均无特异性扩增，且检测灵敏度高，最低检测量为30个拷贝。100份临床样