罗非鱼促钙吸收肽的制备分离及生物活性研究.pdf

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150250461上海海洋大学硕士学位论文题目：罗非鱼促钙吸收肽的制备分离及生物活性研究英文题目：Preparationandseparationcalcium-bindingpeptidefromtilapiaproteinhydrolysateanditsbioavailability专业：食品工程研究方向：水产品加工与质量安全姓名：张金杨指导教师：李来好研究员二零一八年五月上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注孙恢礼中国科学院南海海洋研究所研究员主席曾庆祝广州大学

2、化学化工学院教授委员徐石海暨南大学生命科学技术学院教授委员郝淑贤中国水产科学研究院南海水产研究所研究员委员戚勃中国水产科学研究院南海水产研究所副研究员委员岑剑伟中国水产科学研究院南海水产研究所副研究员委员魏涯中国水产科学研究院南海水产研究所副研究员秘书答辩地点南海水产研究所答辩日期2018.5.29上海海洋大学硕士学位论文二零一八年五月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容

3、。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月上海海洋大学硕士学位论文罗非鱼促钙吸收肽的制备分离及生物活

4、性研究摘要罗非鱼（Tilapia）作为一种富含蛋白质和氨基酸的优秀水产生物资源，不仅是饮食中良好的蛋白质来源，也是制备一系列生物活性物质潜在的优质原料。本文以罗非鱼为原料，利用蛋白酶对其进行酶解，2+研究了酶解产物的分子量分布、Ca结合能力以及抗氧化活性，采用2+固定化金属螯合层析对具有高Ca结合能力的酶解物进行纯化，研究其在Caco2细胞上的转运吸收，有望得到一种以罗非鱼为原料的补钙制剂，一定程度上丰富了罗非鱼深加工理论。具体结果如下：2+1.以Ca结合活性为指标，研究比较中性蛋白酶、Alcalase2.4L、胰蛋白酶三种蛋白酶酶解罗非鱼的产物的结合能力。三种蛋白酶水解度

5、依次为10.5%、10.25%和7.41%的酶解产物钙离子结合活性达到最高，此条件下，酶解物结合率为胰蛋白酶>Alcalase2.4L>中性蛋白酶，2+水解度为7.41%的酶解产物具有最高的Ca的结合活性，其结合率为78.71%。氨基酸分析结果显示：罗非鱼肉中氨基酸含量较为丰富，其中谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸和精氨酸等氨基酸含量较高，具有高钙离子结合活性的酶解产物谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、丝氨酸等与矿物离子结合能力有关的氨基酸含量大幅度增加。2.高效体积排阻色谱测定中性蛋白酶、Alcalase2.4L、胰蛋白酶三种蛋白酶酶解罗非鱼肉所得产物的分子量分布情况，比较小分子肽段（<

6、3kDa）所占比例，以及初始出峰时间。结果显示：相同酶解程I上海海洋大学硕士学位论文度情况下，酶解产物中<3kDa的组分占比依次是Alcalase2.4L>中性蛋白酶>胰蛋白酶，初始出峰时间为胰蛋白酶>中性蛋白酶>Alcalase2.4L。3.以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率、羟自由基清除率和还原力等抗氧化活性指标，研究比较中性蛋白酶、Alcalase2.4L、胰蛋白酶三种蛋白酶酶解罗非鱼肉所得酶解物的抗氧化活性的差异，结果显示：中性蛋白酶水解度为14.18%的酶解产物具有最高的抗氧化活性，其DPPH自由基清除率最高可达93.11%，羟自由基清除率为

7、72.45%，还原力为0.88。Alcalase2.4L水解度为12.84%的酶解产物获得了最高的抗氧化活性，而水解度为10.1%的胰蛋白酶酶解产物具有最高的抗氧化活性，且三种酶的酶解产物的抗氧化活性都随酶解时间的增加呈先上升后下降的趋势。2+4.具有最高Ca结合能力的酶解物具有较高的抗氧化活性，其DPPH自由基清除率，羟自由基清除率和和还原力分别为81.79%、2+47.97%、0.45，与Ca结合后的结合物也显示了一定的抗氧化能力，2+其Ca结合物DPPH自由基清除率为77.35%，羟自由基清除率为2+32.5