海蜇活性肽的制备及降血压效果的研究

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1、989585分类号⑧研究生学位论文海蜇活性肽的制备及降血压效果的研究研究生姓名窒挂歪指导教师姓名拄湛夔授申请学位囊剐一亟土专业名称壅左晶抛王皇壁叠论文答辩日期至鲤§生墨且至2目学位授予日期至鲤曼笙垦且中国海洋大学摘要本文对新鲜海蜇的头部和腕部进行了一般成分和氨基酸成分的分析，海蜇的蛋白占其干重的50％，其氨基酸成分种类齐全，必须氨基酸含量丰富。分别用酸性蛋白酶、中型蛋白酶、碱性蛋白酶、冒蛋白酶胰、蛋白酶以及复合酶对海蜇的蛋白部分进行了酶解，并根据酶解后对ACE抑制活性的强弱，选择出碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶。通过正交试验，确定出碱性蛋白酶酶解的最适反应条件为酶

2、用量为2％，反应温度为50。C，pH值为9，底物浓度为4％，反应后的水解度为41．8％，酸溶性肽为31．3mg／ml。并对测定海蜇水解液脱苦、调味、杀菌后ACE的抑制活性没有改变。对海蛰水解液进行超滤膜分离，选用截流分子量为2500和250的膜进行分离出三个部分，结果表明，分子量在250--2500之间的组分对ACE的抑制活性最强并动物试验中效果明显，再用SephedexG--15凝胶过滤对其进一步分离，分离出对ACE抑制活性较强的组分Ⅲ、组分Ⅳ，进行抗消化实验和氨基酸组成分析，组分III、组分Ⅳ被消化酶处理后，活性下降不大，保持较高的ACE抑制活性。组分IⅡ主要包括Pro

3、、ryr、Leu、Gly、Lys、Glu6种氨基酸；组分Ⅳ主要包括Tyr、Val、Met、Glu、Gly5种氨基酸。动物实验主要研究了海蜇中降压肽对肾动脉狭窄和L—NNA药物两种高血压模型的血压和心率的影响。肾动脉狭窄型组灌胃和L—NNA药物组的最小有效分别为0．69／Kg和0．Se／Kg。肾动脉狭窄型动物灌胃最小有效剂量的海蜇降压肽其血压下降为22／16mmHg(收缩压／舒张压)，持续时间为4小时，同样条件，L～NNA药物组血压下降15／8mmHg(收缩压／舒张压)，持续时间为6小时。并且在海蜇降压肽降压过程中，对心率也有一定的平稳作用。由LD50毒理试验，海蜇降压肽LD

4、50均大于109爪g．bw。根据急性毒性分级，海蛰降压肽属于实际无毒物质。关键词：海蜇血管紧张素酶抑制肽制备降血压StudyontheactiVepeptidett啉,／el／yfishanditseffectofdecreasingbIoodpressureAbstractThecommoncomponentandthecompositionofproteinoftheumbrellaandoralarmsoffleshJellyfisharedetectedandanalyzedinthisarticle．TheproteinofJellyfishisthehalfof

5、thewholedryweightandincludeskindsofaminoacidsandabundantnecessaryaminoacids．Acidicprotease．alkalineprotease．neutralprotease．trypsin．pepsinandthecompoundin．goftwoofthemwereusedtohydrolyzejellyfish，respectively．AccordingtoinhibitoryactivityagainstangiotensinI—ConvertingEnzyme(ACE)ofhydrolysa

6、tesandeconomicbenefitalkalineproteasewasselectedfortheproperenzymestoprepareACEinhibitorypeptides．Inordertolookfortheoptimalhydrolysisconditionsofalkalineprotease，orthogonalexperimentwereprocessed．AfteranalyzingtheinhibitoryactivityagainstangiotensinI-Convertingenzyme(ACE)ofhydrolysates．th

7、eoptimalhydrolysisconditionswereascertained，ratioofenzymeandsubstrateis2％，theoptimalhydrolysistemperatureis50。C，theoptimalpHis9，concentrationofsubstrateis4％。Andthehydrolysisratiois41．8％，acid-solubleproteinis3I．3mg／m1．moreover，theinhibitoryactivityagainstangiot