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《兔抗小麦钙调素抗血清的制备及其纯化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第31卷第6期河北农业大学学报Vol.31No.62008年11月JOURNALOFAGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEINov.2008文章编号:1000-1573(2008)06-0055-04①兔抗小麦钙调素抗血清的制备及其纯化黄晨,侯春燕,王冬梅(河北农业大学生命科学学院,河北保定071001)摘要:为制备兔抗小麦钙调素抗血清并对其进行纯化,首先从小麦叶片中提取钙调素蛋白,对其初步纯化后免疫家兔,制备得到兔抗小麦钙调素抗血清,再以大肠杆菌中诱导表达的拟南芥钙调素蛋白作为抗原,利用PVDF膜结合法纯化得到了兔抗小麦钙调素抗血清,并通过W
2、esternBlotting对所纯化的多克隆抗体进行了鉴定。关键词:钙调素;多克隆抗体;纯化;WesternBlotting中图分类号:Q942.6文献标识码:APreparationandpurificationofrabbitanti2wheatcalmodulinantiserumHUANGChen,HOUChun2Yan,WANGDong2mei(CollegeofLifeScience,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding071001,China)Abstract:Toprepareandpurifyrabbita
3、nti2wheatcalmodulinantiserums,calmodulinproteinwasextractedfromwheatleavesforimmunedrabbitsafterpreliminarypurification.ThenArabidopsisthalianacalmodulinproteinwasusedbyE.coliinducedexpressionasantigentopurifyrabbitanti2wheatcalmodulinantiserumbyPVDFmembranebinding.Thepurifiedpolyclo
4、nalantibodywasi2dentifiedbytheWesternBlotting.Keywords:calmodulin;polyclonalantibody;purification;WesternBlotting2+钙调素(Calmodulin,CaM)作为Ca的多功能受CaM分子量小(17kD),在进化上高度保守,使其免疫2+体蛋白在钙信号系统中发挥着重要作用,因此Ca/源性较弱,难于制备高效价抗体。本研究以初步纯化CaM是目前植物细胞信号系统中研究得最为深入和的小麦CaM蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清,并对2+广泛的途径之一。毛爱军等的工作初步表
5、明,Ca/抗血清进行了纯化,以期为深入探讨不同亚型CaMCaM参与了小麦抵抗叶锈菌侵染诱发的过敏性反应的亚细胞定位准备实验基础。[1](Hypersensitivereaction,HR),为了进一步深入探讨1材料与方法CaM在小麦抵抗叶锈菌侵染诱发的HR中的作用,制备小麦CaM特异性抗体是必须的,它是CaM定位、1.1材料定量及生理功能研究中最有效、最特异的试剂。由于1.1.1供试小麦品种以小麦(Triticumaestivum①收稿日期:2008-04-22基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30671244);植物生理学与生物化学国家重点实验室开放课
6、题资助项目(No.PPB04006);河北省自然科学基金资助项目(No.303180;No.C2005000220;No.C2007000515)作者简介:黄晨(1983-),男,河北邢台人,硕士,主要从事生理生化研究工作.通讯作者:王冬梅(1963-),女,河北景县人,博士,教授,博士生导师,主要从事逆境分子细胞生物学等研究工作.Tel:0312-7528247,E-mail:dongmeiwang63@hotmail.com56河北农业大学学报第31卷L.)品种洛夫林10为试材。小麦幼苗用直径15cm1.2.4拟南芥CaM蛋白的诱导表达参照文献的花盆土培,生
7、长于人工气候培养室,昼/夜温度为[5]的方法并稍做改进。将带有拟南芥CaM重组子225/20℃,镝灯照射,光照强度为400W/m,光照周的大肠杆菌接种到LB液体培养基上,在摇床中期14h/d。小麦幼苗7日龄时取叶片提取CaM。37℃培养过夜。取过夜培养基接种于LB培养基液1.1.2供试动物家兔2只,购自保定兔场。体扩繁,在摇床中37℃培养直到细菌密度达到1.1.3供试菌种含pET28-CaM(拟南芥CaM)重OD600=015,向培养基中加入IPTG诱导表达CaM,组表达质粒的BL21(DE3)工程菌,由河北师范大学37℃继续培养4h。然后以5000×g离心10
8、min,细胞生物学实验室
