单核细胞诱导的emt和ang-(1-7)-mas受体途径在ali肺纤维化中的作用

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1、隶南大·粤博士毕业论文单核细胞诱导的EMT和Ang-(1-7)-Mas受体途径在AL

2、肺纤维化中的作用研究生姓名：堕歪瞠本论文获国家建设高水平大学公派研究生项目(留金出[2009]3012号)资助。Theeffectsofmonocytesinducedepithelial--mesenchymaltransitionandangiotensin一(1—7)一MasreceptoronpulmonaryfibrosisinALIADissertationSubmittedtoSoutheastUniversityBYChenQiuhuaSupervisedbyProfessorQ

3、IUHai-boSchoolofMedicineSoutheastUniversitySeptember2013东南大学毕业论文独创性声明本人声明所呈交的毕业论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：i垒!纽坐日期：2型：』!：!!东南大学毕业论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交毕

4、业论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：已鱼纽蜂导师签名研究生签名：匕鱼鱼生逝导师签名中文摘要单核细胞诱导的EMT和Ang．(1．7)一Mas受体途径在ALl肺纤维化中的作用东南大学医学院附属中大医院重症医学科博士研究生：陈秋华博士生导师：邱海波教授主任医师摘要第一部分：单核细胞诱导肺泡上皮细胞转分化促进肺纤维化的实验

5、研究背景急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)以肺部失控的炎症反应及异常的组织重建为主要特征。肺泡上皮细胞在各种刺激因素下可转分化为间质细胞，是肺纤维化过程中成纤维细胞增加的主要原因之一。ARDS时肺组织局部单核细胞大量浸润，但是单核细胞浸润是否会诱导肺泡上皮细胞转分化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)，加重ARDS肺纤维化，需要进一步的探讨。目的本研究拟复制盐酸(hydrochloricacid，HCl)诱导的肺泡上皮细胞损伤模型，观察单核细胞共培养对HCl刺激损伤的人肺泡上皮细

6、胞转分化的影响，然后借助于淋巴细胞功能相关抗原(1ymphocytefunction—associatedantigen，LFA)．1短肽阻断单核细胞．肺泡上皮细胞的直接接触，探明单核细胞促进损伤的肺泡上皮细胞发生EMT、诱导纤维化的机制。方法(1)以HCl(pn4．0DMEM培养液)刺激肺泡上皮细胞株(BEAS．2B细胞)30min复制酸吸入性肺损伤的体外模型，MTT法观察细胞活性的变化，台盼蓝染东南大学博士学位论文色观察细胞的死亡百分率，测定培养上清液中乳酸脱氢酶(1acticdehydrogenase，LDH)的浓度反映细胞的受损程度，WesternBlot方法检测细胞黏附

7、分子(intercellularadhesionmolecule，ICAM)．1的表达。(2)将单核细胞株(U937)与HCl损伤的BEAS．2B细胞共培养24或48h，WesternBlot方法检测BEAS．2B细胞上皮特异性蛋白E．钙粘蛋白(E．cadherin)及间质特异性蛋白a．平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达情况，碱水解法检测培养上清液中羟脯氨酸浓度，ELISA方法测定培养上清液中的白介素(interleukin，IL)．8和血小板源性生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)的浓度。(3)以0．1、O．5或1mM的LFA．1短肽(含有L

8、FA．1活性位点，可与单核细胞表面的LFA．1竞争性结合于肺泡上皮细胞表面的ICAM．1分子)CDlla237．246和／或CDl8112．122预处理HCI损伤的BEAS．2B细胞30min，再加入绿色荧光染料(Calcein．AM)标记的U937细胞共培养48h，荧光显微镜下观察U937细胞黏附的情况，多功能酶标仪检测黏附的单核细胞荧光强度。(4)以CDlla237-246和／或CDl8112．122预处理HCl损伤的BEAS．2B细胞30min，再加入U937细胞共培养48