ndrg1在子宫内膜癌发生发展中的功能及机制研究

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1、上海交通大学博士学位论文NDRG1在子宫内膜癌发生发展中的功能及机制研究姓名：吕秀红申请学位级别：博士专业：病理学与病理生理学指导教师：陈嘉薇20120515上海交通大学博士学位论文中文摘要NDRGl在子宫内膜癌发生发展中的功能及机制研究摘要目的：本课题组前期研究结果显示，NDRGl蛋白在I型子宫内膜样子宫内膜癌组织中表达上调，据此我们推测NDRGl在子宫内膜癌发生发展过程中可能起促进肿瘤发生的作用。为了阐明NDRGl在子宫内膜癌中的具体功能，我们拟进一步在体外细胞学水平研究NDRGl在子宫内膜癌发生发展中的功能及机制。材料和方法：首先，采用shRNA介导的基因沉默技术抑制子宫内膜癌Ishik

2、awa细胞中NDRGl的表达，观察沉默NDRGl的表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响(包括细胞增殖能力、克隆形成能力、体外迁移以及侵袭能力等)：其次，构建包含NDRGl编码区片段全长的真核表达载体pcDNA3．I(+)／NDRGl，观察在Ishikawa细胞中过表达NDRGl对Ishikawa细胞增殖及迁移能力的影响；最后，为了阐明NDRGl在子宫内膜癌中发挥功能的机制，利用基因芯片技术，对稳定抑制NDRGl表达的Ishikawa细胞及相应空载对照细胞进行全基因组表达谱芯片扫描工作，以发现NDRGl发挥作用的通路或下游靶基因。结果：在Ishikawa细胞中稳定抑制NDRGl的

3、表达之后，能够显著促进Ishikawa细胞的增殖能力、克隆形成能力、迁移及侵袭能力等，同时能下调细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21蛋白的表达；而在Ishikawa细胞中过表达NDRGl则能显著抑制细胞的增殖和迁移能力，同时上调p21蛋白的表达。另外，通过对稳定抑制NDRGl表达的Ishikawa细胞进行全基因组表达谱芯片的扫描工作，发现了大量的NDR(31下游靶基因，包括控制细胞增殖、细胞间黏附以及细胞移动能力等的基因，结合我们之前在卵巢癌H08910-PM细胞及子宫颈癌Caski细胞上的全基上海交通大学博士学位论文中文摘要因组表达谱芯片扫描结果，初步筛选出了19个共同特异性下游差异性表达基因。

4、这初步筛选出来的19个共同差异性表达基因为我们进一步研究NDRGl发挥功能的机制提供了研究和探讨的方向。不仅如此，我们还选取了2个共同差异性表达基因进行逆向实验，发现有一个差异性表达基因ADM2的表达情况在Ishikawa细胞中过表达NDRGl之后出现了和在Ishikawa细胞中干扰NDRGl之后相反的变化方向。结论：NDRGl在子宫内膜癌中通过上调p21蛋白的表达发挥肿瘤抑制功能。NDRGI发挥作用的下游靶基因的发现为进一步研究NDRGl发挥肿瘤抑制功能的机制奠定了基础。NDRGl在子宫内膜癌中可能通过ADM2依赖途径发挥肿瘤抑制功能。关键词：NDRGl，子宫内膜癌，增殖，转移，基因芯片。Ⅱ

5、上海交通大学博士学位论文英文摘要TheroleofNDRGlduringendometrialcarcinogenesisandunderlyingmechanismsABSTRACTPurpose．N-mycdownstreamregulatedgene1(NDRGI)reportedlyregulatestumorprogressioninvariouscar墨e塔．OurpreviousstudiesshowedthatNDRGlwas曲erranttyoverexpmssedinhumantypeIendomctrioidendometrialcancertissues．Thepurp

6、oseofthepresentstudywastoflll'tIlcrinvestigatetheroleofNDRGIduringendometrialcarcinogenesis．Methods．AshorthairpinRNA(shRNA)mediatedgcnesilencingstrategyWasemployedtostablysuppresstheexpressionofNDRGlinendometrialcancerIshikawaceHs．TheinfluenceofNDRGlsilenceoncail(：ercellbiologicalbehaviorswasexal删th

7、roughobserving／nvitrolumorcellproliferation,colonyformation,cellmigrationandinvasionMoreover,themammalianNDRGIexpressionvectorI帖DNA3．I(+)／NDRGlwasconstn】ctcdtodeterminetheeffectsofNDRGIoverexpressiono