s100a8在子宫内膜癌中的作用及其调控机制的研究

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1、分类号：R737.33密级：公开研究生学位论文S100A8在子宫内膜癌中的作用及其调控机制论文题目（中文）的研究TheeffectofS100A8inendometrialcancerand论文题目（外文）itsregulatingmechanisms研究生姓名刘畅学科、专业外科学·妇产科研究方向妇科肿瘤学位级别博士导师姓名、职称杨永秀教授论文工作起止年月2015年10月至2018年3月论文提交日期2018年3月论文答辩日期2018年5月学位授予日期2018年6月校址：甘肃省兰州市S100A8在子宫内膜癌中的作用及其调控机制的研究中文摘要目的子宫内膜癌是女性

2、生殖系统三大恶性肿瘤之一，数据显示其发病率呈现出逐年递增的不良趋势。钙粘蛋白S100A8可以通过激活相关信号分子直接或者间接参与、影响多种肿瘤的增殖、侵袭以及迁移等生物学行为。本论文主旨探究钙粘蛋白S100A8与子宫内膜癌患者的临床特点的相关性，验证其是否可以作为子宫内膜癌患者早期诊断以及预后判断的分子标志物，钙粘蛋白S100A8是调节子宫内膜癌发生发展的可能分子机制，进而为子宫内膜癌的早期预防、早期诊断、临床治疗以及预后判断等相关问题提供理论依据。方法1.临床实验部分，通过收集22例正常子宫内膜标本和74例子宫内膜样腺癌癌组织标本,检测钙粘蛋白S100A8

3、在正常子宫内膜组织和子宫内膜癌癌组织中的蛋白表达水平和RNA表达水平，探寻S100A8在子宫内膜癌的发生、发展中的作用；2.基础实验部分，包括2个部分，即干扰组和过表达组。如干扰组所示，通过微小RNA干扰技术，敲除HEC-1A细胞株的S100A8基因，构建实验组（sh-S100A8），空白对照组（NC-SH-S100A8）和野生对照组（HEC-1A），然后行WesternBlot和qRT-PCR实验验证细胞株构建成功，之后行MTT、流式细胞周期、细胞凋亡等细胞学实验，观察细胞行为学的改变，分析并探讨S100A8在子宫内膜癌细胞增殖迁移的机制中的作用，进一步澄

4、清其在相关信号通路的调节作用。同理行过表达组实验。结果1.S100A8蛋白和S100A8mRNA在子宫内膜癌癌组织中高表达，S100A8蛋白在子宫内膜癌的高、中分化组别中表达于肿瘤实质细胞的细胞膜和细胞质中，但在低分化组中S100A8蛋白弥漫的表达于肿瘤细胞的任何部位中，且S100A8蛋白在子宫内膜癌低分化组的阳性表达率为95.45%，与高中分化组的阳性表达率73.47%相比结果具有差异性，（P＜0.05）；2.应用微小RNA干扰技术构建实验组（sh-S100A8）细胞株，与对照组细胞相比较，可见实验组细胞内S100A8蛋白和S100A8mRNA表达量明显降

5、低，细I胞实验结果显示实验组细胞的增殖能力降低、细胞早期凋亡增加,同时可以观察到敲除S100A8之后使得AKT的磷酸化过程受阻以及促进凋亡的相关基因如CytochromeC、Bad、Bax、FOXO1、Caspase-3表达的增加，最终促进了细胞凋亡；3.应用慢病毒转染能有效的增加HEC-1A细胞内S100A8基因和蛋白的表达，从而构建出实验组（OE-S100A8）和空白对照组（NC）细胞,过表达S100A8基因的表达能够影响HEC-1A细胞的增殖和迁移等生物学行为，相比较于空白对照组（NC）与野生对照组细胞（HEC-1A），实验组（OE-S100A8）细胞

6、的增殖和迁移能力增强。结论1.与正常子宫内膜组织相比较，钙粘蛋白S100A8在子宫内膜癌癌组织中高表达，且其表达水平与患者的肿瘤组织学分期呈正相关性，因此推断S100A8可以作为子宫内膜癌患者早期诊断的生物标志物；2.干扰钙粘蛋白S100A8之后能够促进子宫内膜癌细胞凋亡、抑制其增殖，因此推断S100A8可以作为子宫内膜癌患者靶向治疗的生物靶点；3.过表达钙粘蛋白S100A8之后能够促进子宫内膜癌细胞的增殖和迁移能力，因此推断S100A8可以作为子宫内膜癌患者随访以及预后判断的生物标志物。关键词：钙粘蛋白S100A8，子宫内膜癌，免疫组织化学，聚合酶链式反应

7、，酶联免疫吸附试验IITheeffectofS100A8inendometrialcanceranditsregulatingmechanismsAbstractObjective：Endometrialcancerisoneofthethreemajormalignanttumorsinthefemalereproductivesystem.Thedatashowthattheincidenceofendometrialcancersisincreasingyearbyyear.S100A8candirectlyorindirectlyaffectthep

8、roliferation,invasionandmi