testin基因在子宫内膜癌病程中的作用及其机制研究

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1、KSOOCHOWUNIVERSITY博士专业学位论文论文题目testin基因在子宫内膜癌病程中的作用及其机制研穿研究生姓名董若凡指导教师姓名茅彩萍专业名称妇产科学研究方向妇科肿瘤论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研宄成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名期：^/S^ol/2^苏州大学学

2、位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在____年_月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：日m：导师签名:期:fITESTIN基因在子宫内膜癌病

3、程中的作用及其机制研究中文摘要TESTIN基因在子宫内膜癌病程中的作用及其机制研究中文摘要第一部分TESTIN基因在子宫内膜癌中的表达水平目的：探讨子宫内膜癌中TESTIN基因的表达水平，为子宫内膜癌的早期诊断提供依据。方法：收集68例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织68例及相应的癌旁组织68例，其中子宫内膜样腺癌60例，子宫浆液性乳头状腺癌8例。免疫组化法检测子宫内膜癌组织及其癌旁正常组织中TESTIN基因的蛋白表达水平并对TESTIN基因表达与临床参数之间的关系进行统计学分析。采用甲基化特异性PCR检测子宫内膜癌组织、细胞中TESTIN基因启动子的甲基化状态，分析其与TESTI

4、N表达水平之间的相关性。结果：子宫内膜癌的癌旁正常组织中TESTIN蛋白呈阳性表达，而绝大部分(52／68)的子宫内膜癌组织中TESTIN蛋白表达显著下降（p<0.O1)。进一步分析显示：子宫内膜样腺癌组中TESTIN2蛋白表达水平下降率较浆液性乳头状腺癌组明显升高(χ=13.34，p=0.001)。根据MSP的结果，44.1%(30/68)的子宫内膜癌中TESNTIN启动子为高甲基化状态，而在正常内膜组织中仅为3.6%(1/28)，p<0.001)。统计学分析显示TESNTIN启动子高甲基化与淋巴结转移(p=0.03)显著相关。同时，TESTIN表达水平下降与其高甲基化状态相关

5、(p=0.021)。甲基化处理可恢复AN3CA细胞内TESTIN表达。结论：TESTIN基因在子宫内膜癌中表达显著下降，启动子区域的高甲基化是TESTIN基因在子宫内膜癌中表达缺失的主要原因。关键词：TESTIN基因，抑癌基因，子宫内膜癌，甲基化I中文摘要TESTIN基因在子宫内膜癌病程中的作用及其机制研究第二部分TESTIN在子宫内膜癌中的作用机制目的：探讨TESTIN甲基化在子宫内膜癌中的作用及其分子机制。方法：分别构建TESTIN过表达质粒pcDNA3.1-TESTIN和干扰质粒shRNA-TESTIN；将上述两种质粒转染子宫内膜癌细胞并构建稳定的转染细胞株，应用实时PCR

6、方法和westernblot方法检测转染前后TESTIN基因的表达。应用MTT法、克隆形成实验、Transwell实验、实时PCR和westernblot等方法检测TESTIN对子宫内膜癌细胞的生长、克隆形成和侵袭能力的影响，光学显微镜下观察子宫内膜癌细胞的形态学变化，实时PCR和westernblot方法检测与EMT相关的E-钙粘连蛋白、Snail，波蛋白和N-钙粘连蛋白的mRNA和蛋白表达水平的变化。分别使用TESTIN稳定过表达和干扰的子宫内膜癌细胞株建立建立子宫内膜癌裸鼠模型，观察TESTIN对肿瘤生长的抑制作用，验证TESTIN对EMT过程的调控。结果：在AN3CA细胞

7、中，TESTIN过表达可明显抑制细胞的生长、克隆形成和侵袭能力；同时，TESTIN过表达后诱导AN3CA细胞出现上皮性转变，上皮性标志物E-cadherin的表达水平明显上升，而间质性标志物Snail，N-cadherin，vimentin的表达则被显著抑制；相反地，在TESTIN敲低的Ishikawa细胞中，细胞的生长、克隆形成和侵袭能力得到增强；同时，干扰TESTIN基因后Ishikawa细胞由上皮细胞形态向间质细胞形态方向转化，作为上皮性细胞标志物的E-cadherin的表