xpd基因的克隆及其在恶性黑素瘤细胞中的表达

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1、XPD基因的克隆及其在恶性黑素瘤细胞中的表达计：学位论文：24页表格：8个插图：6幅王月指导教师：高明阳教授申请学位级别：硕士学位专业名称：皮肤病与性病学论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明删本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本

2、研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：承筑1年f月臼日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料与方法⋯⋯⋯j⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lid0a-00ID⋯17(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22五、致谢⋯⋯⋯⋯ooooo⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯oooo⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24XPD基因的克隆及其在恶性黑素瘤细胞中的表达硕士生姓名：指导教师：指导

4、小组：专业名称：王月高明阳教授刘世海博士皮肤病与性病学摘要背景：XPD是核酸切除修复过程的主要蛋白，因此XPD与肿瘤的关系越来越受到研究者的重视。因此XPD与肿瘤的关系越来越受到研究者的重视。对皮肤恶性黑素瘤基因易感性分子机制的研究表明XPD是皮肤恶性黑素瘤易感的生物标志。DNA修复酶的调控，是预防肿瘤和治疗的关键，HIF．1在参与调控XPD修复中起着重要作用，增加了HIFl和spl他们重叠的结合位点之间的竞争，紫外线诱导的磷酸化增强了HIF一1蛋白直接结果，而XPD基因启动子取悦的HRE，在编码DNA修复蛋白的基因中，是DNA修复机制的一个关键调节

5、机制。在XPD基因中的DNA修复因子TFIIH存在亚基突变。许多人着色性干皮病患者的致病与XPD点突变R683W有着某种关联。然而，有明显的异质性，有研究对XPD基因中的TFIIH酶功能的突变的效果发现，每一个突变，表现出独特的生化属性。XPD751密码子的Gin／Gin基因型是男性恶性黑素瘤高风险的有意义基因标志，Lys／Gln基因型对预测恶性黑素瘤恶化有重要意义。在本实验中，我们克隆了XPD，构建了pEGFP．N1／XPD及pcDNA3．1(+)／XPD重组表达质粒，并转染至人恶性黑素瘤细胞，观察它们的表达情况及其在恶性黑素瘤细胞内定位，利用MT

6、T检测细胞的增殖力，以讨论XPD对恶性黑素瘤细胞的生物学影响及其可能的功能。目的：克隆XPD基因并探讨其在恶性黑素瘤细胞内的定位及其功能。方法：克隆出人全长XPDcDNA，将该基因构建入pEGFP-N1／XPD质粒，利用脂质体法转染pEGFP．N1／XPD及pcDNA3．1(+)／XPD至人恶性黑素瘤A375细胞，检测XPD蛋白的表达，然后利用GMl30和KDEL进行染色，观察基因XPD的细胞定位。细胞增殖力检测使用MTT法。结果：1．培养Hela细胞并进行RNA逆转录，PCR克隆了人全长XPDcDNA，电泳在约1234bp处见条带。2．将XPD基因

7、连入PEGFP载体并测序鉴定，测序结果与GenBank中人XPD进行比对，结果一致。4．XPD在转染细胞中的高表达。5．PEGFP／XPD重组质粒定位于A375细胞内质网中。6．与转染pcDNA3．1(+)组和空白对照组相比，转染pcDNA3．I(+)／XPD组恶性黑素瘤A375细胞数较少，XPDA375细胞的生长被XPD基因抑制。结论：1．从Hela细胞中成功克隆出同源盒基因XPD。2．构建pEGFP-N1／XPD质粒。3．用免疫荧光染色证实XPD基因定位于恶性黑素瘤A375细胞的内质网中。4．A375细胞的生长被XPD基因抑制。关键词XPD；克隆

8、；恶性黑素瘤细胞；功能2，_’1nl1●．1r、1L10neOIIIUmanxerodermaplgment