leber遗传性视神经病变患者线粒体atpase6基因的变异分析

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1、万方数据答辩委员会成员：自童丕塾援≤差国筮壶莲逝太堂≥全虚全塾援≤显划医科太堂≥奎红蟹数援≤湿划医科太堂≥割悬董数援≤湿趔医科太堂≥万方数据温州医科大学硕上学位论文目录11Y1JlIIlll21lill91111111114lJltl3IIIIJ9illll2llllllY2914392中英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”3ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯14结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36一J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯····················⋯·⋯⋯⋯⋯⋯43致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57万方数据温州I医科大学硕士学位论文中英文缩写英文缩写英文全称中文名称AAd

3、enine腺嘌呤核苷A(Ala)ATPCC(Cys)CID(Asp)E(Glu)F(Phe)GG(Gly)H(His)I(1ie)K(Lys)L(Leu)LHONM(Met)MSAlanineAdenosineTriphosphateCytosineCysteineConservationIndexAsparticAcidGlutamicAcidPhenylalanineGuanosineGlycineHistidineIsoleucineLysineLeucineLeber’SHereditaryOpticNeuropathyMethionineMultipleSclero

4、sismtDNAMitochondrialDNAN(Asn)AsparagineOXPHOSOxidativePhosphorylationP(Pro)PCRQ(Gin)R(Arg)rCRSS(Ser)ProlinePolymeraseChainReactionGlutamineArginineRevisedCambridgeReferenceSequenceSerine丙氨酸三磷酸腺苷胞嘧啶核苷半胱氨酸保守性指数天冬氨酸谷氨酸苯丙氨酸鸟嘌呤核苷甘氨酸组氨酸异亮氨酸赖氨酸亮氨酸Leber遗传性视神经病变甲硫氨酸多发性硬化线粒体DNA天冬酰胺氧化磷酸化脯氨酸聚合酶链式反应谷氨酰

5、胺精氨酸修正的剑桥参考序列丝氨酸万方数据温州医科大学硕士学位论文万方数据温州医科大学硕士学位论文Leber遗传性视神经病变患者线粒体ATPase6基因的变异分析中文摘要目的1．收集全国各地的Leber遗传性视神经病变家系和健康正常对照者，然后建立临床和家系资料以及分子遗传学资料数据库。2．对Leber遗传性视神经病变患者的线粒体ATPase6基因变异进行筛查，并绘制该基因的突变频谱。3．探讨线粒体ATPase6基因变异对Leber遗传性视神经病变发生与发展的影响。材料与方法1．通过与北京中医药大学东方眼科医院、中国中医科学院眼科医院、河北邢台眼科医院和温州医科大学附属眼视光医

6、院合作，以及全国其它医院送过来的家系，构建视神经萎缩病变家系的各地收集网络。首先经所有受试者同意和温州医科大学伦理道德委员会的许可，再签署相应的知情同意书后，最后采集外周静脉(肘静脉)血样3-5mL，并收集临床和家系详细资料(其中包括用Cyrillic软件绘制系图)。2．对受试对象(包括患者和正常对照)进行详细具体的眼科临床检查，包括检测视力(应用标准国际对数视力表)，色觉检查(应用俞自萍色觉图)，视野检查(应用Humphrey视野计)，VEP(应用德国罗兰电生理仪)以及拍摄眼底(应用佳能眼底数码彩照)。3．用经典的酚．氯仿抽提法或DNA提取试剂盒法提取全基因组DNA(包含m

7、tDNA)并以其作为PCR扩增模板，对先证者及家系母系成员原发突变G11778A、G3460A和T14484C所在的3个区域进行PCR扩增，对PCR产物进行纯化后，最后应用自动测序仪进行测序。4．为了更进一步分析探讨线粒体突变ATPase6在LHON发病过程中的作用和影响，使用相对应的引物对618个先证者和359个正常对照者的mtDNAATPase6序列进行PCR目的条带扩增、纯化和测序。对先证者线粒体ATPase6基因进行PCR扩增，对PCR产物进行纯化后，最后应用自动测序仪进行测序。5．使用生物软件