四川锦葵(malva parviflora)上双生病毒的鉴定及变异分析

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1、西南大学硕士学位论文四川锦葵（Malvaparviflora）上双生病毒的鉴定及变异分析姓名：张婧申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：青玲20120531摘要四川锦葵(讹～口p以w如m)上双生病毒的鉴定及变异分析植物病理学专业硕士研究生张婧指导教师青玲教授要在植物病毒中，双生病毒是唯一一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒，多发生在热带和亚热带地区。根据昆虫介体、基因组结构和寄主范围的不同，双生病毒科可划分为四个属：菜豆金色花叶病毒属偿唧朋DwM)、甜菜曲顶病毒属(Ck哟协馏)、玉米线条病毒属@细舭叫，．淞)及番茄伪曲顶病毒属(砌Dc圳讥岱)。其中，菜豆

2、金色花叶病毒属病毒在自然状态下可由烟粉虱以持久性方式传播，因此该属病毒也称作粉虱传双生病毒(WKteny．的I塔Inittedgem埘villlS，、ⅣTG)。该属病毒分布广泛，危害严重，至今已给39个国家的作物生产造成了毁灭性灾害。近年来，在我国云南、海南、广东、广西和福建等省的烟草、番茄、番木瓜等作物和杂草上相继发现了多种双生病毒。由于四川省已有双生病毒侵染番茄、辣椒等经济作物和赛葵等杂草的报道，鉴于杂草是双生病毒的重要中间寄主和初侵染源，为了明确四川锦葵上双生病毒的种类，本文对四川锦葵黄脉病的病原进行了分子鉴定，并对其基因组结构及变异进行了分析。20lO年，

3、我们在四川攀枝花地区采集了10份表现明显黄脉症状的锦葵样品，利用双生病毒通用引物PA和PB，对锦葵样本进行PCR检测，结果发现：10份样品中有9份扩增出约500bp的条带(样品SCl93未扩增到)，说明这些杂草上存在双生病毒侵染。选取部分样品进行RCA．PCR后，SCl93也扩增到500bp片段，说明10份样品都受到双生病毒侵染。PCR产物测序后进行序列比较表明，这些样品可能受两种双生病毒侵染，即：中国番茄黄化曲叶病毒(乃脚口幻弦如w跆口厂蚀以劬f凇访馏，TYLCCNV)和云南赛葵黄脉病毒(施加甜f朋聊粥物ww伽地刀刀口甩vf，．1‘凡hfY、，'yNV)。在此基

4、础上，任选样品SCl76、SC224和SC226对其全基因组进行了扩增。其中，SCl76和SC226．1的DNA．A全序列分析结果表明：SCl76和SC226．1全长分别为2737bp和2738bp，具有典型的双生病毒DNA．A基因组结构；序列比较西南大学硕士学俯论文分析发现，两者之间相似性为96．9％，且均与n[1，CCNV的分离物TYl．C哪TbY25相似性最高，分别为98．2％和97．1％；说明它们是TYlCCNV的不同分离物。对SC224和SC226．2的DNA．A进行全序列测定，结果表明：SC224和SC226-2全长分别为2747bp和2748bp，具

5、有典型的双生病毒DNA．A基因组结构；两者之间序列相似性为99．2％，均与My价仆Ⅳ的相似性最高，分别为99．O％和99．3％；表明它们是My¨仆Ⅳ的不同分离物。利用扩增双生病毒卫星DNAp的特异性引物B舢1和Beta02，从样品SCl76、SC224和SC226中均扩增到约1300bp的条带。序列分析表明：SC224p和SC226p全长分别为1356bp和1350bp，两者之间相似性为99．O％，且均与MⅥ删伴随的DNAB(MY"ⅢB)相似性最高，分别为99．O％和99．1％。SCl76p全长为1335bp，与TYLCCNV伴随的DNAB(ryl．Ca惦)相似性

6、最高为85．8％。这些结果表明，样品SCl76受TYLCQ州单独侵染；样品SC224受MY弋吖NV单独侵染；样品SC226受TyICCNV和MY弋删两种病毒复合侵染；且样品中存在两类卫星DNAB分子，分别是MYVYNB及TYLCcNB。利用TYLCCNv和MYl删的特异引物分别对10份锦葵样品进行PCR检测，结果表明：10份样品中有7份样品能检测到TYLCCNv和My价仆Ⅳ两种病毒复合侵染，复合侵染率高达70％，其它3份分别受TYLCCNV或M”删的单独侵染，可见田间自然发生的双生病毒复合侵染现象十分普遍。关键词：四川；锦葵；双生病毒；卫星DNAp；基因组结构；复

7、合侵染nAbs仃actIdentificationandV_ariabili锣AnalysisofGeminiViruseson朋a加矽以w枷minSichuanProvince矽以WZⅣDr口lnSlCnUanrrOVlnCeCandidate：ZhangmgSuper、，isor：Pro￡QillgLillgAbstractG锄iIli访ms懿a∞tlleoIllyplantvirus鹤ch删丽zedbyha访ngacircul盯咖四e-s仃趾dedssDNAg饥omepackagedwiⅡlin觚i衄edicosalledralpanicles．MoStof

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