调控dlc-1和fak对卵巢癌细胞ovcar-3的影响

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1、ApaperpresentedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofDoctorTheeffectofDLC．1andFAKregulatedtoovariancancercellOVCAR．3ThemajorprogramofMedicalScienceandTechniqueFoundationProjectofHenanProvinceByHuinaLiuSupervisor：Prof．HuirongShiDepartmentofGynecologyandObstetricsTheFirs

2、tAffiliatedHosipitalofZhengzhouUniversityMay2012，原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留

3、或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日摘要调控DLC．1和FAK对多日巢癌细胞OVCAR-3的影响博士研究生导师刘惠娜史惠蓉教授摘要研究表明，卵巢恶性肿瘤占女性生殖道恶性肿瘤的22．9％，近年来卵巢癌的发病率呈上升的趋

4、势，40年来增加了3倍。在妇女生殖道癌中，卵巢癌是造成死亡原因最高的，也是对女性生命及健康威胁最大的一种疾病。虽然卵巢癌手术和化学疗法有了长足的进展，但其预后仍差，尤其是晚期患者的5年生存率仍无明显改善。寻找治疗卵巢癌的新方法仍是一任重而道远的任务。肝癌缺失基因1(deletedinlivercancer-1，DLC．1)是近期国内外学者们发现的重要抑癌基因之一，DLC．1在人类多种组织中均有表达，而在多种肿瘤组织中通常呈低表达或不表达。FAK即粘着斑激酶(focaladhesionkinase，FAI()，是一种酪氨酸激酶，

5、在粘着斑上被激活，在人类多种肿瘤中FAK的表达增加或发生磷酸化，这种变化可导致侵袭性肿瘤细胞的表达和转移机会增加，从而促进肿瘤的发生和转移。FAK和DLC．1在卵巢癌研究中的新发现和在肿瘤中所起的重要作用，使其作为卵巢肿瘤的两个有潜在价值的候选基因成为可能，期望二者可用于卵巢癌的早期诊断、预后判断等，有望成为卵巢癌治疗的新靶点。国外学宅rraiYoungKim等的研究已经发现在肝癌细胞中DLC．1表达可引起FAK的去磷酸化，能导致FAK的失活，阻止黏着斑的形成，降低肿瘤细胞的黏附性，使肿瘤细胞凋亡，起到抑制肿瘤发生的作用。故我

6、们的前期实验研究选择了F肿DLC．1为研究对象，研究它们在卵巢癌中的发病机制，实验中我们研究了单独表达DLC．1基因对卵巢癌OVCAR-3细胞的影响，其中包括DLC．1对FAK、JAN等的影响，关于DLC．1、FAK基因双重作用对卵巢癌影响的研究尚未见报道。目前常用的一种新的肿瘤基因治疗方法是基因转染技术，该方法能够在基因水平上纠正异常细胞的遗传缺陷，从最根本上改变癌细胞的遗传性。RNA干扰技术(RNAintering，siRNA或RNAi)是近期发现的一种高效而又特异性强的基摘要因沉默技术，能特异性地沉默靶基因在细胞中的表达

7、，在抗癌治疗和研究基因功能方面发挥着重要作用。本课题通过检澳I]DLC-1、p-FAK在卵巢正常组织及癌组织中的表达，分析了二者与卵巢上皮性癌的发生、转移、浸润和预后的关系。但上调DLC．1同时下调FAK是否对控制卵巢癌的发生、发展、浸润、转移等有更好的作用尚不清楚。OVCAR．3是一不表达或低表达DLC．1的人卵巢癌多药耐药细胞系，本文利用基因转染技术上调OVCAR．3中的DLC．1、利用RNA干扰技术下调OVCAR-3中的FAK，探索在卵巢癌细胞株OVCAR-3qb单一上调DLC．1、单一下调FAK、上调DLC．1同时下调

8、FA硒c寸该细胞各种生物学行为的影响，为开辟卵巢癌多靶点基因治疗提供新线索。方法第一部分40例正常卵巢组织及70例卵巢上皮性癌组织中的DLC．1和p-FAK蛋白的表达情况应用免疫组织化学方法检测。第二部分1．构建FAK基因的siRNA载体重组子。2．构建DLC．1基因表达载体